小鼠乳腺癌模型的建立

1、小鼠乳腺癌模型的建立乳腺癌是一種嚴(yán)重危害婦女健康的惡性腫瘤，目前，國(guó)內(nèi)外乳腺 癌發(fā)病率均呈顯著上升趨勢(shì)，在西方發(fā)達(dá)國(guó)家和我國(guó)主要城市女性乳 腺癌發(fā)病率已居?jì)D女惡性腫瘤的首位。與某些惡性腫瘤不同的是，及 時(shí)正確的診斷與干預(yù)能顯著改善乳腺癌患者的生存率及生活質(zhì)量，甚 至能獲得終生治愈的效果。為了探索乳腺癌的生物學(xué)特征和探討新的 治療方法，國(guó)內(nèi)外研究者借助乳腺癌動(dòng)物模型，對(duì)乳腺癌的病因、發(fā) 病機(jī)制、早期診斷和治療等方面開展研究。目前乳腺癌動(dòng)物模型的建立可分為自發(fā)型、誘發(fā)型和移植型三 種，每種方法各有利弊，實(shí)驗(yàn)室使用最多的是移植型。自發(fā)型乳腺癌 模型多采用近交系小鼠，如C3H，其生長(zhǎng)到一定年齡便自然發(fā)

2、生乳腺 腫瘤。這種模型最大的特點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)的人工處理， 其發(fā)生的條件比較自然，與人類患病過(guò)程更為相似。目前此種動(dòng)物模 型是乳腺腫瘤多級(jí)預(yù)防、治療和研究發(fā)病機(jī)制的良好模型。但自發(fā)型 乳腺癌模型生長(zhǎng)緩慢，不易同時(shí)獲得大批病程基本一致的動(dòng)物，觀察 時(shí)間長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)耗費(fèi)大。誘發(fā)型乳腺癌模型是通過(guò)經(jīng)口、涂抹、注射和 埋藏等方法應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使之發(fā)生乳腺癌。用二甲基苯蒽為誘癌 劑誘發(fā)乳腺癌，是應(yīng)用較多的一種方法。這種方法形成的腫瘤與人體 腫瘤增殖動(dòng)力學(xué)基本類似，但誘癌過(guò)程較長(zhǎng)，成功率不高，腫瘤發(fā)生 的潛伏期個(gè)體變異較大，不易同時(shí)獲得病程或腫塊大小均一的模型。 相比之下，移植型動(dòng)物模型克服了上述

3、缺點(diǎn)。迄今，進(jìn)入移植型動(dòng)物 模型實(shí)驗(yàn)研究的人乳腺癌細(xì)胞系有20多種，其中較為常用的WMCF7.MDA. MB-231和MDA.MB-435等。采用移植法建立的乳腺癌模型周期短， 成本低，可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均帶有同樣的腫瘤，生長(zhǎng)速度也較一致，個(gè)體 差異小，無(wú)自發(fā)緩解，成瘤率高，是目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最多的模型。對(duì)此，重點(diǎn)查閱資料關(guān)于移植性乳腺癌動(dòng)物模型制作的具體步驟。材料與方法實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物及分組：取20只昆明鼠隨機(jī)分成入組(10只)，B組(5只)，C 組對(duì)照組(5只)，編號(hào)飼養(yǎng)。試劑：無(wú)菌水，生理鹽水，臺(tái)酚藍(lán)，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲 苯，石蠟等。儀器：離心機(jī)，顯微鏡，計(jì)數(shù)板，電子稱，超凈工作臺(tái)，溫箱，

