DB13-T1384-2-2011飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T 1384.22011飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定Determination of strain/tetracycline/ aureomycin in feed2011 - 05 - 10 發(fā)布2011 - 05 - 20 實施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 1384.22011I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、河北醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗檢疫技術(shù)中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站。本標(biāo)準(zhǔn)主

2、要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、楊立學(xué)、盧曉宇、呂品、沈磊、米振杰、賈茜、李志平、馬春玲、張敬軒、高振同、武英利。 PAGE 4飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：50 g/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（GB/T 66821992，neq IS0 3696：19

3、87）原理試樣提取液經(jīng)離心后，上清液用 Oasis HLB 固相萃取柱和陰離子交換柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。鹽酸。0.4 mol/L 鹽酸溶液：準(zhǔn)確量取 32.8 mL 鹽酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，搖勻。草酸。0.01 mol/L 草酸甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取草酸 1.26 g，用甲醇溶解并定容于 1 000 mL 容量瓶中。甲酸。甲酸溶液：準(zhǔn)確量取 4 mL 甲酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，搖勻即可。土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：

4、純度95。土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：0.1 mg/mL。準(zhǔn)確稱取適量的土霉素、四環(huán)素、金霉素、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用甲醇配成 0.1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。儲備液貯存在-18冰柜中。土霉素、四環(huán)素、金霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要吸取適量土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用空白樣品提取液稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在 4保存，可使用三天。Oasis HLB 固相萃取柱或相當(dāng)者：500 mg，6 mL。使用前分別用 5 mL 甲醇和 10 mL 水預(yù)處理，保持柱體濕潤。儀器液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源。分析天平：感量 0.l mg 和l

5、 mg 各一臺。旋渦混勻器。固相萃取儀。高速離心機(jī)。具塞錐形瓶：50 mL。離心管：50 mL，5 mL。氮吹儀。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。試樣的制備提取準(zhǔn)確稱取3.0 g樣品（準(zhǔn)確至0.01 g），置于50 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10 mL，旋渦混勻1 min，加入鹽酸溶液（4.4）30 mL，旋渦混勻1 min，超聲20 min，移至50 mL離心管中，5 000 r /min離心10 min，取上清液，待凈化。凈化取10 mL上清液與40 mL水稀釋混勻，再移入下接Oasis HLB柱的貯液器中。溶液以小于1.0 mL /min 的流速過柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，減壓抽干20 mi

6、n。用草酸甲醇溶液（4.6）5 mL洗脫，收集洗脫液于40減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,用1.0 mL 流動相溶解殘渣，12 000 r /min離心10 min，經(jīng)0.45 m有機(jī)濾膜過濾后，待測。測定步驟測定液相色譜條件色譜柱： Inertsil C8，3.5 m，150 mm2.1 mm（i.d）或相當(dāng)者； 流動相：乙腈甲醇0.4甲酸溶液（18478）；流速：0.2 mL/mim； 柱溫：25；進(jìn)樣量：20 L。質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源； 掃描方式：正離子掃描； 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優(yōu)化至最佳值； 定性離子對、定量離子對見表 1。表1三種四環(huán)素族抗生素定性離子對、定量

7、離子對土霉素四環(huán)素金霉素461/426445/410479/444定性離子對/（m/z）461/443445/154479/154461/381445/428479/462定量離子對/ m/z）461/426445/410479/444液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定用土霉素、四環(huán)素、金霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，工作溶液溶度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中土霉素、四環(huán)素、金霉素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)總離子流圖見附錄 A。平行試驗按以上步驟，對同一試樣進(jìn)行平行試驗測定?？瞻自囼灣环Q取試樣外，均按上述步驟同時完成空白試驗。結(jié)果計算結(jié)果按式（1）計算：X c V 1000 (1)m 1000式中：X試樣中被測組分殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）； C從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為微克每毫升（g/mL）； V樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）； M樣品溶液所代表最終試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。注