土霉素鈣預(yù)混劑效價檢驗(yàn)操作

1、土霉素鈣預(yù)混劑效價檢驗(yàn)操作規(guī)程4.8效價測定4. 8. 1.器具4.8. 1.1.操作室光線明亮，操作室分為兩局部，彼此分開；一局部為一般操作 間，一局部效價測定操作間。操作間內(nèi)設(shè)有到達(dá)空氣消毒的紫外線燈； 裝有空調(diào)設(shè)備，控制室溫20-25C；操作臺應(yīng)穩(wěn)固，臺面用玻璃板墊平， 用水平儀校準(zhǔn)，保持水平。室內(nèi)應(yīng)防止抗生素的污染。4. 8. 1.2.雙碟為硬質(zhì)玻璃，深16-17mm,內(nèi)徑約90mm，碟底外表要求平坦，厚薄均勻無 凹凸現(xiàn)象。用過的雙碟經(jīng)0.1 IMpa、121 30min高壓蒸汽滅菌后用水沖洗, 刷洗干凈，再用蒸儲水清洗三次，晾干。將雙碟盛于適宜容器內(nèi)在150-160C干熱滅菌2小時或

2、高壓121C蒸汽滅菌 30min,備用。8. 1.3.陶瓦蓋內(nèi)徑約103mm，外徑約108mm,平坦，吸水性強(qiáng)，應(yīng)定期清洗，干燥。1.4.鋼管 外徑(8.00. 1)或(7.80. 1) mm,內(nèi)徑(6. 00. 1) mm 和高(10 0.1) mm,每套鋼管重量差異不得超過0.05g,鋼管內(nèi)外壁及兩端面光 潔平坦，管壁厚薄一致.每次使用后先經(jīng)O.UMpa、121 30min高壓蒸 汽滅菌用水沖洗干凈后，再用洗衣粉水在超聲波中清洗30min,用水沖 洗再用蒸儲水沖洗二次，并在電爐上煮沸幾分鐘，晾干，在160165 干熱滅菌2h以上備用。檢查方法：用游標(biāo)卡尺從不同的位置測量外徑，內(nèi)徑及高度是否

3、符合要求。4. 8. 1.5.鋼管放置器置于效價測定操作間內(nèi)，鋼管放置器為防止抗生素污染，應(yīng)定期用75% 的酒精棉擦拭，并用泗精棉火焰燒小孔。4. 8. 1.6.鐐子夾鋼管用。夾鋼管后，用水清洗，再用蒸儲水沖洗3次,置適宜容器內(nèi) 在160165干熱滅菌2ho4.8. 1.7.恒溫培養(yǎng)箱隔水式為宜，3537及2627C,隔板上可備有帶孔玻璃板并墊平。4.8. 1.8.滅菌刻度吸管吸取菌液及培養(yǎng)基用。實(shí)驗(yàn)用后應(yīng)立即置5%石碳酸或1： 1000新潔爾 滅溶液中消毒后，再按玻璃容器常規(guī)洗滌，晾干。置適宜容器中160C 以上干熱滅菌2h或121 蒸汽滅菌30min烘干備用。4. 8. 1.9.玻璃容器包

4、括移液管、刻度吸管及容量瓶等按“玻璃器皿檢定規(guī)程”進(jìn)行標(biāo)定，要 符合一等品規(guī)定，每次應(yīng)用前用清潔液浸泡，水沖洗，純化水沖洗三次, 淋干。4. 8. 1. 10.稱量管用畢先用水沖洗淋干，置清潔液中浸泡2小時以上，自來水沖洗、蒸儲水 沖洗三次，置于干燥器中備用。4. 8. 1. 11.電熱恒溫干燥箱 室溫+10C2504. 8. 1. 12.恒溫水浴鍋 37-1004. 8. 1. 13.抑菌圈測定儀儀器必須定期按抑菌圈測定儀檢驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行自校符合規(guī)定方能使用。4. 8. 1. 14.分析天平天平感量0. Img4. 8. 2. 方法 管碟法4.8.2. 1指示菌：藤黃微球菌4. 8. 2. 1.

5、 1藤黃微球菌(28001)菌液制備在測定樣品前12天,從冰箱中取出傳代用的母種(母種每月傳代一次).放 置室溫片刻后,于甲酚皂液消毒和紫外燈消毒30分鐘以上的潔凈工作室內(nèi)， 按無菌操作，在火焰旁,接種在另一支斜面培養(yǎng)基上,置2627的恒溫培 養(yǎng)箱中.培養(yǎng)24小時，取出在潔凈室內(nèi)，按無菌操作用滅菌過的培養(yǎng)基HI 或0. 9%的滅菌氯化鈉溶液將斜面菌苔洗下,制成懸浮液.置28c的冰箱中 備用，保存期為一個月。4. 8.2. 1.2平皿培養(yǎng)基制備采用抗生素檢定培養(yǎng)基II號，PH6. 56. 6.稱取抗生素檢定培養(yǎng)基II號 27. 0g,溶解于1000ml蒸鐳水中，用6. Omol/L氫氧化鈉H或l

