CNAS在微生物應用說明

1、CNAS在臨床微生物學檢驗領域的應用說明范 圍本文件規(guī)定了CNAS對醫(yī)學實驗室微生物學檢驗領域的認可要求。微生物專業(yè)中涉及到的病毒血清學檢驗、基因擴增檢驗、寄生蟲檢查等應符合相應專業(yè)領域應用說明的要求。管理要求4.6.2 試劑質(zhì)量驗證應符合如下要求：A)新批號或貨次的試劑使用前，應通過直接分析參考物質(zhì)、新舊批號平行實驗或常規(guī)質(zhì)控等方法進行驗證，并記錄；B)新批號及每一貨次的試劑、紙片，如吲哚試劑，桿菌肽，奧普托辛，X、V、XV 因子紙片等應使用陰陽性質(zhì)控進行驗證；C)每一新批號藥敏試驗紙片使用前應以標準菌株驗證；D)所有染色劑（革蘭染色,特殊染色，熒光染色）的新批號，應用已知陽性和陰性（適用時

2、）的質(zhì)控菌株進行驗證；管理要求E)直接抗原檢測試劑，若含內(nèi)質(zhì)控，每一新批號或相同批號不同貨次應檢測陽性和陰性外質(zhì)控并記錄；若不含內(nèi)質(zhì)控，實驗應每天檢測陽性和陰性質(zhì)控并記錄；F)定性試驗試劑每次檢測時應至少包括一個已知陽性和一個已知陰性菌株/樣本。G)培養(yǎng)基外觀宜良好,每批號/貨次的商品或自配培養(yǎng)基應檢測相應的性能，包括無菌試驗、生長試驗或與舊批號平行試驗、生長抑制試驗（適用時）、生化反應（適用時）等，應以標準菌株驗證。(由廠家提供)H）一次性定量接種環(huán)每批次應抽樣驗證。技術要求5.1 人員5.1.2 上崗前應接受辨色力檢查。5.1.4 中級技術職稱，醫(yī)學、醫(yī)學檢驗專業(yè)背景，或相關專業(yè)背景經(jīng)過醫(yī)

3、學檢驗培訓，三年臨床微生物工作經(jīng)驗。5.1.6 應至少每6個月對人員進行勝任該崗位的考核，沒有通過崗位職責考核人員應再培訓和再考核，并記錄。5.1.10 制定本實驗室的生物安全操作規(guī)程并進行培訓，以減小職業(yè)暴露的危險。 技術要求5.2 設施和環(huán)境條件5.2.1 應有足夠的辦公、文字處理、培養(yǎng)基制備、實驗工作空間。宜有適當?shù)乃?、排水道、電源插座、通風設施，電話。5.2.2 實驗室門應帶鎖可自動關閉，有可視窗，有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入的設計；應通風，如有可開啟的窗戶，應設置防蟲紗窗；洗手池宜設置在靠近出口處；實驗室門口應設掛衣裝置懸掛工作服，出口應有在黑暗中可明確辨認的標識；實驗室內(nèi)應設洗眼

4、設施，應有應急噴淋裝置；應在實驗室內(nèi)配備生物安全柜，實驗室所在的建筑內(nèi)應配備壓力滅菌器。5.2.4 實驗室內(nèi)照明宜充足，避免陽光直射及反射，如果可能，可在實驗室內(nèi)不同區(qū)域設置照明控制，以滿足不同實驗的需要。應有可靠的電力供應和應急照明。技術要求5.3 實驗室設備5.3.2 設備性能應達到規(guī)定標準，并且符合檢驗要求。 A)自動化鑒定儀、血培養(yǎng)儀的校準應滿足制造商建議； B)至少每半年校準一次的設備至少應包括濁度儀； C)每年進行檢定或校準的設備至少應包括：生物安全柜（高效過濾器、氣流、負壓等參數(shù)）；CO2濃度檢測儀；細胞離心機；壓力滅菌器；游標卡尺；培養(yǎng)箱；溫度計；移液器、微量滴定管或自動分配器

5、。 技術要求 D)應保存儀器功能監(jiān)測記錄的設備至少應包括：溫度依賴設施（冰箱、孵育箱、水浴箱、加熱塊等每日記錄溫度）；CO2培養(yǎng)箱（每日記錄CO2濃度）；超凈工作臺（定期做無菌試驗）；壓力滅菌器（至少每個滅菌包外貼化學指示膠帶、內(nèi)置化學指示卡；定期進行生物監(jiān)測）； E)應制定預防性維護計劃并記錄的設備至少應包括：生物安全柜；CO2培養(yǎng)箱；自動化鑒定儀；血培養(yǎng)儀；壓力滅菌器；超凈工作臺；顯微鏡；離心機。技術要求5.3.3所有試劑宜標注：名稱和質(zhì)量、濃度或滴度；存放條件；配制時間；失效期。以上內(nèi)容亦宜記錄。若試劑啟封，改變了有效期和儲存條件，宜記錄新的有效期。試劑的儲存條件宜遵循生產(chǎn)商的建議，并在

