金銀花中綠原酸的提取與分離

1、現(xiàn)代分離技術(shù)實驗安排一實驗說明本課程實驗為一次性綜合大實驗，采取分班進行，每班實驗必須在連續(xù)兩天內(nèi)完成，各組的實驗安排均為周六和周日的上午8點到晚上的8點。每次實驗1個班，每個實驗由兩個人共同完成，即兩人一組，每組一套實驗儀器和一張實驗臺。每班的班長負(fù)責(zé)實驗室的衛(wèi)生和安全。課程考核方法采用實驗考察形式進行，每人只安排一次實驗機會，過期不補，希望各位同學(xué)能夠按時參加。若有沖突，學(xué)生之間可相互對調(diào)。進入實驗室后，各組同學(xué)首先按照儀器清單檢查儀器的數(shù)量和完好情況o若有儀器短缺或破損等問題，請在上課后20分鐘內(nèi)與實驗室工作人員及時聯(lián)系，并要求實驗人員進行補充或更換。實驗結(jié)束后，各組同學(xué)應(yīng)對照儀器清單檢

2、查，分別洗凈后交實驗人員驗收。如有損壞或缺少，應(yīng)按規(guī)定繳納賠償金。因此，希望同學(xué)們愛惜儀器，認(rèn)真操作實驗期間，應(yīng)注意保持實驗室臺面地面和水槽的衛(wèi)生，尤其是自己的工作區(qū)域。同時應(yīng)注意實驗室的財產(chǎn)安全和自身安全，不可在實驗室喧嘩吵鬧。二實驗內(nèi)容題目：金銀花中綠原酸的提取與分離學(xué)習(xí)內(nèi)容：固體中有效成分的提取（索氏法）技術(shù)；減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)；硅膠吸附柱層析；硅膠吸附TLC技術(shù)；薄層色譜對產(chǎn)品純度檢測金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱、抗病毒、保肝利膽的功能，主治癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、風(fēng)熱感

3、冒、瘟病發(fā)熱、急性支氣管炎、肺炎、腮腺炎、膽道凰染、尖節(jié)炎等，能改善放、化療所致的白細(xì)胞降低，有“中藥中的青霉素”的美譽。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評價金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣綠原酸結(jié)構(gòu)式0HoHO一H0H05而1111已OH入實驗方案金銀花粉末75%乙醇索氏提取回流4h濾液（粗提液）減壓濃縮，60C干燥粗提物（浸膏）1:1硅膠拌樣提取物拌樣硅膠柱乙酸乙酯：甲酸：水（不同比例洗脫）含綠原酸的洗脫液濃縮至干綠原酸粗品硅膠柱氯仿一甲醇梯度洗脫綠原酸四、方法1、TLC板的制備與活化在干

4、凈的研缽內(nèi)加入約6g硅膠GF254，在輕輕研磨的同時緩慢加入15ml0.5%竣甲基纖維素鈉水溶液。繼續(xù)研磨約10min,當(dāng)體系粘稠度適宜時，即可進行鋪板。用藥匙將適量糊狀物均勻攤在干凈干燥的載玻片上，然后用手拿住薄板的一端在臺面上輕輕振動，直至薄層均勻為止。將鋪好的薄板平放在水平的臺面上，涼干。將涼干后的薄板放入預(yù)先恒溫到105?110C的烘箱中活化30min。、提取（索氏法）將金銀花制成粗粉，稱取約100g,用75%乙醇采用索氏提取器回流處理4h,其提取液減壓濃縮、60C干燥得浸膏。、分離（1）粗分離取一定量浸膏，按1:1加入200-300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯濕法裝柱（柱型？8.5c

5、mx53cm,硅膠200?300目），干法上樣，柱體依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯甲酸水（20:1:0.1）、乙酸乙酯甲酸水（10:1:0.1）甲醇洗脫。流速控制在每1/10m積即可。分部收集，每管30ml。（2）粗分離過程中薄層檢測粗分離過程中對柱子的洗脫情況隨時進行薄層檢測，展開劑為乙酸丁酯：甲酸：水（7:.5：2.5）。從某個鐳分開始有綠原酸出現(xiàn)（入365nm下顯蘭色熒光）至幾乎看不到蘭色熒光，顯示綠原酸已基本收集完全。結(jié)合顯色劑顯色，將相同流分合并，共分26個部分。其流程圖：浸膏拌樣硅膠柱乙酸乙酯乙酸乙酯：甲酸：水乙酸乙酯：甲酸：水 TOC o 1-5 h z _（20：1：0.1）_（10

6、:1:0.1）1I|III4IAiA4B1B8C1C12圖2星銀花粗分流程圖具體方法：收集液的薄層預(yù)檢：在對各收集管進行TLC分析之前，為了節(jié)約薄板，可用毛細(xì)管將各收集管中的液體依次在一塊薄板上并對各點樣按照相應(yīng)的管號一次編號，等樣點上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點的表明其對應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點的表明對應(yīng)管中沒有化合物。然后再對有斑點的各管按照下法進行TLC分析。TLC分析：用事先活化好的薄層板對每管收集液進行TLC分析，點樣數(shù)視板的大小而定，每兩斑點之間最小間距不少于8mm,其中有一個為綠原酸對照點（注意：每個毛細(xì)管只能用于同一個樣品；每個試管的點

7、樣量應(yīng)相同；點樣時應(yīng)按管號依次進行；每個TLC分析的薄層板應(yīng)依次編號）。等展開劑爬行到板層4/5?5/6高度時，取出薄層板，室溫平放或平放于暖氣片上，讓溶劑揮發(fā)干。然后將薄板置于波長365nm下，觀察和記錄薄板上斑點的分布情況及其對應(yīng)的Rf值。TLC分析內(nèi)容如下：判斷斑點數(shù)的多少。展開后，斑點數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個斑點者表明對應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點顏色越深表明所含對應(yīng)化合物的量越多。根據(jù)R值或斑點高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑點5表明兩管含有相同的成分。B5和C1部分經(jīng)TLC檢測含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1）濃縮至干后得綠原酸粗品。（3）精制B5和C1部分經(jīng)TLC檢測含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1）濃縮至干后得綠原酸粗品，該部分再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿甲醇梯度洗脫，得一化合物（E）,即為綠原酸精品。4、檢測對B5C1和E兩部分分別進行高效液相色譜分析，檢測兩部分的綠原酸含量。測定條件：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?10Lb，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，SPD-10AV紫外檢測器，以乙H10.4%磷酸（13:87）為流動相，327nm下檢測。附：試驗主要用品材料金銀花（為金銀花花蕾和開放花的混合樣品，經(jīng)烘房烘干后，備用。