大鼠體內(nèi)瀉心湯及其不同配伍黃酮類成分藥代動(dòng)力學(xué)的變化規(guī)律研究

1、大鼠體內(nèi)瀉心湯及其不同配伍黃酮類成分藥代動(dòng)力學(xué)的變化規(guī)律研究【摘要】目的研究瀉心湯不同配伍黃酮類成分在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的差異。方法大鼠隨機(jī)分為4組，分別灌胃給予瀉心湯(XXD)，單味黃芩(RS)，大黃+黃芩(RRR+RS)和黃連+黃芩(+RS)，給藥前及給藥后不同時(shí)間采集血樣，HPL法測定黃芩苷和漢黃芩苷濃度，由血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，比擬組間差異。結(jié)果與RS組相比，其余3組中黃芩苷的AU和ax數(shù)值均有不同程度的降低;而+RS組中漢黃芩苷的AU和ax數(shù)值與RS組相比亦有明顯減少。結(jié)論瀉心湯配伍(黃連和大黃)可能使黃芩中黃芩苷和漢黃芩苷的吸收減少、暴露程度降低，其中黃連的影響更明顯。

2、【關(guān)鍵詞】瀉心湯;黃酮類;配伍;藥代動(dòng)力學(xué)Abstrat：bjetiveTinvestigatethepharakinetiprfilefthebaialinandgnsideinratsafterraladinistratinfXiexinDetin(XXD)andthedifferentbinatinsfitsnstituentherbs.ethdsRatseredividedintfurgrupsandererandlyadinisterednefthefuraquusextrats:RS,RS+RRR,RS+andXXD(RS+RRR+)viaintragastrigavage.Pla

3、sanentratinsfBaialinandgnsideereeasuredbyHPL.Pharakinetiparaeterserealulatedfrtheplasanentratin-tiedata.ResultsTheaxandAUfbaialinandgnsideeresignifiantlydifferentangthefurgrups.parediththegrupfRSalne,therestthreegrups,RS+,RS+RRRandRS+RRR+(XXD),shedadereaseinAUandaxfthebaialinandRS+grupshedadereasein

4、theAUandaxfgnside.nlusinTheresultssuggestedthatandRRRayarkedlydereasetheabsrptinandsysteatiexpsurelevelsfbaialinandgnsideinRS,andhasreprfundeffet.Keyrds：XiexinDetin;Flavnids;patibility;Pharakinetis瀉心湯(XiexinDetin)為出自?金匱要略?的清熱經(jīng)典名方，由大黃、黃芩、黃連組成，具有抗炎1、抗病原微生物、抗凝、改善高血壓及高脂血癥、保護(hù)胃黏膜等藥理作用2。關(guān)于瀉心湯配伍成分的研究報(bào)道有很多，如

5、應(yīng)用HPL測定黃芩苷-小檗堿沉淀物在不同條件下的平衡濃度3等。但是在瀉心湯不同配伍中黃酮成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究未見報(bào)道。黃芩(RadixSutellariae)為唇形科植物黃芩SutellriabaialensisGergi.的枯燥根。味苦，性寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒之成效。黃芩有效成分為黃酮類，主要包括黃芩苷(baialin)、黃芩素(baialEin)、漢黃芩苷(gnside)、漢黃芩素(gnin)等(圖1)。文獻(xiàn)報(bào)道，黃芩苷由于極性大不能直接跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)吸收入血，而是在腸道菌群的葡萄糖醛酸苷酶作用下轉(zhuǎn)化為其苷元即黃芩素，黃芩素進(jìn)入腸黏膜后，在UDPG-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的作用下轉(zhuǎn)化為黃芩素-葡

6、萄糖醛酸結(jié)合物(恰好與原型黃芩苷構(gòu)造一致)，再主要以黃芩苷的形式經(jīng)腸道吸收入血，進(jìn)入血液的黃芩素還可在肝臟經(jīng)UDPG-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)化生成黃芩素-葡萄糖醛酸結(jié)合物(即黃芩苷)48。體內(nèi)的黃芩苷又可經(jīng)膽汁和腸黏膜9，10轉(zhuǎn)運(yùn)至腸腔，經(jīng)歷再循環(huán)過程。由于黃芩苷的這種吸收和代謝特性，當(dāng)大鼠灌胃給予黃芩苷或黃芩素時(shí)，通常在血漿里可以迅速檢測到黃芩苷，而黃芩素的濃度很低或無法檢測到11,12。漢黃芩苷的體內(nèi)轉(zhuǎn)化過程與黃芩苷類似13。由此可見，大鼠灌胃給予黃芩提取物后，進(jìn)入體循環(huán)的主要是黃芩苷和漢黃芩苷。因此，本實(shí)驗(yàn)研究瀉心湯及其不同配伍在大鼠體內(nèi)黃芩苷和漢黃芩苷的血藥動(dòng)力學(xué)變化規(guī)律。1儀器與材料1.

