生黃合劑對(duì)病毒性心肌炎小鼠血清IL

1、生黃合劑對(duì)病毒性心肌炎小鼠血清IL【關(guān)鍵詞】生黃合劑；,病毒性心肌炎；,細(xì)胞因子摘要：目的觀察生黃合劑對(duì)病毒性心肌炎小鼠血清IL2及IL10的影響。方法對(duì)昆明種小鼠采用柯薩奇病毒VB3腹腔注射染毒，制成病毒性心肌炎動(dòng)物模型，觀察生黃合劑對(duì)模型鼠的一般情況、生存率及IL2及IL10的影響。結(jié)果各治療組小鼠的生存率明顯高于病毒對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)所試藥物對(duì)VB3感染鼠均有保護(hù)作用，生黃合劑11，12組對(duì)感染鼠的治療作用要好于陽(yáng)性藥物組，尤其是11液組的治療作用最正確；生黃合劑對(duì)模型鼠血清IL2及IL10有調(diào)節(jié)作用。結(jié)論生黃合劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性病毒性心肌炎小鼠具有治療作用。關(guān)鍵詞：生黃合劑；病毒性心肌炎；細(xì)胞因子近

2、年來(lái)病毒性心肌炎viralyarditis，V的發(fā)病率呈上升趨勢(shì),已成為臨床的常見病和多發(fā)玻腸道病毒中的柯薩奇病毒B組xsakievirusB3，VB3是引起病毒性心肌炎的主要病原體，調(diào)查說明病毒性心肌炎患者中有近50%的是由VB3感染所致1。V的發(fā)病主要與病毒直接損傷心肌細(xì)胞、免疫損傷及生化機(jī)制有關(guān)。目前對(duì)該病的治療仍缺乏有效手段。生黃合劑由黃芩莖葉總黃酮和傳統(tǒng)名方生脈飲組成。預(yù)試驗(yàn)證明生黃合劑具有較好的抗病毒作用。本研究觀察了生黃合劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠病毒性心肌炎的作用，為臨床試驗(yàn)及進(jìn)一步討論其作用機(jī)制提供根據(jù)。1材料與方法1.1材料VB3病毒Nany株由河北醫(yī)科大學(xué)微免教研室惠贈(zèng)。在Hela細(xì)

3、胞上傳代，反復(fù)凍融3次，用微量法測(cè)定其半數(shù)組織感染量TID50為10-5.5。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為180只45周齡昆明種小鼠，雌雄各半，體重1618g，二級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。中藥配制：生脈飲人參五味子麥冬=121與總黃酮承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所提供按不同比例制成11，12合劑。利巴韋林注射液0.1g/l濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司。1.2方法將小鼠隨機(jī)等分為6組，每組30只。A組為生脈飲治療組；B組為11液治療組；組為12液治療組；D組為陽(yáng)性藥物對(duì)照組；E組為病毒對(duì)照組；F組為正常對(duì)照組。AE組腹腔注射1000TID50/0.1l的VB30.1l，F(xiàn)組腹腔注射RPI1640維持液0.1l

4、，1h后A組灌胃給藥，0.2l/10g，D組利巴韋林0.1l/10g80g/kg腹腔注射，F(xiàn)組給予一樣劑量的生理鹽水灌胃，2次/d，持續(xù)給藥10d，觀察14d。分別于第7，14d每組隨機(jī)抽取6只小鼠摘眼球取血，別離血清，用AB-HRP夾心ELISA法試劑盒購(gòu)自美國(guó)Bisue公司測(cè)定其IL2和IL10的程度變化。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展方差分析、SNK檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)=0.05。2結(jié)果2.1小鼠一般情況及生存率F組小鼠活動(dòng)自如，無(wú)一例死亡。AD組小鼠的一般情況好于E組，E組小鼠在接種VB3后第3天開場(chǎng)死亡，主要集中在第610天，而AD組小鼠的死亡時(shí)間推延到第6天

5、，第14天各組小鼠存活情況見表1。AD組與E組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異2=40.11，P0.005,A組與B組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異2=4.46，P0.05,B組和組分別與D組比擬均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異2=10.24，2=5.33，P0.05。結(jié)果說明實(shí)驗(yàn)所試藥物對(duì)VB3感染鼠均有保護(hù)作用，B、組對(duì)感染鼠的保護(hù)和治療作用要好于D組，尤其是11液組的保護(hù)和治療作用最正確。結(jié)果見表1。表1各組小鼠染毒第14天的存活率比擬略與E、F組比擬，aP0.005；與D組比擬，bP0.05；與A組比擬，P=0.0352.2細(xì)胞因子檢測(cè)在接種VB3后第7，14天各組小鼠血清中IL-2和IL-10的測(cè)定結(jié)果見表23。用析因方差分析對(duì)不

