《生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)一》課程教學(xué)大綱

1、生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱課程代碼：BIOT1007課程名稱：生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)（一）英文名稱：Experiments for Biotechnology 實(shí)驗(yàn)室名稱：基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心（省級(jí)）生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室課程學(xué)時(shí)：108實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：108一、本課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的與要求生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)一是生物技術(shù)專業(yè)課程的重要實(shí)踐環(huán)節(jié)。本課程實(shí)驗(yàn)的目的是訓(xùn)練學(xué)生理解生物技術(shù)的基本內(nèi)涵，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，結(jié)合課堂所學(xué)的分子生物學(xué)、基因工程和細(xì)胞工程的專業(yè)基本知識(shí)，自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和路線，培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立思考能力和科研素養(yǎng)，并激發(fā)學(xué)生用于探索創(chuàng)新的精神。通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生掌握PCR技術(shù)、分子克隆技術(shù)、微生物培養(yǎng)的技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

2、、利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物制劑的技術(shù)以及相應(yīng)檢測(cè)鑒定等相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)幫助學(xué)生在實(shí)踐中提高實(shí)驗(yàn)操作技能，以及掌握相關(guān)的基本實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)技術(shù)，從而培養(yǎng)學(xué)生分析和解決問(wèn)題的能力，為學(xué)生畢業(yè)后從事相關(guān)專業(yè)工作打下扎實(shí)的基礎(chǔ)。二、主要儀器設(shè)備及現(xiàn)有臺(tái)套數(shù) 高壓滅菌鍋2 恒溫培養(yǎng)箱3恒溫空氣搖床2 超凈工作臺(tái)2生物安全柜2 烘箱 1恒溫水浴鍋6 酶標(biāo)儀1電子天平4 架盤天平 8微量移液器 60 電動(dòng)移液器 2大容量離心機(jī)（5000rpm）3 高速冷凍離心機(jī) 2超速離心機(jī)1 旋渦混勻器 10蛋白電泳系統(tǒng)2 DNA電泳系統(tǒng) 4凝膠成像儀 2 超微量分光光度計(jì) 1紫外分光光度計(jì)2 可見(jiàn)光分光光度計(jì) 6

3、熒光顯微鏡 1 倒置顯微鏡 1Zeiss濾過(guò)裝置 1 細(xì)胞培養(yǎng)箱 1超純水系統(tǒng) 1 液氮罐 1普通冰箱 2 超低溫冰箱 2三、實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容和學(xué)時(shí)分配序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱目的、要求實(shí)驗(yàn)內(nèi)容學(xué)時(shí)分配實(shí)驗(yàn)類型每組人數(shù)必開(kāi)、選開(kāi)1設(shè)計(jì)引物掌握引物設(shè)計(jì)的方法和原理；熟練使用Primer Premier 5.0軟件。使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)所需的引物9設(shè)計(jì)性3必開(kāi)2擴(kuò)增特異的DNA片段掌握cDNA文庫(kù)的基本知識(shí)；掌握從cDNA文庫(kù)中釣取基因的方法。利用PCR的方法從相應(yīng)的cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增出特異的DNA片段9綜合性3必開(kāi)3構(gòu)建原核表達(dá)載體掌握原核載體構(gòu)建的原理和方法；熟悉多種常用的原核

4、表達(dá)載體的特性。運(yùn)用相應(yīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切指定載體和PCR產(chǎn)物，純化并定量，T4連接酶連接12設(shè)計(jì)性3必開(kāi)4載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌（一）學(xué)習(xí)感受態(tài)菌株的基本知識(shí)；掌握感受態(tài)菌株的制備方法。DH5感受態(tài)菌株的制備BL21感受態(tài)菌株的制備9綜合性3必開(kāi)5載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌（二）掌握轉(zhuǎn)化的基本原理；掌握連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌株的方法。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5感受態(tài)菌株6綜合性3必開(kāi)6載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌（三）掌握篩選陽(yáng)性克隆的方法和原理。煮菌驗(yàn)證，抗性篩選陽(yáng)性克隆9綜合性3必開(kāi)7抽質(zhì)粒鑒定（一）掌握抽提質(zhì)粒的原理和方法。挑陽(yáng)性克隆接菌，搖菌；采用質(zhì)粒抽提試劑盒抽質(zhì)粒9綜合性3必開(kāi)8抽質(zhì)粒鑒定（二）掌握質(zhì)粒鑒定的原