7、1儀器AgilentHP1100高效液相色譜儀系統(tǒng)：配有二元泵、DAD檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器和色譜工作站;X-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);US-502超聲波清洗器(上海波龍電子設(shè)備);FA2022N分析天平(上海精細(xì)科學(xué));TGL-16G-A型高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。1.2藥品及配制黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品：購于中國藥品生物制品檢定所;對(duì)羥基苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，購于國藥集團(tuán)，甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為三蒸水。大黃，黃芩和黃連，購自上?？禈蛑兴庯嬈?，經(jīng)本校生藥教研室趙志禮教授鑒定，按211比例，傳統(tǒng)方法煎煮，標(biāo)準(zhǔn)化制備過程制成瀉

8、心湯和各不同配伍組提取物細(xì)粉，由本校科技實(shí)驗(yàn)中心中藥制藥室制備。各提取物中活性成分及含量用HPL法分析測定14。2方法2.1色譜條件色譜柱為SUPELDisvery18柱(5，4.6250);流動(dòng)相為2%甲酸0.1%三乙胺-乙腈(7723，VV);流速1.0lin-1;柱溫25;檢測波長277，318n;進(jìn)樣體積50l。2.2樣品預(yù)處理取血漿0.1l，參加內(nèi)標(biāo)18g/l對(duì)羥基苯甲酸甲酯10l，參加1lL-1KH2P4溶液50l，振蕩混勻;參加甲醇乙腈(11)100l，36%乙酸5l渦漩10in，離心(16000rin-1)20in，取上清液進(jìn)展分析。2.3方法學(xué)考察2.3.1專屬性血漿色譜圖(

9、圖2)說明，空白血漿在與對(duì)照品一樣保存時(shí)間處沒有檢出色譜峰，黃酮類成分與其它成分到達(dá)基線別離，說明血漿中內(nèi)源性物質(zhì)、代謝產(chǎn)物及瀉心湯中其它成分均不干擾黃酮類成分的檢出。2.3.2線性范圍及定量限制備黃芩苷、漢黃芩苷濃度分別為0，0.1，0.5，2.0，5.0，7.0，10.0gL-1及0，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0gL-1血漿樣品，按“2.2項(xiàng)下血漿樣品預(yù)處理的方法操作，用樣品濃度X對(duì)樣品與內(nèi)標(biāo)峰面積比Y作直線回歸，得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.458X+0.01795(r=0.9984,n=5);漢黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.885X+0.04597(r=0.

10、9968,n=5)。黃芩苷和漢黃芩苷血漿濃度分別在0.110.0gL-1及0.18.0gL-1范圍內(nèi)線性良好，定量下限(LLQ)均為0.1gL-1。2.3.3精細(xì)度、準(zhǔn)確度與回收率制備黃芩苷濃度為0.1，5.0，10.0gL-1和漢黃芩苷濃度為0.2，1.0，8.0gL-1血漿樣品，按“2.3.2項(xiàng)下操作，批內(nèi)平行5份，用于評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度和批內(nèi)精細(xì)度，連續(xù)測定3d，計(jì)算批間精細(xì)度。低、中、高3個(gè)濃度的準(zhǔn)確度(n=5)黃芩苷為92.6%，93.1%和92.0%;漢黃芩苷為117.7%,103.6%和91.0%。3個(gè)濃度的批內(nèi)精細(xì)度(n=5)黃芩苷為4.1%，8.2%和1.6%;漢黃芩苷為16.

