臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：超敏反應(yīng)及其檢測(cè)

1、1 超敏反應(yīng)及其檢測(cè) 2概念超敏反應(yīng)(Hypersensitivity)即變態(tài)反應(yīng)（allergy）：是已致敏的機(jī)體再次受到相同抗原刺激后發(fā)生的一種以生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的異常免疫應(yīng)答。由此引起的疾病為超敏反應(yīng)性疾病。引起超敏反應(yīng)的抗原物質(zhì)稱(chēng)為變應(yīng)原（Allergens）3分型I型 速發(fā)型超敏反應(yīng)型 細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型超敏反應(yīng)型 免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)型 遲發(fā)型超敏反應(yīng)4Type hypersensitivity特點(diǎn)發(fā)生機(jī)制臨床常見(jiàn)疾病免疫學(xué)檢驗(yàn)5特點(diǎn)發(fā)作快、消退也快常引起生理功能紊亂，但無(wú)嚴(yán)重組織損傷由特異性IgE介導(dǎo),無(wú)補(bǔ)體參與有明顯個(gè)體差異和遺傳素質(zhì)主要病變?yōu)槊?xì)血管

2、擴(kuò)張、通透性增加、平滑肌收縮6發(fā)生機(jī)制 7肥大細(xì)胞脫顆粒 8臨床常見(jiàn)疾病過(guò)敏性休克 藥物過(guò)敏性休克、血清過(guò)敏性休克皮膚變態(tài)反應(yīng) 皮膚尋麻疹、濕疹、血管性水腫消化道變態(tài)反應(yīng) 惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉呼吸道變態(tài)反應(yīng) 支氣管哮喘和變應(yīng)性鼻炎9免疫學(xué)檢驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn) 皮膚試驗(yàn)（皮內(nèi)、挑刺） 肥大細(xì)胞活性+IgE（肥大細(xì)胞結(jié)合的）體外試驗(yàn) IgE測(cè)定（總IgE、特異性IgE）、吸入物變應(yīng)原過(guò)篩試驗(yàn) 、相關(guān)細(xì)胞及其它因素測(cè)定 沒(méi)有一種單一的試驗(yàn)?zāi)鼙ＷC其結(jié)果的準(zhǔn)確，體內(nèi)和體外試驗(yàn)互為補(bǔ)充，以得到準(zhǔn)確的特異性診斷。10皮膚試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)（intracutaneous test）: 是我國(guó)目前應(yīng)用最廣泛的一種試驗(yàn)方法。

3、將試驗(yàn)用變應(yīng)原提取液和對(duì)照液各0.02ml分別用皮試針頭注入皮內(nèi)，使局部形成直徑23mm的圓形皮丘。反應(yīng)須觀察1520分鐘，根據(jù)風(fēng)團(tuán)、紅暈大小判定結(jié)果。11皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn) 將變應(yīng)原和對(duì)照液分別滴于試驗(yàn)部位皮膚（前臂掌側(cè)）用點(diǎn)刺針垂直刺入皮膚表層，以刺破皮膚而不出血為度。15分鐘后觀察結(jié)果。安全、易于操作、臨床相關(guān)性好，推薦為最佳皮膚試驗(yàn)方法陽(yáng)性反應(yīng)：紅暈 12I型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)程度 皮內(nèi)試驗(yàn) 挑刺試驗(yàn) 無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照 無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照 + 風(fēng)團(tuán)35mm,紅暈對(duì)照,20mm,無(wú)風(fēng)團(tuán) + 風(fēng)團(tuán)1015mm,伴紅暈 紅暈伴風(fēng)團(tuán) + 風(fēng)團(tuán)15mm,紅暈伴偽足 紅暈伴偽足和風(fēng)團(tuán) 13

4、皮試應(yīng)用：尋找變應(yīng)原預(yù)防藥物或疫苗過(guò)敏評(píng)價(jià)：屬于活體內(nèi)試驗(yàn)，能反映機(jī)體各種因素綜合作用的實(shí)際免疫狀況。操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可信度大注意：若已知對(duì)某種物質(zhì)高度過(guò)敏，則不宜再做皮試；身體虛弱、哮喘發(fā)作期及不合作的兒童也不宜做皮試。皮試時(shí)應(yīng)配備常規(guī)的搶救藥品和設(shè)施。14血清IgE的檢測(cè)總IgE測(cè)定方法：雙抗體夾心法( ELISA、化學(xué)發(fā)光法等)影響總IgE水平的因素：年齡、性別、種族、寄生蟲(chóng)感染等總IgE水平高不一定是過(guò)敏過(guò)敏者總IgE水平不一定高15特異性IgE測(cè)定 特異性IgE（Specific IgE,sIgE）是指能與某種變應(yīng)原特異性結(jié)合的IgE。需用純化的變應(yīng)原去檢測(cè)相應(yīng)的IgE抗體，是體外確定

