37微生物表面擦拭方法驗(yàn)證方案

1、微生物棉簽擦拭取樣方法及檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案文件編號(hào)：VP-01-06-00-037起草人日期審核人日期批準(zhǔn)人日期重慶麥克福新制藥VP-01-06-00-037第2頁(yè)共16頁(yè)重慶麥克福新制藥VP-01-06-00-037重慶麥克福新制藥VP-01-06-00-037第 頁(yè)共16頁(yè)6.4表面微生物擦拭取樣限度檢查方法驗(yàn)證的不可接受風(fēng)險(xiǎn)匯總：編號(hào)項(xiàng)目/功能RPN(SxPxD)風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)01實(shí)驗(yàn)組菌種回收率不達(dá)標(biāo)20(10 x2x1)中注：當(dāng)kRPN27,但嚴(yán)重性Sx發(fā)生可能性P為10 x2或9x2時(shí)，仍需按中等以上風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行后續(xù)控制。7、驗(yàn)證實(shí)施計(jì)劃確認(rèn)前培訓(xùn)方案批準(zhǔn)后1個(gè)工作日完成驗(yàn)證方案培訓(xùn)。.組織實(shí)

2、施確認(rèn)方案批準(zhǔn)后15個(gè)工作日內(nèi)完成驗(yàn)證方案的實(shí)施工作。出具報(bào)告驗(yàn)證方案實(shí)施完成后5個(gè)工作日出具報(bào)告。8、驗(yàn)證前的準(zhǔn)備8.1主要驗(yàn)證用儀器儀表的確認(rèn)8.1.1確認(rèn)方法：查看手提式壓力蒸汽滅菌鍋、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電熱恒溫干燥箱、生物安全柜校驗(yàn)日期，確定是否在有效期內(nèi)；.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：確認(rèn)提式壓力蒸汽滅菌鍋、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電熱恒溫干燥箱、生物安全柜已經(jīng)過(guò)校驗(yàn)，校驗(yàn)合格。.3設(shè)備檢定情況確認(rèn)結(jié)果表2設(shè)備檢定確認(rèn)表儀器名稱規(guī)格型號(hào)檢定情況檢定部門手提式壓力蒸汽滅菌器YXQ-LS-18SIAA生化培養(yǎng)箱SHP-250霉菌培養(yǎng)箱BMJ-250電熱恒溫干燥箱DHG-9141A生物安全柜BHC

3、-800II-A2結(jié)論檢查人/日期復(fù)核人/日期8.2試驗(yàn)環(huán)境確認(rèn)8.2.1確認(rèn)方法：查看陽(yáng)性對(duì)照室、生物安全柜的環(huán)境監(jiān)測(cè)報(bào)告，確認(rèn)懸浮粒子、風(fēng)速、沉降菌、浮游菌、表面微生物是否符合GMP要求。8.2.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：確認(rèn)懸浮粒子、風(fēng)速、沉降菌、浮游菌、表面微生物符合GMP要求。8.2.3試驗(yàn)環(huán)境確認(rèn)結(jié)果表3試驗(yàn)環(huán)境的確認(rèn)項(xiàng)目風(fēng)速懸浮粒子沉降菌浮游菌表面微生物陽(yáng)性檢測(cè)室生物安全柜結(jié)論檢查人/日期復(fù)核人/日期8.3驗(yàn)證用菌種及培養(yǎng)基表4菌種確認(rèn)菌種名稱編號(hào)來(lái)源購(gòu)進(jìn)日期大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉結(jié)論檢查人/日期復(fù)核人/日期表5培養(yǎng)基確認(rèn)培養(yǎng)基、緩沖液名稱干粉批號(hào)配制批號(hào)干粉來(lái)

4、源胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基檢查人/日期復(fù)核人/日期8.4.人員培訓(xùn)驗(yàn)證操作人員應(yīng)在驗(yàn)證實(shí)施前應(yīng)對(duì)其批準(zhǔn)的驗(yàn)證方案進(jìn)行培訓(xùn)，確保驗(yàn)證人員能依照驗(yàn)證方案正確實(shí)施。培訓(xùn)時(shí)間培訓(xùn)人參加培訓(xùn)人員溯源資料確認(rèn)人/日期復(fù)核人/日期9、驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法9.1試驗(yàn)菌株表面微生物擦拭取樣方法及檢驗(yàn)方法驗(yàn)證所用的菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉。試驗(yàn)菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。試驗(yàn)菌懸液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824h；接種白

5、色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基中，于2025培養(yǎng)4872h,上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數(shù)50100cfu的菌懸液；接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基上，2025培養(yǎng)57d,加入35mL0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后用管口帶有無(wú)菌棉花的無(wú)菌毛細(xì)吸管吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數(shù)（孢子數(shù)）50100cfu的菌（孢子）懸液。上述菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)之內(nèi)使用。擦拭取樣法的驗(yàn)證供試組制備取50mmX50mm不銹鋼材質(zhì)的無(wú)菌擦片，用已校驗(yàn)的1mL移液管吸取檢定菌懸液1mL,均勻涂布于無(wú)菌擦片上，

