羥基積雪草苷對離體動(dòng)脈條的舒張作用及其機(jī)制

1、羥基積雪草苷對離體動(dòng)脈條的舒張作用及其機(jī)制白紀(jì)紅趙日紅呂秋軍馬憲梅【摘要】目的探究羥基積雪草苷adeassside，的舒張血管作用及其機(jī)制。要領(lǐng)接納離體大鼠胸自動(dòng)脈張力實(shí)行不雅察的舒張血管作用。效果使去甲腎上腺素NE和氯化鉀Kl緊縮動(dòng)脈條的量效曲線右移，最大緊縮力低落；并對NE誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)a2+開釋所引起的緊縮有顯著的按捺作用；但去除血管內(nèi)皮細(xì)胞后反而使動(dòng)脈條緊縮進(jìn)一步加強(qiáng)；在有一氧化氮合酶(NS)按捺劑存在的環(huán)境下，其按捺NE緊縮的效應(yīng)消散；對血管告急素Ang緊縮動(dòng)脈條的量效曲線無顯著影響。結(jié)論有顯著的舒張血管作用，表現(xiàn)為鈣拮抗活性，以按捺細(xì)胞內(nèi)a2+開釋為主；且通過內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮作用，并與一

2、氧化氮N合成通路有嚴(yán)密的干系?！娟P(guān)鍵詞】羥基積雪草苷去甲腎上腺素一氧化氮合酶按捺劑內(nèi)皮細(xì)胞胸自動(dòng)脈中藥積雪草是傘形科植物積雪草entellaasiatia(L.)Urban的枯燥全草，為各版?中國藥典?收載品種，其重要活性身分為三萜皂苷類。有報(bào)道積雪草總苷具有抗?jié)?、治療皮膚疾病2、抗焦急3、免疫調(diào)治和誘導(dǎo)凋亡4，5等多種作用。羥基積雪草苷(adeassside，)是積雪草三萜皂苷類的重要身分之一。有關(guān)單體對心血管方面的作用未見報(bào)道。在本實(shí)行室前期研究中創(chuàng)造對NE預(yù)緊縮的離體大鼠胸自動(dòng)脈條有必然的舒張作用，但其作用機(jī)制尚不明白。使用離體動(dòng)脈條模子，進(jìn)一步探究舒張血管的作用及其機(jī)制，為開拓此類

3、化合物提供必然的實(shí)行根據(jù)。1質(zhì)料軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所樣品庫；重酒石酸去甲腎上腺素注射液天津金耀氨基酸，批號(hào)0403311；氯化乙酰膽堿Aetylhlinehlride，Ah，Siga公司分裝；血管告急素Angitensin，Siga公司，批號(hào)064K51201；L-N-硝基精氨酸甲酯N-Nitr-L-arginineethylesterhydrhlride，L-NAE，Siga公司，批號(hào)124K1212；別的試劑均為闡發(fā)純，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院供給科提供。Krebs-HenselEitK-H液lL-1配方：Nal133，Kl4.75，gl21.25，al21.5，NaH325，葡萄糖

4、11.1，pH值7.4；無鈣K-H液為正常的K-H液無al2身分，參加0.01lL-1EGTA。干凈級(jí)istar大鼠，牝牡兼用，體重180220g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)行動(dòng)物中央生殖。恒溫灌流儀北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)行儀器廠，HX-10555；張力換能器高碑店市新航機(jī)電裝備，JZ101；adLab生物醫(yī)學(xué)信號(hào)網(wǎng)羅處置懲罰體系南京美易科技。2要領(lǐng)2.1大鼠胸自動(dòng)脈條的制備6取大鼠，麻醉后開胸敏捷取出胸自動(dòng)脈，將其剪成49的環(huán)段，置于含10lK-H液的浴槽內(nèi)，保持37并連續(xù)通入體積分?jǐn)?shù)為95%2和5%2的混淆氣體，前負(fù)荷為1.0g，平衡12h后開始實(shí)行，肌條張力通過張力換能器記載于生物醫(yī)學(xué)信號(hào)網(wǎng)羅處置