6、標明的有效期內(nèi)使用。培養(yǎng)基標簽應包含生產(chǎn)日期（批號）、保質(zhì)期，適用時包括配方、質(zhì)量控制、貯存條件等信息。5.3.4 藥敏用標準菌株種類和數(shù)量應滿足實驗室工作要求，并保存其來源、傳代等記錄，并有證據(jù)表明標準菌株性能滿足要求。5.3.7如果設備故障影響了方法學性能，在設備修復、校準后，實驗室應對設備性能進行驗證，例如檢測質(zhì)控菌株或已知結果的標本。檢驗前程序 5.4.1 檢驗申請單應包括標本來源和臨床診斷；5.4.3 制定微生物標本的采集及運送指南；5.4.8 應制定標本接收標準，評估標本的合格性并反饋評估結果。不合格的痰標本宜盡快通知醫(yī)生、護士或患者（門診），以便重新采集。 檢驗程序5.5.1 細

7、菌培養(yǎng)和鑒定程序應滿足如下要求：所選擇的涂片、染色技術、培養(yǎng)基應能從標本中分離、識別相應的病原菌；鑒定方法應符合要求；應有處理組織標本的能力。應明確傷口標本培養(yǎng)程序，深部傷口感染應至少包括標本采集、需氧菌及厭氧菌的培養(yǎng)及鑒定。應有適當?shù)姆椒z測苛養(yǎng)菌（如放線菌，快速生長的分枝桿菌）。厭氧菌培養(yǎng)時間與標本類型、診斷有關，在第一次培養(yǎng)評估之前應有足夠的培養(yǎng)時間（至少48小時）。應有合適的液體培養(yǎng)基，有合適的鑒定方法（適用時）。檢驗程序細菌抗菌藥物敏感性試驗程序應滿足如下要求：應制定常規(guī)藥敏試驗方法的操作程序；抗菌藥物敏感性試驗方法包括紙片擴散法、稀釋法、濃度梯度擴散法或自動化儀器檢測；抗菌藥物敏感

8、性試驗方法及結果判斷至少應遵循上一年的標準。檢驗程序5.5.2 應制定程序驗證檢驗程序符合預期用途。 應按優(yōu)先順序依次選擇標準菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株對商業(yè)鑒定系統(tǒng)（包括自動、半自動、手工）每種板（條/卡/管）的鑒定/藥敏結果符合性進行驗證。 實驗室應制定人員比對的程序，規(guī)定由多個人員進行的手工檢驗項目驗證的方法和判斷標準。5.5.3 除一般內(nèi)容外，檢驗程序還應包括適宜的培養(yǎng)環(huán)境和足夠的培養(yǎng)時間；初次分離用非選擇性培養(yǎng)基的平板直徑不應小于9cm，應只接種一份標本。檢驗程序5.6 檢驗程序的質(zhì)量保證5.6.1 制定內(nèi)部質(zhì)量控制程序 使用中的染色劑（革蘭染色,特殊染色，熒光染色），至少每周用已

9、知陽性和陰性（適用時）的質(zhì)控菌株檢測染色程序。凝固酶、過氧化氫酶、氧化酶、內(nèi)酰胺酶使用時，每天應做陰性和陽性質(zhì)控，商業(yè)頭孢菌素試劑的內(nèi)酰胺酶試驗可遵循制造商的建議。診斷性抗血清試驗應設陰性、陽性對照。檢驗程序?qū)嶒炇页Ｒ?guī)采用的藥敏試驗方法應以參考菌株連續(xù)檢測2030天，每一組藥物/微生物超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的頻率需小于1/20或2/30。此后，應每周使用標準菌株對藥敏試驗進行質(zhì)控。應保存抗菌藥物敏感性試驗資料，并至少每年向臨床醫(yī)師報告。檢驗程序5.6.4 實驗室應按照CNAS-RL02能力驗證規(guī)則的要求參加相應的能力驗證活動。實驗室負責人或指定負責人應監(jiān)控室間質(zhì)量評價活動的結果，并

10、在結果報告上簽字。5.6.5 無CNAS承認的能力驗證（室間質(zhì)量評價）的項目，需至少每6個月進行一次性能評估。5.6.6 應至少每年進行工作人員的能力比對，至少包括顯微鏡檢查、培養(yǎng)結果判讀、抑菌圈測量、結果報告。結果報告5.8.3 結果報告應與檢驗的內(nèi)容一致；血培養(yǎng)陰性結果報告應注明培養(yǎng)時間。 5.8.7 應有文件規(guī)定，當某些對患者處理具有重要意義的實驗結果達到危急值時，立即通知臨床醫(yī)生或相關人員。 5.8.9 血液、腦脊液標本的培養(yǎng)鑒定應及時發(fā)送分級報告；無菌部位來源標本宜報告直接涂片鏡檢的陽性結果。5.8.11 應在收到標本24小時內(nèi)報告分枝桿菌抗酸或熒光染色結果。 申請認可的微生物學檢驗項目要求B.1上呼吸道標本培養(yǎng)和鑒定（普通細菌），應同時申報A組鏈球菌（6B070）和流感嗜血桿菌（6BXXX）。B.2下呼吸道標本培養(yǎng)和鑒定（普通細菌），應同時申報肺炎鏈球菌（6B075）、流感嗜血桿菌（6BXXX）。B.3糞便培養(yǎng)和鑒定（普通細菌），應同時申報沙門菌鑒定（6B085）+血清型分類（6B820）；志賀菌鑒定（6BXXX）+