基因工程工具

1、基因工程工具第1頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二基因工程培育固氮植物的簡要過程：根瘤菌 提取固氮基因禾本科細胞(含固氮 基因)禾本科植株(有固氮特性)重組DNA導入形成第2頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二一.基因工程的概念基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程結(jié)果特點基因拼接技術或DNA重組技術生物體外目的基因DNA分子水平制造出人類需要的基因產(chǎn)物剪切 拼接 導入 表達定向地改造生物的某一性狀第3頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二特異性，即識別特定核苷酸序列，在特定的切點切割。(一)限制性內(nèi)切酶1.分布：2.作用部位

2、:3.特點： 4.切割后的末端形式：二.基因操作的工具主要在微生物中。2種黏性末端平末端磷酸二酯鍵第4頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二GCTTAAGAATTC限制酶限制酶第5頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二GCTTAAGAATTC第6頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二第7頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二什么叫黏性末端？ 被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。第8頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二練1、下列關于限制酶的

3、說法正確的是（ ）A.限制酶廣泛存在于各種生物中，但微生物中少B.一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C.不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵B第9頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二1.要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端。2.如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生相同的黏性末端思維訓練第10頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二（二）DNA連接酶“分子縫合針”1.作用部位： 二.基因操作的工具（1）EcoliDN

4、A連接酶（2）T4DNA連接酶磷酸二酯鍵 DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，是把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個重組的DNA分子才能形成。2.種類：第11頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二（三）基因進入受體細胞的載體“分子運輸車”1.使用運載體的目的：3.條件：二.基因操作的工具一是用它作為運載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞中；二是利用它在宿主細胞內(nèi)進行大量的復制。 （1）質(zhì)粒 （2）噬菌體的衍生物 （3）某些動植物病毒質(zhì)粒有哪些特點？4.運載體的種類：2.運載體的原理：利用運載體侵染宿主細胞的特性第12頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，

5、星期二3.作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件：1）載體DNA 必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基因可以插入到載體上。這些供目的基因插入的限制酶的切點所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA 必須具備自我復制能力，或整合到受體染色體DNA 上，隨染色體DNA 的復制而同步復制。3）載體DNA必須有標記基因，以便重組后進行篩選。4）載體DNA 必須是安全的，不會對受體細胞有害，或不能進入到除受體細胞外的其他生物細胞中去。第13頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二關于質(zhì)粒1.細胞染色體（或擬核DNA分子）外能自

6、主復制的小型環(huán)狀DNA分子；2.質(zhì)粒的存在對宿主細胞無影響； 3.質(zhì)粒的復制只能在宿主細胞內(nèi)完成; 4.存在與許多細菌及酵母菌中; 5.最常用的運載體,尤其大腸桿菌質(zhì)粒.第14頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二大腸桿菌的質(zhì)粒：最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒，其中常含有抗藥基因，如四環(huán)素的標記基因。質(zhì)粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性作用，但復制只能在宿主細胞內(nèi)成。第15頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二練2.以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，試分析：GC AATTC GC CTTAA CG G CG G (1)其中和 是由一種限制酶切割形成的

7、末端，兩者要重組成一個DNA 分子，所用DNA連接酶通常是 。（2） 和 是由另一種限制酶切割形成的 末端，兩者要形成重組DNA片段，所用的連接酶通常是 。第16頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二1.以下說法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體 C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接 D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C課堂檢測第17頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是 A、能復制 （ ） B、有多個限制酶切點 C、具有標記基因 D、它是環(huán)狀DNAD課堂檢測第18頁，共19頁，2022年，5月20日，12點3分，星期二3.有關基因工程的敘述中，錯誤的是（ ）