DB11-T1432-2017生物防治產(chǎn)品應(yīng)用技術(shù)規(guī)程舞毒蛾核型多角體病毒

1、ICS 65.020DB11B 15DB11/T 14322017備案號(hào)：56066-2017北京市地方標(biāo)準(zhǔn)DB11/T 14322017Th物防治產(chǎn)品應(yīng)用技術(shù)規(guī)程舞毒蛾核型多角體病毒Technical regulations for applying of biocontrol production Lymantria dispar L. nuclear polyhedrosis virus2017 - 06 - 29 發(fā)布2017 - 10 - 01 實(shí)施北京市質(zhì)量技術(shù)1 監(jiān)督局發(fā) 布DB11/T 14322017前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由北京市園林綠化

2、局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由北京市園林綠化局組織實(shí)施。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市西ft試驗(yàn)林場(chǎng)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：梁洪柱、陳倩、寧少華、趙洪林、趙京芬、張寶增、安玉濤、蔣薇、成新新、李學(xué)燕、張博、焦進(jìn)衛(wèi)。IDB11/T 14322017Th物防治產(chǎn)品應(yīng)用技術(shù)規(guī)程 舞毒蛾核型多角體病毒范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了舞毒蛾亞洲亞種核型多角體病毒（Lymantria dispar asiatica Vnukovskij Nuclear Polyhedrosis Virus，簡(jiǎn)稱LdNPV）制劑的制備和應(yīng)用、防治效果調(diào)查等技術(shù)內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于北京地區(qū)利用舞毒蛾亞洲亞種幼蟲(chóng)的防治。術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。2.

3、1舞毒蛾亞洲亞種 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij屬鱗翅目（Lepidoptera）毒蛾科（Lymantriidae），是重要的森林害蟲(chóng)，其識(shí)別特征參見(jiàn)附錄A。北京地區(qū)為亞洲亞種，該蟲(chóng)以幼蟲(chóng)為害葉片，寄主可達(dá)500余種，危害多種林木、果樹(shù)等，主要危害植物種類參見(jiàn)附錄B。2.2多角體 polyhedral inclusion body(PIB)包埋病毒粒子的包涵體，用于表示病毒制備和應(yīng)用過(guò)程中的計(jì)數(shù)。2.3舞毒蛾核型多角體病毒 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij nuclear polyhedrosis virus一種

4、具有較高宿主特異性的昆蟲(chóng)病毒，屬于桿狀病毒科雙環(huán)狀DNA病毒，病毒粒子無(wú)規(guī)則地包埋在多角體中。2.4標(biāo)準(zhǔn)枝法 branch sampling method用于抽樣調(diào)查舞毒蛾幼蟲(chóng)發(fā)生情況的一種方法。即低齡幼蟲(chóng)期，在樹(shù)冠按上、中、下三個(gè)部位，東、西、南、北、中五個(gè)方位，分別隨機(jī)抽取50cm長(zhǎng)的樣枝1個(gè)，調(diào)查各樣枝上舞毒蛾幼蟲(chóng)數(shù)量。2.5阻隔法 blocking method利用4齡以上舞毒蛾幼蟲(chóng)具有上下樹(shù)的特性，用塑料薄膜、塑料膠帶纏繞樹(shù)干胸徑處從而阻隔幼蟲(chóng)的方法，圍環(huán)寬度不小于10cm。LdNPV 制劑的制備和應(yīng)用LdNPV 制劑的制備1DB11/T 14322017LdNPV 制劑的制備參見(jiàn)附

5、錄 C。防治對(duì)象舞毒蛾亞洲亞種幼蟲(chóng)。防治適期最佳防治齡期為 13 齡幼蟲(chóng)。在正常年份，3 月中旬舞毒蛾亞洲亞種幼蟲(chóng)陸續(xù)孵化，3 月中旬4 月中旬為最佳防治時(shí)期；也可依據(jù)常見(jiàn)植物的物候期預(yù)測(cè)最佳防治時(shí)期，該蟲(chóng) 13 齡幼蟲(chóng)發(fā)生期與物候關(guān)系參見(jiàn)附錄 D。使用劑量防治 13 齡期幼蟲(chóng)，每 hm2 用 1.51012 PIB，即 1500mlLdNPV 制劑；防治 4 齡以上幼蟲(chóng)，用量加倍，每 hm2 用 3.01012PIB，即 3000mlLdNPV 制劑。施用方法使用時(shí)，用水稀釋制劑，均勻噴灑到樹(shù)葉上。具體施用方法見(jiàn)表 1。表 1 舞毒蛾亞洲亞種核型多角體病毒制劑施用方式及施用濃度噴霧類型地面噴