5、理和方法。了解DNA測(cè)序的基本原理和方法。酶切鑒定，運(yùn)用相應(yīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切質(zhì)粒；DNA測(cè)序驗(yàn)證9設(shè)計(jì)性3必開(kāi)9細(xì)胞的培養(yǎng)掌握細(xì)胞工程的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和原理。熟悉細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的操作規(guī)范。細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及凍存12綜合性5必開(kāi)10目的基因與真核表達(dá)載體的連接及轉(zhuǎn)染掌握真核表達(dá)載體的基本知識(shí)；掌握多種常用細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的原理和操作。連接目的基因與真核表達(dá)載體，將連接好的質(zhì)粒采用指定轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染相應(yīng)細(xì)胞12綜合性5必開(kāi)11轉(zhuǎn)染效率的鑒定掌握多種常用報(bào)告基因的檢測(cè)方法。運(yùn)用熒光顯微鏡、western boltting方法檢測(cè)基因表達(dá)情況，確定轉(zhuǎn)染效率12綜合性5必開(kāi)12特異性組織表達(dá)譜分析研究特定基因在

6、各組織中的表達(dá)分布情況。取小鼠各組織，抽提RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，采用RT-PCR技術(shù)鑒定各組織中相關(guān)基因的表達(dá)分布情況。36創(chuàng)新性6選開(kāi)13GMO的檢測(cè)學(xué)習(xí)檢測(cè)食品中轉(zhuǎn)基因成分的方法和原理。取多種待測(cè)食品，采用相應(yīng)方法提取基因組，運(yùn)用qPCR的方法檢測(cè)GMO的含量。36創(chuàng)新性6選開(kāi)14基因診斷學(xué)習(xí)相應(yīng)分子病的基因診斷技術(shù)的原理和方法。根據(jù)給出的疾病，自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線和方法，并對(duì)提供的正常人和病人的樣本進(jìn)行檢測(cè)，得出定性和定量的分析報(bào)告。36創(chuàng)新性6選開(kāi)四、考核方式1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、?shí)驗(yàn)原理和方法、實(shí)驗(yàn)操作步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、計(jì)算與分析以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析與討論，其中實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討

7、論最為關(guān)鍵，討論內(nèi)容可包括實(shí)驗(yàn)原理、結(jié)果分析、注意事項(xiàng)以及成功經(jīng)驗(yàn)和失敗教訓(xùn)等。實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求數(shù)據(jù)具有真實(shí)性、科學(xué)性和原創(chuàng)性。2、考核方式（1）實(shí)驗(yàn)技能操作的考核和實(shí)驗(yàn)基本原理的理論考核。（2）對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中學(xué)生的動(dòng)手能力，實(shí)驗(yàn)態(tài)度，專業(yè)技術(shù)素質(zhì)，科學(xué)態(tài)度，實(shí)驗(yàn)報(bào)告和實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，得出實(shí)驗(yàn)課成績(jī)。（3）創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)將組織專家考核組來(lái)進(jìn)行考核，學(xué)生以答辯的形式匯報(bào)實(shí)驗(yàn)成果，由考核組考核學(xué)生的綜合素質(zhì)，得出實(shí)驗(yàn)課成績(jī)。五、實(shí)驗(yàn)教材、參考書1、教材：生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)一 陸挺、成中芹、王金志、編，2010年。2、參考書：（1）分子克隆實(shí)驗(yàn)指南。美J.薩姆布魯克 D.W.拉塞爾 著 黃培堂等譯，科學(xué)出版社，2002年，第三版。（2）生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用數(shù)據(jù)手冊(cè)。吳冠蕓 潘華珍