糖化血紅蛋白檢測(免疫比濁法)

1、糖化血紅蛋白檢測（免疫比濁法）一、用途本產(chǎn)品用于體外定量測定全血樣品中糖化血紅蛋白（HbA1c）的含量。二、臨床意義（一）概述糖化血紅蛋白（HbA1c）由血紅蛋白中2條B鏈N端的纈氨酸與葡萄糖非酶化結(jié)合而成,其水平與血糖水平呈正相關(guān),且為不可逆反應。一般情況下，人體內(nèi)被“糖化”的血紅蛋白占全部血紅蛋白的4%6%,而糖尿病患者則要明顯增高。糖化血紅蛋白可以穩(wěn)定可靠地反映過去23個月血糖的控制情況，是衡量糖尿病人血糖是否達標的關(guān)鍵指標。目前是國際公認的糖尿病監(jiān)控的“金標準”。（二）臨床意義糖化血紅蛋白的測定用于評定糖尿病的控制程度。當糖尿病控制不佳時，糖化血紅蛋白濃度可高至正常2倍以上。因為糖化血

2、紅蛋白是血紅蛋白生成后成糖類經(jīng)非酶促結(jié)合而成。它的合成過程是緩慢且相對不可逆的，持續(xù)存在于紅細胞120天生命期中，其合成速率與紅細胞所處環(huán)境中糖的濃度成正比。因此，糖化血紅蛋白所占比率能反映測定前1-2個月內(nèi)平均血糖水平。本項目的測定已成為糖尿病較長時間血糖控制水平的良好指標。如果HbA1的濃度高于10%,胰島素的劑量就需要調(diào)整。在監(jiān)護中的糖尿病患者，其HbA1的濃度改變2%，就具有明顯的臨床意義。該項目的測定不能用于診斷糖尿病或判斷天-天間的葡萄糖控制，亦不能用于取代每天家庭檢查尿或血液葡萄糖。HbA1c水平低于確定的參考范圍，可能表明最近有低血糖發(fā)作、Hb變異體存在或紅細胞壽命短。任何原因

3、使紅細胞生存期縮短，將減少紅細胞暴露到葡萄糖中的期間，隨之HbA1c%就會下降，即使這一時間平均血液葡萄糖水平可能是升高的。紅細胞壽命縮短的原因，可能是溶血性貧血或其他溶血性疾病、鐮狀細胞特征、妊娠、最近顯著的血液喪失或慢性血液喪失等。（三）醫(yī)學決定水平6%：正常值。4%：控制偏低，但患者容易出現(xiàn)低血糖。6-7%：控制滿意。7.8%：可以接受。89%：控制不好。9%：控制很差，慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的危險因素。三、檢驗原理樣品中總血紅蛋白和糖化血紅蛋白（HbA1C）與膠乳有相同的非特異性吸附和固相化，當加入HbA1c特異性鼠單克隆抗體后形成膠乳中5人金鼠抗人HbA1c單克隆抗體的復合物，此復合物由

4、于羊抗鼠IgG抗體而形成凝集，凝集量因膠乳表面固相化的HbA1c量的不同而不同。吸光度高低反應樣品中HbA1c的含量，通過與同樣處理的校準品比較，即可計算出樣品中HbA1c占總血紅蛋白的百分含量。四、樣品血液樣品采集時正確使用抗凝劑；防止過失性采樣。樣品運送過程中應防止過度振蕩、防止樣品容器的破損、防止樣品被污染、防止樣品及唯一性標志的丟失和混淆，防止樣品對環(huán)境的污染、水分蒸發(fā)。HbA1c測定樣品為抗凝血（EDTA或肝素抗凝）。從靜置3小時以上的血細胞層或2000rpm離心2分鐘后的血細胞層中取出10口1，加入1mlR4溶血并混勻，溶血后樣品在4條件下可穩(wěn)定24小時。五、試劑（一）試劑組成R1

5、：試劑1膠乳適量R2:試劑2鼠抗人HbA1c抗體適量R3：試劑3羊抗鼠IgG抗體適量R4：試劑4溶血劑不同批號的試劑不能混用。（二）試劑準備試劑為液體型試劑，R1試劑開瓶后裝載即可使用。R2試劑需要將R2和R3配制成工作液后裝載使用，用后應及時冷藏保存。（三）試劑的保存及穩(wěn)定性1.未開瓶的試劑應在28密閉避光貯存，穩(wěn)定期為瓶簽標示的有效期。開瓶后的R1試劑應在28密閉保存，穩(wěn)定期為30天。2,配置成工作液的R2試劑在28密閉保存可穩(wěn)定15天，冰凍保存可穩(wěn)定數(shù)月，不能反復凍融。（四）試劑性能可接受的指標空白吸光度：試劑空白在主波長660nm、副波長800nm處，10mm光徑下，吸光度值W1.00

