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1、實(shí)驗(yàn)四電泳技術(shù)及詳解演示文稿第一頁,共四十五頁。(優(yōu)選)實(shí)驗(yàn)四電泳技術(shù)及第二頁,共四十五頁。+-1.許多生物分子帶有電荷,在電場中可以發(fā)生 移動。2.每種分子遷移率不同,一定時(shí)間內(nèi)在電場中 的遷移距離不同。在一定pH條件下,每一種分子都具有特定的電荷(種類和數(shù)量)、大小和形狀,在一定時(shí)間內(nèi)它們在相同電場中泳動速度不同,各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動帶。這就是帶電粒子可以用電泳技術(shù)進(jìn)行分離、分析和鑒定的基本原理。原理第三頁,共四十五頁。二、電泳遷移率設(shè)一帶電粒子在電場中所受的力為F,則 F = QE(Q為粒子所帶電荷,E為電場強(qiáng)度)根據(jù)Stoke定律,一球形分子在溶液中運(yùn)動 所受的阻力f
2、為: f = 6rv(v為分子移動速度;r為分子半徑;為介質(zhì) 黏度)第四頁,共四十五頁。當(dāng)分子達(dá)到動態(tài)平衡時(shí), F = f 即 QE= 6rv 移項(xiàng)得 v/E=Q/ 6r v/E:表示單位電場強(qiáng)度時(shí)粒子運(yùn)動速度,稱 為遷移率,也稱電泳速度,以表示。 因此上式也可表示為: = Q / 6r從上式可推知,帶電粒子在電場中的移動與: 粒子大小有關(guān),顆粒愈小愈快 粒子的電荷有關(guān),電荷愈多愈快 粒子的形狀有關(guān),愈接近球形愈快第五頁,共四十五頁。三、影響遷移率的因素1.電場強(qiáng)度(E) 電場強(qiáng)度是指每厘米的電位降。電泳速度與電場 強(qiáng)度成正比。電場強(qiáng)度越高電泳速度越快。 根據(jù)電場強(qiáng)度大小,電泳可分為: 常壓電泳:210V/cm 高壓電泳:20200V/cm2.溶液的pH值 pH值決定帶電顆粒的解離程度,決定物質(zhì)所帶凈電荷的多少。選擇合適pH,使混合物中各成分所帶電量差別較大。 pHpI帶負(fù)電 pHpI時(shí)從陰極向陽極依次排列為LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1 。血清LDH同工酶檢測的臨床意義:血清LDH同工酶的正常值為LDH1 32.7%、LDH2 45.1%、LDH3 18.5%、LDH4 2.9%、LDH5 0.8% 不
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