藥典三部(2015版)通則外源病毒因子檢查法

1、精選文檔3302外源病毒因子檢查法病毒類制品在毒種選育和生產(chǎn)過程中，常常使用動物或細(xì)胞基質(zhì)培育，所以，有可能造成外源因子的污染。為了保證制質(zhì)量量，需要對毒種和比較細(xì)胞進(jìn)行外源病毒因子的檢測。對病毒主種子批或工作種子批，應(yīng)抽取足夠檢測試驗需要量的供試品進(jìn)行外源病毒因子檢測。依據(jù)病毒的特征，有些檢測需要在試驗前中和病毒。病毒中和時盡可能不稀釋，但中間和抗體不可以有效中和病毒而需要進(jìn)行稀釋病毒時，應(yīng)選擇可被中和的最重病毒量，但起碼不得超出生產(chǎn)接種時毒種的稀釋倍數(shù)。進(jìn)行病毒中和時，應(yīng)采納非人源和非猴源（特別狀況除外）的特異性抗體中和本病毒，為降低樣品中外源病毒被中和的可能性，最好采納單克隆抗體，中和過

2、程不該擾亂外源病毒的檢測。制備抗血清（或單克隆抗體）所用的免疫原應(yīng)采納與生產(chǎn)疫苗（或制品）不一樣種并且無外源因子污染的細(xì)胞（或動物）制備。假如病毒曾在禽類組織或細(xì)胞中生殖過，則抗體不可以用禽類來制備。若用雞胚，應(yīng)來自SPF雞群。病毒種子批外源因子檢查動物試驗法小鼠試驗法取1520g小鼠起碼10只，取病毒種子批或經(jīng)抗血清中和后的病毒懸液，每只腦內(nèi)接種0.03ml，同時腹腔接種0.5ml，起碼察看21天。解剖每只在試驗24小時后死亡或有生病體征的小鼠，直接肉眼察看其病理改變，并將有病變的相應(yīng)的組織制成懸液經(jīng)過腦內(nèi)和腹腔接種此外起碼5只小鼠，并觀察21天。接種24小時內(nèi)小鼠死亡超出20%，試驗無效。

3、在察看期內(nèi)最先接種的乳鼠以及每個盲傳組的小鼠起碼有80%健存，且小鼠未出現(xiàn)與待測毒種沒關(guān)的可流傳性因子或其余病毒感染，為切合要求。乳鼠試驗法拿出生24小時內(nèi)的乳鼠起碼10只，取病毒種子批或經(jīng)抗血清中和后的病毒懸液，腦內(nèi)接種0.01ml，同時腹腔接種起碼0.1ml。每日察看起碼14天。解剖每只在試驗24小時后死亡或有生病體征的乳鼠，直接肉眼察看其病理改變，并取有病變的相應(yīng)的組織和腦、脾制備成懸液經(jīng)過腦內(nèi)和腹腔接種此外起碼5只乳鼠，并每日察看至接種后14天。接種24小時內(nèi)乳鼠死亡超出20%，試驗無效。在察看期內(nèi)最先接種的乳鼠以及每個盲傳組的乳鼠起碼有80%.精選文檔健存，且乳鼠未出現(xiàn)與待測毒種沒關(guān)

4、的可流傳性因子或其余病毒感染，為切合要求。細(xì)胞培育法非血吸附病毒檢查取病毒種子批或用抗血清中和后的病毒懸液，分別接種于人源、猴源和與生產(chǎn)用細(xì)胞同種細(xì)胞。除還有規(guī)定外，每種細(xì)胞起碼接種10ml病毒懸液或10ml病毒懸液用抗血清中和后接種。用人二倍體細(xì)胞或猴源細(xì)胞生產(chǎn)的，還應(yīng)接種此外一株人二倍體細(xì)胞或猴源細(xì)胞。每種細(xì)胞起碼接種6瓶，每瓶病毒懸液接種量許多于每瓶培育液總量的25%。于361培育，觀察14天。每種細(xì)胞均設(shè)置未接種病毒的陰性比較瓶及陽性病毒比較瓶。必需時可改換細(xì)胞培育液或傳代1次，但傳代時間距察看期末不得少于7天。陰、陽性比較應(yīng)建立，接種待測病毒樣本的每種細(xì)胞培育物未見細(xì)胞病變判為陰性，

5、切合要求。血吸附病毒檢查于接種后第68天和第14天，分別取上述接種病毒的每種細(xì)胞培育物2瓶進(jìn)行血吸附病毒檢查。用0.2%0.5%雞和豚鼠紅細(xì)胞混合懸液覆蓋于細(xì)胞表面，一瓶于28擱置30分鐘，另一瓶于2025擱置分鐘，吸棄剩余紅細(xì)胞后察看紅細(xì)胞吸附狀況。陰、陽性比較應(yīng)建立，接種待測病毒樣本的細(xì)胞應(yīng)均為陰性。雞胚檢查法在禽類組織或細(xì)胞中生殖過的病毒種子需用雞胚檢查禽類病毒的污染。除還有規(guī)定外，取10ml病毒種子批或10ml病毒懸液用抗血清中和后接種，采納911日和57日齡兩組SPF雞胚，每組起碼10枚，分別于尿囊腔和卵黃囊接種，每胚0.5ml。置于35孵育7天后，察看雞胚存活，并取尿囊液用0.2%

6、0.5%雞和豚鼠紅細(xì)胞混淆懸液做血細(xì)胞凝聚試驗。接種的每組雞胚起碼80%存活7天，且尿囊液血凝試驗為陰性，為切合要求。生產(chǎn)用比較細(xì)胞外源病毒因子檢查非血吸附病毒檢查細(xì)胞直接察看每批生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)留取5%或許多于500ml細(xì)胞懸液不接種病毒，作為比較細(xì)胞加入與疫苗生產(chǎn)同樣的細(xì)胞保持液，置與疫苗生產(chǎn)同樣的條件下培育起碼14天或至病毒收獲時（取時間較長輩），在顯微鏡下察看能否.精選文檔有細(xì)胞病變出現(xiàn)，無細(xì)胞病變出現(xiàn)者為陰性，切合要求。在察看期末起碼有80%的比較細(xì)胞培育物存活，試驗才有效。細(xì)胞培育試驗上述試驗察看期末，收取上清液混淆后，取適當(dāng)接種于猴源和人源的細(xì)胞培育物，假如疫苗病毒在非猴源或非人源其余細(xì)胞系上生產(chǎn)，還應(yīng)接種于同種不一樣批細(xì)胞。每種細(xì)胞起碼接種5ml上清混淆液，且接種量應(yīng)不少于每瓶細(xì)胞培育液總量的25%。置與生產(chǎn)同樣的培育條件下培育起碼14天。無細(xì)