5、變應(yīng)原的重要方法。16方法放射性變應(yīng)原吸附試驗(yàn)（radioallegosorbent test，RAST） 酶聯(lián)免疫測(cè)定法 免疫印跡測(cè)定法CAP變應(yīng)原檢測(cè)系統(tǒng)（CAP system） 17RAST： 載體-過(guò)敏原+待檢血清 Ag-IgE+同位素標(biāo)記的抗人IgE固相放射性計(jì)數(shù)與標(biāo)本IgE含量成正比 特異性強(qiáng)、敏感性高、影響因素少、對(duì)患者安全、與皮試和支氣管激發(fā)試驗(yàn)的符合率高、有助于尋找過(guò)敏原ELISA：原理同RAST，標(biāo)記物改為酶標(biāo)記的抗人IgE。國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多。18CAP system瑞典Pharmacia公司推出的一種根據(jù)RAST原理設(shè)計(jì)的新型全自動(dòng)檢測(cè)血清特異性IgE的熒光固相免疫檢測(cè)系統(tǒng)。

6、 CAP是一個(gè)很小的塑料帽狀物，內(nèi)置纖維素粒（具有多孔性、彈性和親水性 ）單價(jià)變應(yīng)原CAP：只結(jié)合一種變應(yīng)原多價(jià)變應(yīng)原CAP：同時(shí)結(jié)合幾種變應(yīng)原19ImmunoCAP圖28-3 CAP的外形20 變應(yīng)原CAP+待測(cè)血清和IgE標(biāo)準(zhǔn)品 -半乳糖苷酶標(biāo)記的抗人IgE 4-甲基傘形酮-半乳糖苷 熒光分光光度計(jì)讀取吸光 值 熒光強(qiáng)度與sIgE呈線形關(guān)系 整個(gè)檢測(cè)步驟，簡(jiǎn)便、快速，敏感性高，可信性強(qiáng)。 21嗜酸粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白（ECP）的測(cè)定方法同CAP system測(cè)定sIgE，不同的是CAP中包被的不是變應(yīng)原，而是抗ECP抗體 ECP反映了嗜酸粒細(xì)胞激活的程度及其分泌毒性蛋白的能力，可作為監(jiān)測(cè)氣道炎

7、癥、指導(dǎo)哮喘抗炎治療的指標(biāo) 22Type hypersensitivity &特點(diǎn)&發(fā)生機(jī)制&臨床常見(jiàn)疾病&免疫學(xué)檢驗(yàn)23特點(diǎn)抗體（主要為IgG或IgM類(lèi)）與靶細(xì)胞表面抗原結(jié)合，在補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下，導(dǎo)致靶細(xì)胞損傷或破壞。 靶細(xì)胞表面抗原：同種異型抗原、共同抗原、變性的自身抗原、外來(lái)抗原。24發(fā)生機(jī)制 細(xì)胞膜固有抗原或吸附的抗原半抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體IgG或IgM抗體結(jié)合細(xì)胞表面抗原激活補(bǔ)體調(diào)理吞噬ADCC刺激或阻斷作用溶解破壞靶細(xì)胞靶細(xì)胞功能紊亂2526臨床常見(jiàn)疾病輸血反應(yīng)溶血性輸血反應(yīng) ABO血型不符的輸血非溶血性輸血反應(yīng) 反復(fù)輸入含異型HLA血液 新生兒溶血癥母胎Rh血型不符

8、 母胎ABO血型不符 免疫性血細(xì)胞減少癥 藥物過(guò)敏性血細(xì)胞減少癥 自身免疫性溶血性貧血 抗腎小球基底膜型腎小球腎炎和風(fēng)濕性心肌炎 自身免疫性甲亢 2728 2930II型超敏反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)Rh抗體的檢測(cè):酶介質(zhì)法抗球蛋白檢測(cè): 直接Coombs試驗(yàn):直接檢測(cè)紅細(xì)胞表面不完全抗體(檢測(cè)紅細(xì)胞是否已致敏) 間接Coombs試驗(yàn):用已知不完全抗體檢測(cè)紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原,或用已知抗原的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢血清中相應(yīng)的不完全抗體.31 直接法Coombs試驗(yàn)RBC為Rh+7S的IgG體內(nèi)發(fā)生+抗IgG體外測(cè)試抽血作用：檢測(cè)紅細(xì)胞表面結(jié)合的不完全抗體。臨床意義：新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血的診斷。32間