5、懲罰體系。2.2對NE，Kl和Ang緊縮曲線的影響累積濃度法作NE10-910-5lL-1量效曲線，K-H液重復(fù)沖洗動(dòng)脈條至張力規(guī)復(fù)正常，參加作用10in，在有存在的環(huán)境下重復(fù)上述NE的量效曲線，前后比擬統(tǒng)計(jì)，分為0.02，0.04，0.08，0.16lL-1劑量組。同法作Kl0.010.16lL-1和Ang10-1110-6lL-1量效曲線。2.3對NE誘導(dǎo)動(dòng)脈條兩相緊縮的影響標(biāo)本于K-H液中平衡12h，無鈣K-H液重復(fù)沖洗30in后，參加NE10-7lL-1引起動(dòng)脈條第一相緊縮，緊縮不變后參加al2，以規(guī)復(fù)無鈣K-H液中的a2+濃度1.5lL-1，引起第二相緊縮，直至緊縮達(dá)岑嶺坪值，兩相緊

6、縮幅度之和作為100%，別離盤算兩相緊縮所占緊縮率。無鈣K-H液重復(fù)沖洗標(biāo)本，待其張力規(guī)復(fù)正常后，參加作用10in，在有存在的環(huán)境下重復(fù)上述歷程，前后比擬統(tǒng)計(jì)。分為0.02，0.04，0.08lL-1劑量組。2.4對內(nèi)皮完備動(dòng)脈條及去內(nèi)皮動(dòng)脈條作用的比力機(jī)器摩擦法去除動(dòng)脈條內(nèi)皮細(xì)胞，參加Ah10-610-4lL-1檢測內(nèi)皮細(xì)胞活性，無內(nèi)皮動(dòng)脈條參加Ah后，無舒張效應(yīng)。同一動(dòng)物得到的動(dòng)脈條別離制作保存內(nèi)皮與去內(nèi)皮兩組標(biāo)本，作為平行比擬。兩組標(biāo)本別離參加NE10-7lL-1使動(dòng)脈條緊縮達(dá)岑嶺坪值Eax，累積濃度法參加0.02，0.04，0.08lL-1，記載各濃度所對應(yīng)的緊縮幅度E，接納(Eax-

7、E/Eax100%別離盤算各濃度的緊縮按捺率。2.5一氧化氮合酶按捺劑對舒血管作用的影響7參加NE10-6lL-1待緊縮達(dá)岑嶺坪值Eax，參加0.08lL-1，記載參加后各時(shí)段張力值；沖洗標(biāo)本，待張力回到基線后，參加NS按捺劑L-NAE10-4lL-15in后重復(fù)上述參加NE及的歷程，記載相應(yīng)緊縮幅度E。別離用公式：緊縮率=E/Eax100%盤算樣本在兩種條件下的緊縮率。同時(shí)設(shè)空缺比擬組，不雅察沖動(dòng)劑NE緊縮連續(xù)時(shí)間，以包管觀察的舒張作用是在其安穩(wěn)緊縮范疇內(nèi)。3效果3.1對NE，Kl和Ang緊縮曲線的影響可以使NE和Kl量效曲線PD2減小，最大緊縮力低落，曲線非平行右移。0.02，0.04，0

8、.08lL-1組別離使Kl量效曲線的PD2由1.460.06減至1.390.05，1.380.05，1.350.09，0.04，0.08lL-1組最大緊縮力由1.560.26g落至1.320.17g，1.280.20g，與比擬組比擬均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0.05，效果見表1和圖1。對Ang量效曲線的PD2及最大緊縮力均無顯著影響P0.05。效果見表2。表1對NE緊縮大鼠胸自動(dòng)脈條量效曲線的影響略與NE比擬組比力，*P0.05,*P0.01；n=10與Kl比擬組比力，*P0.05,*P0.01；n=10圖1對Kl緊縮大鼠胸自動(dòng)脈條量效曲線的影響略表2對Ang緊縮大鼠胸自動(dòng)脈條量效曲線的影響略與Ang比