4、切 片機(jī)等。實(shí)驗(yàn)方法模型建立：取H22腫瘤細(xì)胞，3000轉(zhuǎn)離心分鐘，再用無(wú)菌生理鹽水 洗滌腫瘤細(xì)胞3次，并做適當(dāng)稀釋，取40微升細(xì)胞懸液加入10微升0.4% 臺(tái)酚藍(lán)染色并鏡檢計(jì)數(shù)，制成濃度為3*106個(gè)/ml的腫瘤細(xì)胞懸液，每 只小鼠右腋皮下接種腫瘤細(xì)胞懸液0.2毫升。細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞計(jì)數(shù)液2%冰醋酸溶液。取50微升細(xì)胞懸液加入450 微升的細(xì)胞計(jì)數(shù)液中計(jì)數(shù)。記錄：接種完成后，逐日觀察接種部位有無(wú)感染，腫瘤生長(zhǎng)后有無(wú)自然消退，用游標(biāo)卡尺，每周測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑&和短徑b ,并計(jì)算平均直徑,即r = (a+ b) /2，每天稱量小鼠體重和腫瘤并記錄，繪制曲線。制備組織切片：處死小鼠，將腫瘤組織切成1*1

5、*0.4cm的小塊。將切塊的組織置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，過(guò)夜。固定完成后，倒出固定液，立即換上新鮮的70%乙醇，洗脫兩次， 室溫放置20分鐘，繼而以75%，80%，85%，90%，95%，100%乙醇脫水 各兩次，每次20分鐘。從新鮮二甲苯除去乙醇，放置2次，每次10分鐘。將樣品置于60C溫箱中融化石蠟4次，每次1.5小時(shí)。將準(zhǔn)備好的包埋工具，用一熱玻璃吸管加入融化的石蠟，再用熱鑷 子快速將樣品移至充滿石蠟的模具中，置于室溫，使起完全凝結(jié)。從包埋模具中取出石蠟塊，放于室溫干燥處，切片。討論：實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)的需要導(dǎo)致腫瘤動(dòng)物模型的產(chǎn)生，借以研究人類腫 瘤的病因、發(fā)生、發(fā)展以及治療和預(yù)防。腫

6、瘤動(dòng)物模型可來(lái)自于動(dòng)物 的自發(fā)腫瘤、誘發(fā)腫瘤和移植性腫瘤。一前兩者由于對(duì)動(dòng)物品系要 求嚴(yán)格、實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)或缺少實(shí)驗(yàn)一致性而較少使用。移植性腫瘤動(dòng) 物模型具有特性明確、生長(zhǎng)一致性好、實(shí)驗(yàn)周期短、瘤株分布廣泛、 可反復(fù)復(fù)制等優(yōu)點(diǎn),在腫瘤研究中占有重要地位?？梢浦残阅[瘤，是把 動(dòng)物或人的腫瘤移植到同系、同種或異種動(dòng)物，經(jīng)傳代后，組織類型和 生長(zhǎng)特性已趨穩(wěn)定，并能在受體動(dòng)物中繼續(xù)傳代,又稱為可移植性腫瘤細(xì)胞?？梢浦残阅[瘤移植于同系或同種動(dòng)物，稱為同種移植,是國(guó)內(nèi) 外最常用的腫瘤動(dòng)物模型復(fù)制方法之一。同種移植的優(yōu)點(diǎn)是，可供選 擇使用的細(xì)胞系或細(xì)胞株多，許多細(xì)胞系在世界范圍分布廣泛，并且 這些細(xì)胞的生物學(xué)特性已經(jīng)比較明確，一般都有明確的背景資料，使 一群動(dòng)物同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞,生長(zhǎng)速度一致、個(gè)體差異較小， 成活率高，易于對(duì)照觀察,這些都是便于科研成果相互比較和交流的 有利因素。在接種過(guò)程中，應(yīng)把握注射深度，否則易造成內(nèi)臟損傷。接種 后三天即開始觀察有無(wú)腫瘤形成。本實(shí)驗(yàn)具有周期短、制作方便、成 功率比較高、較好重復(fù)性和穩(wěn)定性的明顯優(yōu)勢(shì)，是一種較為理想的腫 瘤實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，值得推廣。參考文獻(xiàn)：王蘅文.實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)基礎(chǔ)M.北京: