蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)資料

1、文檔編碼 : CU4Q7F1G8P4 HF7R6A2V8Z1 ZF7P3X8L8T2精品文檔 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 一,目的和要求 1,加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)固因素的熟識(shí) 2,把握幾種沉淀蛋白質(zhì)的方法 3,明白蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系 二,沉淀反應(yīng) （一）原理 在水溶液中, 蛋白質(zhì)分子的表面上由于有水化層和同性電荷的作用, 所以成為穩(wěn) 定的膠體顆粒；但這種穩(wěn)固的狀態(tài)是有條件的；在某些理化因素的作用下,蛋白質(zhì)分 子表面帶電性質(zhì)發(fā)生變化,脫水甚至變性,就會(huì)以固態(tài)形式從溶液中析出,這個(gè)過程 就稱為蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)；蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為以下兩種類型： 1,可逆沉淀反應(yīng) 沉淀反應(yīng)發(fā)生后, 蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)

2、并沒有發(fā)生大的或者顯著變化； 在沉淀因 素去除后,又可復(fù)原其親水性,這種沉淀反應(yīng)就是可逆沉淀反應(yīng),也叫做不變性沉淀 反應(yīng)； 屬于這類沉淀反應(yīng)的有鹽析作用, 等電點(diǎn)沉淀以及在低溫下短時(shí)間的有機(jī)溶劑 沉淀法等； 2,不行逆沉淀反應(yīng) 蛋白質(zhì)在沉淀的同時(shí),其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生大的轉(zhuǎn)變,很多副鍵發(fā)生斷裂,即使除去 沉淀因素,蛋白質(zhì)也不會(huì)復(fù)原其親水性,并丟失生物活性,這種沉淀反應(yīng)就是不行逆 沉淀反應(yīng)；重金屬鹽,生物堿試劑,強(qiáng)酸,強(qiáng)堿,加熱,猛烈震蕩,有機(jī)溶劑等都能 使蛋白質(zhì)發(fā)生不行逆沉淀反應(yīng)； （二）鹽析 1,材料與試劑 （ 1）10%的卵清蛋白溶液（要求新奇配制） ,濃蛋白溶液（2）飽和硫酸銨溶液 （3） 固

3、體硫酸銨 （4）濾紙,玻棒 2,操作方法 （ 1）取試管一支,加入濃蛋白溶液 2ml,再加等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后 靜置 10 分鐘將顯現(xiàn)沉淀；此沉淀物為球蛋白； （ 2）取上清液于另一支試管； 精品文檔 第 1 頁,共 3 頁精品文檔 （ 3）向上清液液中加入硫酸銨粉末,邊加邊用玻棒攪拌,直至粉末不再溶解為 止；靜置數(shù)分鐘后,沉淀析出的是清蛋白； （ 4）向兩支試管中分別加水,觀看其沉淀是否溶解； （三）重金屬鹽沉淀 重金屬離子如 Pb 2+, Cu2+, Hg2+, Ag 2+等可與蛋白質(zhì)分子上的羥基結(jié)合生成不 溶性金屬鹽而沉淀： Pr + NH 3 OH -Pr NH 2Ag + P

4、r NH 2 COO-COO -COOAg 重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)的反應(yīng)通常很完全,特殊是在堿金屬鹽類存在時(shí)；因此, 生化分析中, 常用重金屬鹽除去體液中的蛋白質(zhì)； 臨床上用蛋白質(zhì)解除重金屬鹽引起 的食物中毒； 1,材料與試劑 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液（ 2） 氫氧化鈉溶液 （ 3） 3% 硝酸銀溶液 （4）0.1% 硫酸銅溶液 （ 6）試管 3 支 2,操作方法 （ 1）取試管 2 支,分別編號(hào)后各加入 1ml 10% 的卵清蛋白溶液； （ 2）各管再加入一滴 氫氧化鈉溶液； （ 3）向 1 管加 3% 硝酸銀溶液 34 滴；向 2 管加 0.1% 硫酸銅溶液 34 滴；混 勻后觀看沉

5、淀的生成； （四）生物堿試劑沉淀反應(yīng) 生物堿試劑能與蛋白質(zhì)分子中的氨基結(jié)合生成不溶性沉淀,反應(yīng)如下： Pr + NH 3 CCl 3COOH Pr + NH 3 .OOCCCl 3 COO-COOH 1,材料與試劑 精品文檔 第 2 頁,共 3 頁精品文檔 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液 2,操作方法 （ 2） 5% 三氯乙酸溶液 取試管一支, 加 10% 的卵清蛋白溶液 20 滴后再加入 5% 三氯乙酸溶液 10 滴,混 勻后觀看沉淀的顯現(xiàn)； （五）有機(jī)溶劑沉淀反應(yīng) 1,材料與試劑 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液 2,操作方法 （ 2） 95% 乙醇溶液 取試管 1 支,加 10% 的卵清蛋白溶液 10 滴后,再加入 95% 乙醇溶液 20 滴,邊