6、mol/L鹽酸調(diào)節(jié) PH, PH略高0. 20. 4,使消后的PH為6. 56. 6.然后分裝于三角瓶內(nèi)，用棉 塞、牛皮紙、細(xì)繩子包扎好，放置壓力蒸汽消毒器內(nèi)，121蒸汽滅菌30分 鐘，待消毒完畢,冷卻至60c左右,取出.再取少許倒入平皿,凝固后于361 恒溫箱內(nèi)，恒溫培養(yǎng)2天后，肉眼檢查無雜菌后備用.有效期限為15天。4. 8. 2. 1. 3指示菌(28001)斜面培養(yǎng)基制備稱取營養(yǎng)瓊脂32. 0g于1000ml蒸儲水中，用6. 0 mol/LNaOH調(diào)節(jié)PH, PH略高0. 2-0. 4,使消后的PH為7. 07. 2.然后分裝于茄子瓶和試管內(nèi)， 用棉塞、牛皮紙、細(xì)繩子包扎好，放置于壓力

7、蒸汽消毒器內(nèi)，121C蒸汽滅 菌30分鐘，待消毒完畢，冷卻至60左右，取出，搖勻鋪成斜面。凝固后 取少許于361恒溫箱內(nèi)，恒溫培養(yǎng)2天后，肉眼檢查無雜菌，放入冰箱 備用。有效期為一個月。4. 8. 2. 1.4PH6. 0 緩沖溶液主要成份及各稱:磷酸氫二鉀:2g；磷酸二氫鉀:8g；加水使成1000ml,濾過， 分裝，121蒸汽滅菌30分鐘。有效期為20天。4.8.2. 1.5無菌水的制備將蒸儲水分別分裝于三角瓶和試管中，用棉塞、牛皮紙、細(xì)繩子包扎好，121 蒸汽滅菌30分鐘.有效期為20天。4. 8. 2. 2操作步驟4. 8. 2. 2. 1精確稱取土霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量于50ml燒杯中(使之配

8、成1000u/ml),加 2%草酸溶液適量使pH值至1.52.0,重復(fù)攪拌，暗處放置45min后完全移 入到50ml容量瓶中，加滅菌水定量制成每1ml中約含1000單位的溶液，靜 置，封好置5以下冰箱中備用(此標(biāo)準(zhǔn)品儲藏液使用期限為：7天)。使用 時將標(biāo)準(zhǔn)液放至室溫，再用緩沖溶液稀釋成每ml含10-40單位的土霉素溶液。 樣品的前處理：根據(jù)樣品的估計效價，精密稱取適量，加2%草酸溶液適量 使pH值至1. 52. 0,重復(fù)攪拌，暗處放置45min后加滅菌水定量制成每1ml 中約含1000單位的溶液，靜置，取上清液。即得供試品溶液，備用。4. 8. 2. 2. 2稱樣量的計算：W=VXC/P式中：

9、M為需標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的重量(mg)；V：為溶解標(biāo)準(zhǔn)品或供試品制成濃溶液時所用容量瓶的體積量(ml)； C：為標(biāo)準(zhǔn)品或供試品溶液的濃度(u/ml或ug/ml )；P：為標(biāo)準(zhǔn)品的純度或供試品的規(guī)定效價(u/ml或ug/ml)。4. 8. 2. 2. 3稀釋：標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液的稀釋應(yīng)采用容量瓶，每步稀釋，取樣量 不得少于2nli為宜，稀釋步驟一般不超過3步第一步 10. 0ml(1000u/ml) -*50ml 容量瓶f200u/ml第二步 5. 0ml (200u/ml) -50ml 容量瓶-20u/nil取 5. 0ml(200u/ml) -* 100ml 容量瓶-lOu/ml雙碟的制備4.

10、8. 2. 2. 3. 1 倒下層根據(jù)樣品的數(shù)量，計算底層培養(yǎng)基的用量，將5.4.2. 1.2所述培養(yǎng)基加熱融 化稍冷，用無菌的大單位刻度吸管分別注入融化的培養(yǎng)基1820ml于無菌 的平底雙碟內(nèi)均勻攤布,放置水平臺面上使之凝固。4.8. 2. 2. 3. 2 倒上層根據(jù)樣品的數(shù)量,計算菌層培養(yǎng)基的用量，將5. 4. 2.1. 2所述培養(yǎng)基加熱融 化后,稍冷置于482水浴內(nèi)，保溫,按已試驗(yàn)妥的菌量加入制備的菌液, 并回轉(zhuǎn)三角瓶使之充分混勻，用無菌吸管取5ml加入已凝固的底層培養(yǎng)基 上立即旋轉(zhuǎn)搖勻，使其均勻攤布,靜置約15分鐘左右待凝固備用。4. 8. 2. 2. 3. 3每批樣品取雙碟六只，每碟

11、安放小鋼管6只將已制備好的標(biāo)準(zhǔn)液和檢品液 分別間隔滴入小鋼管中(見圖)，每只蓋上干燥的陶瓷瓦蓋，置361恒溫箱培養(yǎng)1618小時。(一、標(biāo)準(zhǔn)液高單位，ZQ品液高單位T2檢品液低單位3 口3 0 )標(biāo)準(zhǔn)液低單位二4. 8. 2. 2. 3. 4抑菌圈測量/將培養(yǎng)好的雙碟取出，仰蓋上玻蓋，按編號排好次序，用抑菌 圈測量儀,測量抑菌圈的直徑(抑菌圈直徑應(yīng)在18-22mm為宜)，并記錄其 數(shù)值。4.8. 2.2.3. 5計算公式第一碟S.s2T. L第二碟S,S2T( T2第三碟S.S2T. T2第四碟S.s2T. T2第五碟S.s23 L第六碟S.S2Ti T2計算 2 s2SiLT.V=(ST2+S T,)-( 2s2+XS1) W=(ST2+SS2)-( SL+SSJ式中：2 Sl高濃度標(biāo)準(zhǔn)液所致的各抑菌直徑的總和； S尸低濃