11、9%，5.8%和12.7%，批間精細(xì)度(n=5)黃芩苷為4.2%，1.5%和1.7%;漢黃芩苷為7.4%，3.9%和2.2%。另取超純水參加黃芩苷和漢黃芩苷，使其濃度與血漿樣品一樣，按“2.2項(xiàng)下血漿樣品的預(yù)處理操作，得標(biāo)準(zhǔn)樣品峰面積比，求得低、中、高3個(gè)濃度血漿提取回收率(n=5)黃芩苷為58.5%，81.4%和68.8%;漢黃芩苷為84.2%，80.9%和76.0%。2.3.4穩(wěn)定性配制與“2.3.3項(xiàng)濃度一樣的黃芩苷、漢黃芩苷血漿樣品，在-70條件下存放3d,室溫放置20h,凍融1次。按照“2.2項(xiàng)下預(yù)處理操作，結(jié)果在以上條件下各濃度樣品測定值的RSD均小于15%,這說明在此條件下黃酮類

12、成分穩(wěn)定性良好。血漿樣本按此條件保存及測定。2.3.5方法學(xué)質(zhì)控在生物樣本分析方法確證完成以后開場測定未知樣品,同時(shí)進(jìn)展質(zhì)量控制。每個(gè)分析批生物樣品測定隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)展3濃度雙樣本質(zhì)控樣品分析，并將質(zhì)控樣品變異15%作為當(dāng)日數(shù)據(jù)是否承受的標(biāo)準(zhǔn)。2.4瀉心湯不同配伍中黃酮類成分(黃芩苷、漢黃芩苷)在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)SD大鼠28只，雌雄各半，隨機(jī)分成4組，每組7只，分別灌服瀉心湯、單味黃芩、大黃+黃芩以及黃芩+黃連提取物水溶液(各組給藥劑量及活性成分含量見表1)。本實(shí)驗(yàn)中瀉心湯的給藥劑量為12g(生藥)kg-1，與大鼠灌服瀉心湯的有效劑量一樣15，為人用等效劑量的2倍16。各組分別于給

13、藥前及給藥后5，10，20in及0.5，1，2，4，6，8，12，16，24，28，32h于眼球后靜脈叢采血，肝素抗凝9600rin-1離心制備血漿，汲取血漿，-20保存，按照上述方法測定，由隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出黃芩苷、漢黃芩苷的血藥濃度。a.標(biāo)準(zhǔn)品;b.空白血漿;.空白血漿+標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品;df：給藥后10in血漿給予黃芩(d)、瀉心湯(e)、黃芩+大黃(f)和黃芩+黃連(g)2.5數(shù)據(jù)分析各組大鼠給藥后血漿色譜圖與瀉心湯及空白血漿色譜圖進(jìn)展比照，并通過與黃酮類成分(黃芩苷、漢黃芩苷)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品進(jìn)展比照確認(rèn)，分析給藥后血漿中黃酮類成分。黃芩苷、漢黃芩苷的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)采用非房室模型，DAS2.

14、0程序進(jìn)展藥代動(dòng)力學(xué)分析，用統(tǒng)計(jì)矩法求算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。采用梯形法計(jì)算AU0-t;AU0-=AU0-t+t/ke，其中t為最末點(diǎn)的血藥濃度。數(shù)據(jù)以s表示，各組動(dòng)力學(xué)參數(shù)間的差異用方差分析統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果各組大鼠分別灌服瀉心湯、單味黃芩、大黃黃芩以及黃芩黃連后，血漿中可檢測到的黃酮類成分主要為黃芩苷、漢黃芩苷(圖2)，其對(duì)應(yīng)的苷元黃芩素、漢黃芩素均未檢測到。黃芩苷、漢黃芩苷的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3。結(jié)果說明黃芩苷、漢黃芩苷可迅速吸收進(jìn)入體內(nèi)，5in即可檢測到。并隨時(shí)間呈動(dòng)態(tài)變化，藥時(shí)曲線呈現(xiàn)雙峰現(xiàn)象。在4個(gè)給藥組中，黃芩苷在體內(nèi)的血藥濃度均高于漢黃芩苷。在瀉心湯中和

15、其他黃芩配伍中，黃芩苷分別在給藥后28h和32h后血藥濃度降至定量限下;而在黃芩+黃連組和其他3組中，漢黃芩苷分別在給藥后28h和32h后血藥濃度降至定量限下。黃芩苷和漢黃芩苷的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表23。兩者的ax和AU組間差異明顯(P0.05或P0.01)。與單味黃芩組相比，其余3組(黃芩+大黃、黃芩+黃連、瀉心湯)中黃芩苷的AU數(shù)值顯著降低，分別相當(dāng)于黃芩組AU的52.6%,42.9%和41.4%，其余3組ax1也明顯降低;且黃芩+黃連組和瀉心湯組中黃芩苷的ax也顯著降低;黃芩配伍黃連后，漢黃芩苷的ax和AU明顯減校與黃芩+黃連組相比，瀉心湯組的黃芩苷和漢黃芩苷的ax1均有所升高。表2大鼠口