6、霧/飛機(jī)噴霧防治 13 齡幼蟲(chóng)稀釋倍數(shù)防治 4 齡以上幼蟲(chóng)稀釋倍數(shù)常量噴霧地面噴霧1000500飛機(jī)噴霧3015低量噴霧地面噴霧10050飛機(jī)噴霧104超低容量噴霧地面噴霧41.5防治效果調(diào)查調(diào)查指標(biāo)檢查校正蟲(chóng)口減退率表示防治效果。校正蟲(chóng)口減退率越高，表示防治效果越好。調(diào)查時(shí)間制劑噴施前調(diào)查一次，噴施后第20d再調(diào)查一次。調(diào)查方法2DB11/T 14322017在幼蟲(chóng)發(fā)生期，針對(duì)舞毒蛾危害的樹(shù)木進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查表參見(jiàn)附錄E。選擇有代表性的地塊設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)地。標(biāo)準(zhǔn)地面積一般為0.2hm2。人工林每100hm2設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)地1塊，天然林每300hm2設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)地1塊。在標(biāo)準(zhǔn)地內(nèi)隨機(jī)選取20株樹(shù)為標(biāo)準(zhǔn)株，采用標(biāo)

7、準(zhǔn)枝法和阻隔法調(diào)查防治前后的幼蟲(chóng)數(shù)量。計(jì)算公式蟲(chóng)口減退率、校正蟲(chóng)口減退率計(jì)算方法分別見(jiàn)公式（1）、（2）：蟲(chóng)口減退率（%）=防治前活蟲(chóng)數(shù)-防治后活蟲(chóng)數(shù) 100（1）防治前活蟲(chóng)數(shù)校正蟲(chóng)口減退率（%）=防治區(qū)蟲(chóng)口減退率-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率（2）100-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率3DB11/T 14322017附錄A（資料性附錄）舞毒蛾亞洲亞種的形態(tài)特征卵圓形，兩側(cè)稍扁，直徑 1.3mm；初期杏黃色，以后轉(zhuǎn)為褐色；數(shù)百粒到千余粒卵產(chǎn)在一起，成為一卵塊，上被黃褐色絨毛。幼蟲(chóng)1 齡幼蟲(chóng)頭寬 0.5mm，體黑褐色，剛毛亦長(zhǎng)，剛毛中間具有呈泡狀擴(kuò)大的毛，稱為“風(fēng)帆”，是減輕身體重量易被風(fēng)吹搖擺進(jìn)行擴(kuò)散的構(gòu)造。2 齡幼蟲(chóng)

8、頭寬 1.0mm、黑色，體黑褐色，胴部顯現(xiàn)出兩塊黃色斑紋。3 齡幼蟲(chóng)頭寬1.8mm，頭黑色，胴部花紋增多。4 齡幼蟲(chóng)頭寬2.9mm，頭暗褐色，出現(xiàn)兩條黑斑紋。5 齡幼蟲(chóng)頭寬 4.4mm，頭黃褐色，兩條黑斑紋更鮮明。老熟幼蟲(chóng)體長(zhǎng) 50mm70mm，頭寬 6mm、黃褐色，具“八”字形灰黑色條紋；背線灰黃色，亞背線、氣門上線及氣門下線部位各體節(jié)均有毛瘤，共排成 6 縱列，背面兩側(cè)毛瘤上的剛毛短、黑褐色，氣門下線一列毛瘤上的剛毛最長(zhǎng)、灰褐色，背上兩列毛瘤色澤鮮艷，前 5 對(duì)為藍(lán)色，后 7 對(duì)為紅色。蛹體長(zhǎng) 19mm34mm。紅褐色或黑褐色，被有銹黃色毛叢。成蟲(chóng)雌雄異型。雄蛾體長(zhǎng)約 16 mm21mm，

9、翅展 37 mm54mm；頭部黃褐色，復(fù)眼黑色，下唇須向前伸，第 2 節(jié)長(zhǎng)，第 3 節(jié)短；后足脛節(jié)有 2 對(duì)距；前翅暗褐色或褐色，有深色鋸齒狀橫線，中室中央有 1 個(gè)黑褐色點(diǎn)，橫脈上有一彎曲形黑褐色紋，前、后翅反面黃褐色。雌蛾體長(zhǎng)22mm30mm，翅展58 mm 80mm 左右；前翅黃白色，橫脈明顯具有“”形黑褐色斑紋一個(gè)，其他斑紋與雄蛾近似，前后翅外緣每?jī)擅}間有 1 個(gè)黑褐色斑點(diǎn)；腹部肥大，末端著生黃褐色毛叢。4DB11/T 14322017附錄B（資料性附錄）北京地區(qū)舞毒蛾主要危害植物種類北京地區(qū)舞毒蛾主要危害植物種類見(jiàn)表B.1表 B.1 北京地區(qū)舞毒蛾主要危害植物種類（以拉丁學(xué)名為序）寄

10、主中文名稱寄主拉丁學(xué)名復(fù)葉槭Acer negundo L.杏Armeniaca vulgaris Lam.白樺Berula platyphylla Suk.構(gòu)樹(shù)Broussonetia papyifera Linn.黃楊Buxus sinica (Rehd.et Wils) Cheng ex M.Cheng黃櫨Cotinus coggygria Scop.ft楂Crataegus pinnatifida Bunge柿Diospyros kaki L.f.銀杏Ginkgo biloba L.核桃Juglans regia L.華北落葉松Larix principis-rupprechtii Ma