9、接法Coombs試驗(yàn)RBC為Rh+ 受檢血清(不完全抗體?)+抗IgG作用：檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體。臨床意義：輸血前的交叉配血、不相溶輸血后的抗體檢測(cè)。檢測(cè)母體 Rh（D）抗體有助于及早發(fā)現(xiàn)及避免新生兒溶血癥。33Type hypersensitivity 特點(diǎn)發(fā)生機(jī)制臨床常見(jiàn)疾病 免疫學(xué)檢驗(yàn)34特點(diǎn)致敏誘發(fā)的抗體與細(xì)胞外游離抗原結(jié)合后，形成中等分子可溶性免疫復(fù)合物（immune complex,IC）沉積于全身或局部血管壁基底膜，激活補(bǔ)體，引起以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)和組織損傷。故此型又稱(chēng)為免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)35發(fā)生機(jī)制 中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)釋放生物活性介質(zhì)激活凝血系統(tǒng)釋放

10、血管活性胺類(lèi)中分子可溶性IC沉積于組織激活補(bǔ)體系統(tǒng)產(chǎn)生C3a、C5a、C3b嗜堿粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞脫顆?；罨“逖軆?nèi)皮細(xì)胞間隙增大吞噬免疫復(fù)合物、釋放溶酶體酶形成微血栓血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大血管通透性增加水腫組織炎性損傷局部缺血、出血水腫局部或全身免疫復(fù)合物病36臨床常見(jiàn)疾病局部免疫復(fù)合物病 Arthus反應(yīng) 人類(lèi)局部過(guò)敏反應(yīng) 全身免疫復(fù)合物病 血清病（serum sickness） 急性免疫復(fù)合物型腎小球腎炎 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 37免疫學(xué)檢驗(yàn)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè) 組織固定免疫復(fù)合物的檢測(cè) 免疫復(fù)合物檢測(cè)的意義及應(yīng)用 38循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物是指存在于血液中的IC 抗

11、原特異性檢測(cè)技術(shù)：檢測(cè)已知抗原與相應(yīng)抗體形成的IC難以常規(guī)應(yīng)用非抗原特異性檢測(cè)技術(shù)：檢測(cè)血清中IC的總量，并不考慮形成IC的抗原性質(zhì) 39物理測(cè)定法（PEG比濁法 ）補(bǔ)體相關(guān)測(cè)定法（C1q固相法 ）抗球蛋白測(cè)定法（mRF固相抑制試驗(yàn) ）細(xì)胞技術(shù)測(cè)定法（Raji細(xì)胞試驗(yàn) ）40 41PEG法簡(jiǎn)便易行，敏感度20mg/LHAHG。但不能反映小分子IC的情況，結(jié)果易受多種大分子蛋白質(zhì)的干擾及溫度影響，故特異性和重復(fù)性較差；低密度脂蛋白高球蛋白血癥和標(biāo)本反復(fù)凍融也可引起濁度增加，應(yīng)予注意。42C1q固相法 43C1q固相法敏感性高，達(dá)0.1 mg/LHAHG，重復(fù)性好C1q制品不易精制，且純品不穩(wěn)定尚

12、需注意的是，待檢血清需先5630min處理，以滅活其中的補(bǔ)體和破壞已與CIC結(jié)合的C1q，空出補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)。44mRF固相抑制試驗(yàn) 固相mRF + 血清標(biāo)本 同位素標(biāo)記的熱聚合IgG 固相中放射性與CIC的含量呈負(fù)相關(guān)本法敏感性較高，但mRF來(lái)源困難，操作費(fèi)時(shí)，難于常規(guī)應(yīng)用 45Raji細(xì)胞試驗(yàn)固相Raji細(xì)胞 + 標(biāo)本 離心沉淀熒光標(biāo)記抗人IgG或同位素標(biāo)記抗人IgG 測(cè)沉淀細(xì)胞的放射活性方法簡(jiǎn)單、敏感性高、特異性強(qiáng)，但易受血清游離IgG影響，且Raji細(xì)胞 培養(yǎng)較困難。46Type hypersensitivity 特點(diǎn) 發(fā)生機(jī)制 臨床常見(jiàn)疾病 免疫學(xué)檢驗(yàn)47特點(diǎn)由致敏T細(xì)胞再次接觸相應(yīng)抗原后所致的以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)。反應(yīng)發(fā)生遲緩，一般在4872小時(shí)反應(yīng)才達(dá)高峰，無(wú)抗體、補(bǔ)體參與，過(guò)程同細(xì)胞免疫應(yīng)答。細(xì)胞免疫缺陷者或無(wú)胸腺的裸鼠不會(huì)發(fā)生該型變態(tài)反應(yīng)。48發(fā)生機(jī)制抗原機(jī)體致敏淋巴細(xì)胞TDTHCTL單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)清除抗原損傷自身細(xì)胞免疫遲發(fā)型超敏反應(yīng)