DB11-T1429-2017動物養(yǎng)殖場消毒效果評價規(guī)范

1、ICS 65.020.20B 41備案號：56063-2017DB11北京市地方標準DB11/T 14292017動物養(yǎng)殖場消毒效果評價規(guī)范Regulation of disinfectant effect evaluation of farms2017 - 06 - 29 發(fā)布2017 - 10 - 01 實施北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB11/T 14292017目次前言II范圍1規(guī)范性引用文件1樣品采集1檢測2檢測數(shù)據(jù)處理3檢測結(jié)果判定4IDB11/T 14292017前言本標準按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標準由北京市農(nóng)業(yè)局提出并歸口。本標準由北京市農(nóng)業(yè)局組織實施。本標

2、準起草單位：北京市獸藥監(jiān)察所、北京農(nóng)學院、北京市動物疫病預防控制中心、北京市實驗動物管理辦公室。本標準主要起草人：杜繼紅、呂濤、劉鈞、崔德鳳、劉曉冬、李根平、周德剛、張永紅、張小飛、馬志軍、任偉、劉文菊、沈紅、孫志文、王亞芳、王海良、孫化一。IIDB11/T 14292017動物養(yǎng)殖場消毒效果評價規(guī)范范圍本標準規(guī)定了動物養(yǎng)殖場消毒后樣品采集、檢測、檢測數(shù)據(jù)處理和檢測結(jié)果判定的方法。本標準適用于北京地區(qū)畜禽養(yǎng)殖場和普通級實驗動物養(yǎng)殖場。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用

3、于本文件。GB 4789.2食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定GB/T 18204.32013公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分：空氣微生物樣品采集舍內(nèi)物體表面樣品時間分別于消毒處理前后 15 min30 min(或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時間自定）進行采樣。面積被采面積 100 cm2的取全部表面；被采面積 100 cm2的至少要取 100 cm2。采樣點采樣區(qū)域包括舍內(nèi)墻壁和設(shè)備設(shè)施（籠具、水線、料槽）。墻壁選擇 4 點（東、南、西、北墻各 1點），距地面垂直高度為 0.8 m 1.5 m，分別位于墻壁的中央平整處，避開通風和降溫設(shè)施；籠具選擇 4 點，位于整體中央平整處；水線選擇

4、均勻分布 4 點，位于整體中央平整處；料槽選擇 4 點，位于槽的外壁中央平整處。方法將邊長 10 cm 的正方形規(guī)板用火焰滅菌后，放置于物品表面，用蘸取適量滅菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)板范圍內(nèi)橫、豎各 5 次滾動涂抹取樣(同一采樣拭子不應在同一表面重復涂抹)，無菌操作放入裝有 10 mL含適宜中和劑（中和劑的驗證試驗參見附錄A）的滅菌生理鹽水試管中，塞緊試管，標記并記錄。舍內(nèi)空氣樣品時間1DB11/T 14292017分別于消毒處理前和消毒處理后 1530 min（或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時間自定）進行采樣(消毒時要關(guān)閉畜舍門窗)。采樣點采用 5 點法布置測點，布置方法按 GB/T 18204.3

5、2013中附錄A的規(guī)定執(zhí)行，采樣高度根據(jù)養(yǎng)殖場情況設(shè)定，地面養(yǎng)殖動物為地面，籠養(yǎng)動物高度為籠架高度的中央水平面。舍內(nèi)面積不大于 50 m2 的布置 5 個測點，每增加 20 m2 增加 2 個測點。方法采用空氣沉降菌法檢測，按 GB/T 18204.32013進行操作。場區(qū)道路樣品（硬化道路或土路）時間分別于消毒處理前和消毒處理后 1530 min（或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時間自定）進行采樣。采樣點采樣區(qū)域為養(yǎng)殖場主干道，選擇均勻分布 4 點，位于道路中央平整處。方法硬化道路樣品采集方法同 3.1.4；土路為用滅菌不銹鋼勺鏟取道路表面土樣 20 g30 g,裝于含適宜中和劑（中和劑的驗證試驗見