11、yr蘋果屬M(fèi)alus Mill.桑Morus alba L.加楊Populus X canadensis Moench櫻桃Prunus pseudocerasus Lindl.李Prunus salicina Lindl.榆葉梅Prunus triloba Lindl.楓楊Pterocarya stenoptera C. DC.蒙古櫟Quercus mongolica Fisch. ex Ledeb麻櫟Quercus acutissima Carruth.柳屬Salix L.蒙椴Tilia mogolica Maxim.榆屬Ulmus L.5DB11/T 14322017附錄C（資料性附錄）

12、制劑制備LdNPV的室內(nèi)增殖室內(nèi)條件溫度 25，光照時(shí)間與黑暗時(shí)間比例為 14:10，光源為白熾燈。飼料為人工飼料。飼養(yǎng)工具透明塑料養(yǎng)蟲(chóng)杯，底直徑3.5cm，頂直徑5.0cm，杯高5cm。增殖方法在養(yǎng)蟲(chóng)杯內(nèi)放入約 200 粒已消毒即將孵化的舞毒蛾卵粒，每 3d 更換一次新鮮飼料和養(yǎng)蟲(chóng)杯，并將幼蟲(chóng)分至 40 頭/杯，待幼蟲(chóng)發(fā)育至 3 齡末時(shí)，開(kāi)始喂飼帶毒飼料，將 1ml 濃度為 1.0107PIB/ml 的 LdNPV 液體倒入養(yǎng)蟲(chóng)杯內(nèi)的人工飼料表面，陰干后待其取食，5d 后更換帶毒飼料，及時(shí)清理養(yǎng)蟲(chóng)杯內(nèi)蟲(chóng)糞， 防止蟲(chóng)體感染雜菌。待 80%幼蟲(chóng)死亡時(shí)，收集所有幼蟲(chóng)，-10長(zhǎng)期貯存。LdNPV的提

13、純LdNPV的提取將 C.1.4 中收集的幼蟲(chóng)加 2 倍無(wú)菌水稀釋，在高速組織搗碎機(jī)上，粉碎 3min 后取出，先用三層紗布初步過(guò)濾，然后再用 80 目篩子進(jìn)一步過(guò)濾，濾液用 16000r/min 離心機(jī)離心 15min，濾液分為三層， 上層清液為水，棄之；中間淺褐色沉淀為病毒粗提物，保留；底部黑色沉淀為雜質(zhì)，棄之。粗提物的測(cè)定取 1g 病毒粗提物稀釋至 1000 倍，然后取 1ml 稀釋液滴于血球計(jì)數(shù)板上，蓋蓋玻片，在顯微鏡 1540 倍狀態(tài)下計(jì)數(shù)，對(duì)角線取樣，共取 80 小格，顆粒邊緣不在同一小格內(nèi)的不計(jì)，按公式 C.1 計(jì)算粗提物內(nèi) PIB 含量。如果粗提物含量低于 1.01011PIB

14、/ml，表明病毒粗提物中雜質(zhì)含量過(guò)高，應(yīng)加 2 倍無(wú)菌水混勻，重新離心提純，除雜質(zhì)，直至含量合格。每克 PIB 含量 = 平均每格顆粒體數(shù)40000001000（C.1）注：1000為稀釋倍數(shù)。6DB11/T 14322017LdNPV制劑的配制配制將 C.2.1 中含量合格的 LdNPV 加 7%的鹽水，與 50%中性甘油混合，三者重量比為 1:49:50，制成甘油病毒懸浮液。LdNPV制劑的質(zhì)量檢測(cè)用多點(diǎn)抽樣的方法，取1ml C.3.1中配制的甘油病毒懸浮液，按C.2.2中方法測(cè)定， LdNPV制劑中PIB含量在1.0109PIB/ml以上，為合格。LdNPV制劑的調(diào)制將上述甘油病毒懸浮液

15、加無(wú)菌水調(diào)節(jié)濃度至1.0109PIB/ml。LdNPV制劑的運(yùn)輸和貯存運(yùn)輸25以下，避免受熱、暴曬，避免紫外線照射。貯存密封、避光、避紫外線照射。04條件下保質(zhì)期 2 年；25以下保質(zhì)期 6 個(gè)月。7DB11/T 14322017附錄D（資料性附錄）舞毒蛾亞洲亞種 13 齡幼蟲(chóng)發(fā)Th期與常見(jiàn)植物物候關(guān)系表舞毒蛾亞洲亞種13齡幼蟲(chóng)發(fā)生期與常見(jiàn)植物物候關(guān)系表D.1。表D.1舞毒蛾亞洲亞種13齡幼蟲(chóng)發(fā)Th期與常見(jiàn)植物物候關(guān)系表物候植物中文名稱寄主拉丁學(xué)名物候毛白楊Populus tomentosa Carr.落花期（也稱落果期）榆樹(shù)Ulmus pumila L.落果期紫藤Wisteria sinensisi (Sims) Sweet開(kāi)花初期杏Armeniaca vulgaris Lam.始花期8DB11/T 14322017附錄