16、服瀉心湯等的黃芩苷藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與RS組比擬，aP0.05,bP0.01;與RS+組比擬，P0.05表3大鼠口服瀉心湯等的漢黃芩苷藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與RS組比擬，aP0.05,bP0.01;與RS+組比擬，P0.054討論文獻(xiàn)報(bào)道，黃芩提取物中黃芩苷的藥時(shí)曲線與藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與灌胃給予黃芩苷純品一致。這說明黃芩自身成分對(duì)黃芩苷和漢黃芩苷的藥代動(dòng)力學(xué)特征沒有影響17。本研究中著重研究配伍對(duì)于瀉心湯中黃酮類成分藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響。結(jié)果說明，黃芩伍用黃連后，黃芩苷的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(ax1,ax2和AU(0-)以及漢黃芩苷的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(ax1andAU(0-)的數(shù)值顯著減少。該結(jié)果提示，配伍黃連使得

17、兩者的生物利用度下降。黃連使黃芩苷和漢黃芩苷吸收減少的可能原因如下：在黃酮類成分的吸收過程中，腸道菌群起著重要的作用，其活性直接影響著黃酮類成分的生物利用度。黃連的有效成分主要為小檗堿(berberine)，藥理研究說明，小檗堿有較強(qiáng)的抗菌作用18，故推測黃連的抗菌作用抑制了腸道菌群的活性，使黃芩苷水解成黃芩素減少，黃芩素跨膜減少，從而使黃芩苷吸收減少。另據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃連與黃芩復(fù)方煎出液可產(chǎn)生沉淀,且復(fù)方煎出液中黃連生物堿和黃芩中黃酮化合物的含量均有不同程度下降。產(chǎn)生沉淀的原因是由于黃連中含有原小檗堿型生物堿為堿性化合物與黃芩中含有多酚類化合物黃芩苷等酸性化合物互相結(jié)合,生成分子量較大的水不溶

18、物19。有研究說明20，瀉心湯煎煮過程中產(chǎn)生的沉淀物在人工胃液和腸液中只能局部解離，釋放出活性成分黃芩苷和小檗堿。因此大鼠灌胃瀉心湯后，在腸道中很有可能存在未溶解的沉淀物，使黃芩苷吸收減少。本研究結(jié)果還說明，大黃也可使黃芩苷吸收減少，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究說明?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1馬越鳴，閆晶超，王天明，等.瀉心湯在急性炎癥動(dòng)物模型上的抗炎效應(yīng)J.中國藥理學(xué)通報(bào),2022,24(11):1393.2蔣愛品.三黃瀉心湯的藥理研究概況J.北京中醫(yī),2001,20(5):45.3LiYi,XuXu.StudynthepreipitatinreatinbeteenbaialinandberberinebyHP

19、LJ.JhratgrB,2022,810(1):165.4LaiY,HsiuSL,TsaiSY,etal.parisnfetablipharakinetisfbaialinandbaialEininratsJ.JPharPharal,2022,55(2):205.5LiuT,JiangXH.InvestigatinftheAbsrptinehanissfBaialinandBaialEIninRatsJ.JPharSi,2022,95(6):1326.6AkaT,KaabataK,YanagisaaE,eta1.Baialin,thepredinantflavnegluurnidefsutel

20、lariaeradix,isabsrbedfrtheratgastrintestinaltratastheaglyneandrestredtitsriginalfrJ.JPharPharal,2000,52(12):1563.7NgSP,angKP,ZhangL,etal.Evaluatinfthefirst-passgluurnidatinfseletedflavnesingutbya-2nlayerdelJ.JPharSi,2022,8(1):1.8ZhangL,LinG,hangQ,etal.RlefIntestinalFirst-PassetablisfBaialeininitsAbs

21、rptinPressJ.PharaeutialResearh,2022，22(7):1050.9XingJ,henX,ZhngD.AbsrptinandenterhepatiirulatinfbaialininratsJ.LifeSi,2022，78(2):140.10AkaT,SakashitaY,Hanada,eta1.Enteriexretinfbaialein,aflavnefSutellariaradix，vialuurnidatininrat:invlveentfultidrugresistane-assiatedprtein2J.PharRes,2022，21(11):2120.11閆晶超，劉兆明，王天明，等.瀉心湯黃酮類成分在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究J.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2022，42(7):722.12LaiY,HsiuSL,hen，etal.Urinarypharakinetisfbaialein,gninandtheirglysidesafterraladinistratinfSutellariaeRadixinhuansJ.BilPharBull,20