大腸菌群計(jì)數(shù)檢驗(yàn)重點(diǎn)

1、大腸菌群計(jì)數(shù)檢驗(yàn)大腸菌群是指一群在37C培養(yǎng)24小時(shí)能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。作為糞便污染指標(biāo)，有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義食品中大腸菌群數(shù)系以每100g（或mL）檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（themostprobablenumber-簡稱MPN）表示。舊國家標(biāo)準(zhǔn)第一法 大腸菌群MPN 計(jì)數(shù)法第二法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法第一天第1、3、5、7小組： 使用第一法（附帶做第二法中，兩個(gè)平板接種），以自來水為樣品。 第2、4、6小組： 使用第二法（附帶做第一法中，3個(gè)試管初發(fā)酵試驗(yàn)），以污水為樣品。第一法：檢樣稀釋與初發(fā)酵試驗(yàn)MPN：表示食品中大腸菌群數(shù)是以每100ML或克檢樣內(nèi)大腸

2、菌群最大可能數(shù)。一般采用9管法.一般樣品25ML（克）+225ML生理鹽水=1：10，從10-1取樣1ML，接種到3管LST（月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯）中。從10-1取樣1ML+9 ML生理鹽水=1：100，從10-2取樣1ML，接種到3管LST中。從10-2取樣1ML+9 ML生理鹽水=1：1000，從10-3取樣1ML，接種到3管LST中。第二法：檢樣稀釋與平板計(jì)數(shù)檢樣稀釋：同上。平板計(jì)數(shù)：1、每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無菌平皿，每皿1mL稀釋樣品，另外一個(gè)平皿加1mL生理鹽水作空白對照。2、及時(shí)將1520mLVRBA（結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂）傾注每個(gè)平皿中。3、待瓊脂凝固后，再加34mLVRBA覆

3、蓋表層。翻轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)。第二天第一法 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，361培養(yǎng)48h2h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽性管。第二法 平板菌落數(shù)的選擇與證實(shí)試驗(yàn)平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在15CFU150CFU 之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm 或更大。證實(shí)試驗(yàn)從VRBA 平板上挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB 肉湯管內(nèi)，36 1 培養(yǎng)24 h48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽

4、性。（2）原理溴甲酚紫，中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色，如果顏色不變（呈藍(lán)紫色），說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群。膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長繁殖。分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群，看小倒管中的氣體。1產(chǎn)氣 2不產(chǎn)氣杜氏發(fā)酵管產(chǎn)氣情況第四天：大腸菌群計(jì)數(shù)報(bào)告第一法：確證大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄），報(bào)告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。第二法：經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽性的試管比例乘以結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4樣品稀釋液1mL，在VRBA平板上有100個(gè)典型和可疑菌落，挑取其中10個(gè)接