電離輻射相關(guān)低密度寡核苷酸基因芯片的制備

1、電離輻射相干低密度寡核苷酸基因芯片的制備郭萬峰，王升啟，黃堅(jiān)，郭國禎【關(guān)鍵詞】肺癌Fabriatinfldensityinizingradiatinrelatedlignuletideirarray【Keyrds】irarray;inizingradiatin;lungneplass;ellline,tur【摘要】目的:構(gòu)建一種實(shí)用于輻射研究范疇的低密度寡核苷酸基因芯片.要領(lǐng):按照以往的研究陳訴，挑選到場輻射生物效應(yīng)的基因和相干基因，從GenBank獵取RNA序列，利用prbe軟件方案特異的探針，構(gòu)建低密度輻射相干的基因芯片.在差異輻射敏感性肺癌細(xì)胞系中對該芯片的敏捷度和特異性舉行評價(jià)，并對一

2、些差異表達(dá)基因舉行RTPR驗(yàn)證，以確認(rèn)芯片檢測效果的可信性.效果:構(gòu)建出了輻射相干的寡核苷酸基因芯片,該芯片共含有143個基因,即127個輻射相干基因和16個比較基因.在差異輻射敏感性的A549和NIH446細(xì)胞中，挑選出18個差異表達(dá)基因.經(jīng)RTPR對4個基因的驗(yàn)證,效果與芯片資料較同等.結(jié)論:輻射相干低密度寡核苷酸基因芯片可以檢測差異輻射敏感性腫瘤細(xì)胞的差異表達(dá)基因,為輻射范疇的研究提供了一種技能平臺.【關(guān)鍵詞】基因芯片；電離輻射；肺癌;腫瘤細(xì)胞系0弁言基因芯片技能作為一門新興的技能，具有高通量、微型化和主動化的特點(diǎn),被普及應(yīng)用于種種構(gòu)造的表達(dá)譜闡發(fā)1-2.比年來也漸漸被應(yīng)用于檢測輻射誘導(dǎo)

3、的相干基因3-5.然而，高密度芯片針對性不強(qiáng)，產(chǎn)生過于繁雜的實(shí)行資料，倒霉于闡發(fā)而且耗時(shí)費(fèi)力，必要較多的資金，不是一樣平常的實(shí)行室所能舉行的.我們體系的比力了差異技能平臺的基因芯片的優(yōu)缺點(diǎn)后6構(gòu)建了一種實(shí)用于輻射研究范疇的低密度寡核苷酸基因芯片.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料肺腺癌細(xì)胞A549和肺小細(xì)胞癌細(xì)胞NIH446(本室保存).60源由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供.SuperSriptTII逆轉(zhuǎn)錄酶(Invitrgen公司);y3dUTP/y5dUTP(Aersha公司);RNasin(Prega公司);dNTPs(Invitrgen公司);IPrIIT逆轉(zhuǎn)錄體系(Prega公司);引物為實(shí)行室自行合成表

4、1.表1PR引物略1.2要領(lǐng)2效果2.1肺癌A549和NIH446細(xì)胞的輻射敏感性和總RNA制備我們從前的實(shí)行表現(xiàn)肺癌A549和NIH446細(xì)胞的輻射敏感性具有顯著的差異性8,提取細(xì)胞總RNA舉行紫外定量和甲醛變性凝膠電泳.效果表白,細(xì)胞總RNA(A260n/A280n值為1.821.98),28S/18S1.5,5SRNA條帶不顯著,證實(shí)得到了高純度、高完備性的總RNA.3討論為了區(qū)分與腫瘤輻射抗性相干的一些基因，必要創(chuàng)立一種挑選這些基因的要領(lǐng).基因芯片為高通量檢測基因表達(dá)提供了一個強(qiáng)有力的東西，如今已被應(yīng)用到電離輻射范疇.但是，如今放射范疇里還沒有一款實(shí)用于放射研究的基因芯片.針對輻射誘導(dǎo)

5、的生物學(xué)效應(yīng)，我們構(gòu)建了輻射相干的寡核苷酸基因芯片，這種小型芯片去掉了浩繁的滋擾因素，有利于生物信息學(xué)闡發(fā)，低落了本錢，有利于普及的應(yīng)用.電離輻射除了誘導(dǎo)核內(nèi)DNA損傷，也可誘導(dǎo)一些分子表達(dá)，激活信號傳導(dǎo)途徑.我們在回首文獻(xiàn)、闡發(fā)輻射誘導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)的底子上，按照輻射調(diào)治基因和大概調(diào)治的基因，通過科室的基因芯片研發(fā)技能平臺，構(gòu)建了一款由143個基因組成的寡核苷酸基因芯片.實(shí)行效果表現(xiàn)出兩種細(xì)胞中增殖基因、細(xì)胞周期基因、損傷修復(fù)基因和凋亡基因的顯著差異，這些差異表達(dá)基因大概是兩種同一構(gòu)造泉源細(xì)胞異質(zhì)性的緣故原由.固然，這些基因是否到場了肺癌細(xì)胞的輻射抗性，還必要通過其他的實(shí)行要領(lǐng)如反義技能、RN

6、A干預(yù)干與技能等舉行驗(yàn)證.總之，構(gòu)建的寡核苷酸基因芯片可以開端挑選出差異輻射敏感性腫瘤細(xì)胞的差異基因，對付從分子程度明白腫瘤細(xì)胞的輻射抗性具有緊張作用，是輻射研究范疇里的一個很好的技能平臺.【參考文獻(xiàn)】1Shena,ShalnD,DavisR,etal.QuantitativenitringfgeneexpressinpatternsithapleentaryDNAirarrayJ.Siene,1995,270(5235):467-470.2Shena,ShalnD,HellerR,etal.Parallelhuangeneanalysis:irarraybasedexpressinnitri

7、ngf1000genesJ.PrNatlAadSiUSA,1996,93(20):10614-10619.3KruseJJ,tePeleJA,VeldsA,etal.IdentifiatinfdifferentiallyexpressedgenesinusekidneyafterirradiatinusingirarrayanalysisJ.RadiatRes，2022,161(1):28-38.4EdardsJS,BattistaJR.UsingDNAirarraydatatunderstandtheinizingradiatinresistanefDEinusradiduransJ.TrendsBitehnl,2022,21(9):381-382.5GuG,YanSandersY,LynkBD,etal.anganesesuperxidedisutaseediatedgeneexpressininradiatininduedadaptiverespnsesJ.lellBil，2022,23(7):2362-2378.6郭萬峰，滕光菊，王升啟.幾種基因芯片技能的比力J.中國生物工程