6、并于層流臺(tái)下吹干，取無(wú)菌棉簽1支，用無(wú)菌的0.9%氯化鈉溶液浸濕，并將其靠在錐形瓶口上擠壓至無(wú)多余的浸潤(rùn)劑滴落。握住棉簽柄，在取樣點(diǎn)處選擇約為25cm2以30角與取樣表面接觸，縱向緩慢并充分擦拭，反轉(zhuǎn)棉簽，同法橫向擦拭（見(jiàn)圖1）,然后將棉簽端用無(wú)菌剪刀剪斷置于20mL的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，充分振搖5min,做好標(biāo)識(shí)，作為供試品溶液。每種菌平行制備兩個(gè)染菌不銹鋼載片。9.3.1.2取全部供試品溶液，經(jīng)薄膜法過(guò)濾后，用pH=7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基平皿上，分別于3035培養(yǎng)72h、2025培養(yǎng)120

7、h,記錄各平皿上菌落數(shù)。圖1擦拭示意圖菌液組制備吸取菌懸液1mL，加入0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液20mL中，全部經(jīng)薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，用PPH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基平皿上，平行制備2個(gè)平皿，分別于3035培養(yǎng)72h、2025培養(yǎng)120h,記錄各平皿上菌落數(shù)。陰性對(duì)照組制備取0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液20mL代替供試品溶液，其它操作同9.3.1.2?；厥章视?jì)算回收率以3次實(shí)驗(yàn)測(cè)試值的平均值計(jì)?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)回收率三70%,RSD三20%。擦拭取樣法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)附件1）。微生物限度檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證供試組制備取50mm

8、X50mm不銹鋼材質(zhì)的無(wú)菌擦片，取無(wú)菌棉簽1支，用無(wú)菌的0.9%氯化鈉溶液浸濕，并將其靠在錐形瓶口上擠壓至無(wú)多余的浸潤(rùn)劑滴落。握住棉簽柄，在取樣點(diǎn)處選擇約為25cm2以30角與取樣表面接觸，縱向緩慢并充分擦拭，反轉(zhuǎn)棉簽，同法橫向擦拭（見(jiàn)圖1）,然后將棉簽端用無(wú)菌剪刀剪斷置于20mL的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，充分振搖5min,做好標(biāo)識(shí)，作為供試品溶液。平行制備兩個(gè)不銹鋼載片。取供試液20mL,菌懸液1mL經(jīng)薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，用pH=7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基平皿上，分別于3035培養(yǎng)72h、2025培養(yǎng)1

9、20h,記錄各平皿上菌落數(shù)。菌液組制備取pH=7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液100mL加入薄膜過(guò)濾器中，過(guò)濾。取緩沖液20mL,菌懸液1mL經(jīng)薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，用pH=7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基平皿上，平行制備2個(gè)平皿，分別于3035培養(yǎng)72h、2025培養(yǎng)120h,記錄各平皿上菌落數(shù)。陰性對(duì)照組制備取0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液20mL，經(jīng)薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基平皿上，分別于3035培養(yǎng)72h、2025培養(yǎng)120h,記錄各平皿上菌落數(shù)?；厥章视?jì)算回

10、收率以3次實(shí)驗(yàn)測(cè)試值的平均值計(jì)?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)回收率應(yīng)三70%,RSD三20%。微生物限度檢驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)附件2）管理確認(rèn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格按照本方案執(zhí)行,出現(xiàn)個(gè)別項(xiàng)目不符合標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果時(shí),應(yīng)按公司內(nèi)部的偏差管理規(guī)程處理,有異常事項(xiàng)未解決時(shí),不得進(jìn)行下一步的工作。并且所有偏差、異常情況處理過(guò)程均應(yīng)記錄備案。管理若確認(rèn)方案需要變更,須按方案制定時(shí)的審批程序進(jìn)行批準(zhǔn)；若系統(tǒng)發(fā)生重大變更,應(yīng)重新制定確認(rèn)方案。并按照公司內(nèi)部的變更控制管理規(guī)程處理并填寫(xiě)相應(yīng)的記錄。再驗(yàn)證若設(shè)備清潔方法發(fā)生改變時(shí)，需重新驗(yàn)證。13附件清單附件1擦拭取樣法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果附件2微生物限度檢驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果附件1擦拭取樣法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)細(xì)菌酵母菌霉菌驗(yàn)證次數(shù)實(shí)驗(yàn)組大腸埃希菌（10-7）金黃色葡萄球菌（10-6）枯草芽孢桿菌（10-5）白色念珠菌（10-5）黑曲霉（10-7）1平皿1212121212供試品組菌液組陰性對(duì)照回收率（%）2平皿1212121212供試品組菌液組陰性對(duì)照回收率（%）3平皿1212121212供試品組菌液組陰性對(duì)照回收率（%）回收率平均值（%）RSD(%)試驗(yàn)人/日期復(fù)核人/日期附件2微生物限度檢驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)細(xì)菌酵母菌霉菌驗(yàn)證次數(shù)實(shí)驗(yàn)組大腸埃希