6、附錄A）的滅菌容器內(nèi)，蓋好，標記并記錄。檢測消毒前后樣品檢測舍內(nèi)物體表面用力震蕩采樣試管 10 15 次或用漩渦混合器混勻樣品，使樣品中的細菌洗入滅菌生理鹽水中， 用滅菌吸管或加樣器吸取 0.5 mL，加入裝有 4.5 mL 滅菌生理鹽水的試管中，10 倍系列倍比稀釋，每個稀釋度分別取 0.5 mL 混合液于滅菌平皿，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36 1 培養(yǎng) 48 h 進行細菌計數(shù)。每個稀釋度均需作平行樣，計算樣品平均菌落數(shù)。細菌計數(shù)采用平板計數(shù)法，按 GB 4789.2 的規(guī)定操作。舍內(nèi)空氣將采樣平皿置 36 1 培養(yǎng) 48h 進行細菌計數(shù)，按 GB/T 18204.32013 計算舍內(nèi)空氣平均菌

7、落數(shù)。場區(qū)道路硬路按4.1.1檢測。土路2DB11/T 14292017無菌稱取混合后土樣 10 g，放入 100 mL 滅菌生理鹽水中，用力震蕩，混勻，靜置片刻，待泥沙下沉后，取上清液作 10 倍系列倍比稀釋。根據(jù)土壤中含菌情況，選擇 3 個適宜稀釋度，每個稀釋度分別取 0.5 mL 混合液于滅菌平皿，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36 1 培養(yǎng) 48 h 進行細菌計數(shù)。每個稀釋度均需作平行樣，計算樣品平均菌落數(shù)。對照試驗空白對照將未用的同批培養(yǎng)基置 36 1 培養(yǎng) 48 h，若有菌生長，說明所用培養(yǎng)基有污染，試驗無效，更換后重新進行。陰性對照取 0.5 mL 稀釋液（即滅菌生理鹽水）放入滅菌平皿中，

8、用傾注法倒入培養(yǎng)基，36 1 培養(yǎng) 48 h，若有菌生長，說明所用稀釋液有污染，試驗無效，更換后重新進行。陽性對照標準菌檢測使用標準菌為金黃色葡萄球菌（ATCC6583）和大腸桿菌（ATCC25922）。方法取過夜培養(yǎng)的標準菌懸液，10-7 稀釋后取 0.5 mL 稀釋液放入滅菌平皿中，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36 1 培養(yǎng) 48 h，細菌計數(shù)約為 50 cfu/皿，表明標準菌狀態(tài)良好，所用培養(yǎng)基適用性好。檢測數(shù)據(jù)處理殺菌率的計算平板計數(shù)方法見GB 4789.2，以全部采樣點的平均菌落數(shù)作為樣品平均菌落數(shù)，根據(jù)消毒前后樣品平均菌落數(shù)計算殺菌率，見公式(1)，以殺菌率評價消毒效果。因現(xiàn)場試驗環(huán)境條件

9、變化較多，難以統(tǒng)一，無法測定準確的自然沉降率，故不考慮自然衰亡因素。式中：R殺菌率；N0消毒前樣品平均菌落數(shù)； N1消毒后樣品平均菌落數(shù)。R N0 N1 100%N 0(1)示例：某雞舍，消毒前采樣，舍內(nèi)墻壁上的平均菌落數(shù)為 99 cfu/100m2。用某消毒劑噴霧消毒 30 min 后采樣，菌落數(shù)減至10 cfu/100m2。則該消毒劑處理 30 min 后，舍內(nèi)墻壁上自然菌的殺菌率可按下法計算：R 99 10 100% 89.9% 993DB11/T 14292017數(shù)據(jù)選擇范圍按 GB 4789.2 規(guī)定進行。6檢測結(jié)果判定動物養(yǎng)殖場依據(jù)平均殺菌率判定消毒效果的方法見表1。表1動物養(yǎng)殖場

10、消毒效果評價表評價等級平均殺菌率（%）舍內(nèi)物體舍內(nèi)空氣廠區(qū)道路優(yōu)90.090.090.0良85.090.085.090.085.090.0合格80.084.080.084.080.084.0不合格80.080.080.0注：表內(nèi)為有動物舍的判定標準；除特殊要求外，無動物舍的判定標準，舍內(nèi)空氣平均殺菌率90.0%為合格。4DB11/T 14292017附錄A（資料性附錄）中和劑驗證試驗中和劑驗證試驗方法通過設(shè)定下列實驗來確定所選的中和劑是否合適（見表A.1）。表A.1中和劑驗證試驗方法試驗組別說明問題1. （消毒劑+菌液）+中和劑證明中和劑能否中和殘留消毒劑的抑菌作用2. 中和劑+菌液證明中和劑有無抑菌作用3. （消毒劑+中和劑）+菌液證明消毒劑與