9、擬組比力，*P0.05；n=83.2對NE誘導(dǎo)動(dòng)脈條兩相緊縮的影響按捺細(xì)胞內(nèi)a2+開釋引起的緊縮P0.05；但對細(xì)胞外a2+內(nèi)流引起的緊縮并無顯著按捺作用P0.05。效果見表3。表3對NE引起的內(nèi)a2+開釋和外a2+內(nèi)流兩相緊縮的影響略與NE比擬組比力，*P0.05,*P0.01；n=103.3對內(nèi)皮完備動(dòng)脈條及去內(nèi)皮動(dòng)脈條作用的比力在內(nèi)皮完備動(dòng)脈條中可按捺NE引起的緊縮，緊縮按捺率漸漸增大；去內(nèi)皮組：使動(dòng)脈條緊縮加強(qiáng)，緊縮按捺率均為負(fù)值，各劑量組別離與內(nèi)皮完備組比力有明顯性差異P0.001。效果見表4。表4對內(nèi)皮完備和去內(nèi)皮大鼠胸自動(dòng)脈條作用的比力略與相應(yīng)的內(nèi)皮完備組比力，*P0.001；n

10、=103.4一氧化氮合酶按捺劑對舒血管作用的影響可按捺NE10-6lL-1引起的緊縮P0.001，當(dāng)參加L-NAE后使緊縮率增至128.814.8%，與NE比擬組比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0.001，但在L-NAE存在的環(huán)境下再次參加等劑量，不表現(xiàn)出顯著的舒張作用，與NE+LNAE組比擬無明顯性差異P0.05，效果見圖2。圖2L-NAE對舒張大鼠胸自動(dòng)脈條作用的影響略4討論高濃度的鉀使血管平滑肌細(xì)胞膜去極化，細(xì)胞內(nèi)a2+濃度增長，引起血管緊縮。非競爭性按捺Kl的縮血管作用，表白的舒血管作用與按捺肌細(xì)胞內(nèi)a2+增多有關(guān)。NE通過受體激活受體把持鈣通道(R)引起血管緊縮，這種緊縮既有細(xì)胞外a2+內(nèi)流的作用

11、，也有細(xì)胞內(nèi)鈣儲(chǔ)存池a2+開釋的到場。對NE的縮血管作用表現(xiàn)為非競爭性按捺，表白不是與受體競爭性作用，大概是改變了與a2+有關(guān)的平滑肌緊縮活性。對血管平滑肌兩相緊縮身分的闡發(fā)表現(xiàn)，按捺細(xì)胞內(nèi)a2+開釋為主，從而引起舒張效應(yīng)。以上效果說明具有必然的鈣拮抗作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞在調(diào)解血管張力方面起著非常緊張的作用，因此實(shí)行中觀察了內(nèi)皮細(xì)胞對舒張血管作用的影響。效果創(chuàng)造，依靠內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮舒張血管作用，去除內(nèi)皮后反而表現(xiàn)出緊縮血管效應(yīng)。因此進(jìn)一步探究與內(nèi)皮相干的腎素-血管告急素體系及N合成調(diào)治通路。實(shí)行效果表白大概不是直接通過按捺Ang而舒張血管的；按照預(yù)實(shí)行及相干文獻(xiàn)報(bào)道8，應(yīng)用一氧化氮合酶按捺劑L-N

12、AE10-4lL-1可有用阻斷N的合成。實(shí)行中應(yīng)用此濃度的L-NAE，取消了的舒張血管作用。效果提示：通過內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮舒張血管作用，并且與N合成通路嚴(yán)密相干。綜上所述，羥基積雪草苷具有舒血管活性，其作用機(jī)制：具有鈣拮抗作用，并以按捺細(xì)胞內(nèi)a2+開釋為主；舒張血管作用具有血管內(nèi)皮依靠性，且與N合成通路有關(guān)。其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究探究。致謝：本項(xiàng)研究在北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所完成，得到了任建平、郭紹明、溫利青老師的耐煩引導(dǎo)與鼎力大舉幫助，向他們表現(xiàn)樸拙的謝意。同時(shí)謝謝組里其他列位老師、同硯賜與的幫助和支持?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1henLung-heng,JinSheng-gu,LukJ,

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