6、同時(shí)間小鼠血清中IL-2濃度進(jìn)展比擬F=4.211，P0.005，不同時(shí)間與分組之間存在交互作用,然后分析不同時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)。接種病毒后第7天各組小鼠血清中IL-2程度比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異F=7.427，P0.05,生脈飲組、11液組和12液組與病毒對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；第14天各組小鼠的血清中IL-2程度比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異F=11.529，P0.005，11液組小鼠的血清中IL-2程度低于病毒對(duì)照組(0.01P0.05)。同樣用析因方差分析對(duì)不同時(shí)間小鼠血清中IL-10濃度進(jìn)展比擬F=6.788，P0.005，不同時(shí)間與分組之間仍存在交互作用，然后分析不同時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)。接種病毒后

7、第7天各組小鼠血清中IL-10程度比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異F=46.597，P0.005,病毒對(duì)照組與其它治療組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)，生脈飲組及11液組和12液組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。第14天各組小鼠血清中IL-10程度比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異F=8.977，P0.001，11液組與其它組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3討論本試驗(yàn)研究證實(shí)：利巴韋林對(duì)VB3感染鼠有一定治療作用，但治療效果不夠理想，可能與V的免疫損傷有關(guān)。生脈飲能有效地保護(hù)VB3感染鼠，使血清中IL2程度第7天低于病毒對(duì)照組，提示：生脈飲可能通過調(diào)節(jié)免疫，抑制過氧化脂質(zhì)及自由基的

8、產(chǎn)生，增強(qiáng)過氧化物酶的活性，保護(hù)心肌細(xì)胞等機(jī)制對(duì)VB3感染鼠起到治療作用。自20世紀(jì)80年代以來(lái)，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所對(duì)黃芩莖葉有效成分進(jìn)展了廣泛系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)黃芩莖葉提取物總黃酮的主要化學(xué)成分為野黃芩苷，具有廣泛藥理活性，如抗炎、抗病毒作用，黃芩苷對(duì)流感病毒有抑制作用24，有改善心律失常作用5等。因黃芩莖葉總黃酮與生脈飲均有調(diào)節(jié)免疫、改善心律失常的作用，但兩者的藥理作用不盡一樣。在病毒誘發(fā)的炎癥至感染后自身免疫反響的產(chǎn)生及進(jìn)展過程中，細(xì)胞因子被認(rèn)為具有重要作用6。關(guān)于心肌炎免疫反響，目前人們極為關(guān)注Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞的穿插作用。Th1相關(guān)細(xì)胞因子IL2對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞免疫起關(guān)鍵作用；而Th2

9、相關(guān)細(xì)胞因子IL10對(duì)增強(qiáng)體液免疫即IgG及Ig抗體的產(chǎn)生起到重要作用。不同類型細(xì)胞因子間可互相影響及調(diào)節(jié)6。病毒性心肌炎存在免疫失常，包括TH1/TH2失衡、NK細(xì)胞活性降低等。黃芩莖葉總黃酮與生脈飲可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)來(lái)調(diào)節(jié)TH平衡，降低TH1類細(xì)胞因子程度，進(jìn)步TH2類細(xì)胞因子的濃度。第14天11液組小鼠血清中IL10程度高于其它各組，IL2程度低于病毒對(duì)照組。表2染毒第7天各組小鼠血清IL-2及IL-10的程度比擬略與E組比擬，P0.05；與其它各組比擬，P0.05表3染毒第14天各組小鼠血清IL-2及IL-10的程度比擬略與E組比擬，P0.05；與其它各組比擬，P0.001本文研

10、究結(jié)果顯示生脈飲與黃芩莖葉總黃酮按11配方與按12配方均對(duì)VB3感染鼠有保護(hù)作用，尤其生脈飲與黃芩莖葉總黃酮按11配方效果最好，療效明顯優(yōu)于生脈飲及利巴韋林，生黃合劑對(duì)模型鼠血清IL2及IL10有調(diào)節(jié)作用，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：1JakF,druffD.Viralyarditis.Arevie.AJPathl,1980,101(2):425.2周曉霞，李素婷,周曉慧,等.黃芩莖葉總黃酮抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2000,2(6):150.3顏正華.中藥學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:136.4NagaiT,SuzukiY,TiriT,etal.Antiviralativityfplantflavnid,5,7,4rihydrxy8ethxyflavne,frthertsfSutellariabaialensisagainstinfluenzaA(H3N2)andBvirusesJ.Bil-Phar-Bull,1995,18(2):295.5佟繼銘，劉玉玲，周崇坦,等.黃芩莖葉總黃酮抗心