6、0。（五）試劑使用中的注意事項嚴格按照試劑說明書的要求使用試劑。試劑28密閉避光貯存可穩(wěn)定至瓶簽標示的有效期。對超過有效期的試劑不能使用。非工作液試劑嚴禁放置0以下保存，配置好的工作液建議根據(jù)用量分裝后0以下冰凍保存。當試劑變混濁或被污染或空白吸光度值1.000,表明試劑已失效，應棄去。試劑開瓶后，如果長期放置，會吸收空氣中的二氧化碳，導致pH值下降，造成測定值不準確，因此請盡快使用。因膠乳放置一段時間后可能會下沉，請每隔7天對R1試劑混勻。混勻時避免產(chǎn)生氣泡。裝載試劑時防止產(chǎn)生氣泡，否則結(jié)果無法保證。不同批號的試劑之間盡管批間差很小，但仍然不能混用，否則試劑的穩(wěn)定性將無法保證。（六）預防危險

7、發(fā)生的注意事項使用時應避免與人體接觸，當試劑誤入口中或眼中，或者附著到皮膚上的時候，請立即用大量清水沖洗，如有必要，請接受醫(yī)生的治療。（七）處理廢棄物時的注意事項試劑反應后所產(chǎn)生的廢液及使用后的包裝材料應集中收集后按照相關(guān)法規(guī)進行廢物處理。六、操作步驟（一）檢測程序檢測樣品程序和參數(shù)設(shè)置請參照各儀器使用說明書及儀器SOP。各儀器檢測參數(shù)界面詳見附件。1.基本參數(shù)方法：終點法主波長：方法：終點法主波長：660nm副波長：800nm2.操作樣品/試劑：1/50反應溫度：37反應時間：10min(1)R2工作液配制：將一支R3吸出加入一瓶R2中，并用R2充分洗滌R3空瓶，然后輕輕顛倒混勻，防止產(chǎn)生泡

8、沫。(2)工作曲線繪制將校準品濃度由低到高順序排列后，按下表操作：加入物CiC2C3C4C5樣品(口1)88888蒸餾水/生理鹽水（口1）試劑R1(口1)300300300300300混勻，37恒溫5分鐘試劑R2工作液(口1001001001001001）混勻，37恒溫1分鐘，660nm波長處以空白管調(diào)零測定吸光度A1，37恒溫4鐘后測定吸光度A2，計算A=A2-A1,繪制校準曲線圖。(3)樣品測定加入物空白（8加入物空白（8）測定（U）TOC o 1-5 h z樣品（口1）8蒸餾水生理鹽水（口8-試劑R1（2l）300300混勻，37恒溫5分鐘。試劑R2工作液（口l）100100混勻，37恒

9、溫1分鐘，660nm波長處以空白管調(diào)零測定吸光度Aj37恒溫4鐘后測定吸光度A2,計算A=A2-A1。操作流程圖空白讀數(shù)測定讀數(shù)5分鐘空白調(diào)零時間:溫度:37空白讀數(shù)測定讀數(shù)5分鐘空白調(diào)零時間:溫度:371分鐘4分鐘R:300ul樣品:8ulR2:100ul主波長:660nm副波長:800nm計算使用多點非線性/半對數(shù)校準模式，以樣條函數(shù)為計算模式，根據(jù)校準品的值與吸光度變化值作劑量/響應曲線，樣品中HbA1c的含量可根據(jù)其吸光度變化值在劑量/響應曲線上計算出。七、參考值范圍3.8%-5.8%八、注意事項（一）本試劑盡管具有較好的抗交叉污染能力，但仍應根據(jù)儀器性能及實驗室條件做好防止交叉污染的工作。（二）試劑與樣品用量可根據(jù)不同儀器的需要，在試劑樣品體積比例不變的條件下，適當增加或減少試劑與樣品的用量。（三）采用必要的預防措施使用試劑，試劑使用后應立即蓋緊瓶蓋，避免污染。（四）準確的結(jié)果取決于準確校正的儀器、溫度及時間的控制。（五）藥物、抗凝劑等其他物