海南膽木藥材指紋圖譜研究

1、海南膽木藥材指紋圖譜研究【摘要】目的采用高效液相色譜法建立海南膽木藥材的指紋圖譜,為海南膽木藥材的消費(fèi)提供質(zhì)量控制方法。方法采用高效液相色譜法,色譜柱為DiansilT182504.6，5；檢測波長為227n；流動(dòng)相為甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脫。結(jié)果海南膽木藥材指紋圖譜中，共有峰相對保存時(shí)間與相對峰面積的精細(xì)度、重復(fù)性和穩(wěn)定性的RSD均小于3%，符合有關(guān)規(guī)定。結(jié)論所建立指紋圖譜可用于海南膽木藥材的質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】海南膽木；高效液相色譜法；指紋圖譜；質(zhì)量控制Abstrat：bjetiveTestablishtheFingerprinthratgraphyfHainanNaule

2、affiinalisbyHPLandprvidetheethdfrqualityntrlfHainanNauleaffiinalis.ethdsAnHPLethdiththeDiansilT18lun(2504.6，5)andaixturefethanl-0.10%phsphriaidslutin(dualgradientelutin)asthebilephaseasused.Thedetetinavelengthassetat227n.ResultsHPLfingerprinthratgraphyf10bathesfsaplesasestablished.Theresultsshedthat

3、thisethdhadagdrepeatabilityandthe8npeakshadanexlusiveprperties.nlusinThefingerprintestablishedanbeusedfrqualityntrlfHainanNauleaeffiinalis.Keyrds：HainanNauleaeffiinalis;HPL;Fingerprint;Qualityntrl膽木為茜草科烏檀屬喬木烏檀NaudeaftinalisPierrexPitard枯燥的莖和根,具有清熱解毒，消腫止痛等成效。在我國已用膽木制成注射液及膽木浸膏片，治療鉤端螺旋體和上呼吸道感染1。文獻(xiàn)報(bào)道2，3

4、海南膽木中有效成分為生物堿類,其中異長春花苷內(nèi)酰胺(isvinsidelatne)含量較高。為確保海南膽木藥材消費(fèi)的質(zhì)量可控，筆者采用高效液相色譜法，建立了海南膽木藥材生物堿類成分的檢測方法，通過對海南五指山地區(qū)不同栽培地區(qū)海南膽木藥材的研究，建立其穩(wěn)定可行的指紋圖譜。1儀器與試藥aters515高效液相色譜儀；國家藥典委員會(huì)2022年A版“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)。色譜純甲醇，試驗(yàn)用水為純潔水，其他試劑均為分析純。異長春花苷內(nèi)酰胺對照品中國藥品生物制品檢定所，110831-202202；膽木藥材共10批，采自海南五指山地區(qū)栽培地不同區(qū)域，經(jīng)中國醫(yī)科院興隆分所陳偉平教授鑒定。2方法與結(jié)果

5、2.1色譜條件色譜柱為DiansilT182504.6，5；檢測波長為227n；柱溫為30；流動(dòng)相為甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脫，洗脫時(shí)間為70in，流速為1.0l/in；進(jìn)樣量為20l，所有組分在70in內(nèi)出峰完畢。梯度洗脫條件見表1。2.2溶液制備2.2.1對照品溶液制備精細(xì)稱取異長春花苷內(nèi)酰胺對照品適量，置于10l容量瓶中，加甲醇溶液適量溶解，并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度大約為160g/l的對照品溶液。表1梯度洗脫條件略2.2.2供試品溶液制備取膽木藥材0.5g，精細(xì)稱定，置100l具塞錐形瓶中，參加70%乙醇50l，稱重，于沸水浴中加熱回流40in，放冷，稱重，用70%乙醇

6、補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液適量，以0.45微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。2.3方法學(xué)考察2.3.1精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄其圖譜。計(jì)算各色譜峰的相對保存時(shí)間和相對峰面積比值的RSD。結(jié)果說明，RSD分別為0.09%0.21%和0.19%2.55%,均小于3.0%，符合指紋圖譜的要求。2.3.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別于制備后0,2,4,8,16,24h進(jìn)樣，記錄其圖譜。計(jì)算各色譜峰的相對保存時(shí)間和相對峰面積比值的RSD。結(jié)果說明，RSD分別為0.06%0.23%和0.212.68%，均小于3.0%,符合指紋圖譜的要求。2.3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批次的膽木6

7、份,按供試品溶液制備方法制備供試品溶液,分別進(jìn)樣,記錄其圖譜。計(jì)算各色譜峰的相對保存時(shí)間和相對峰面積比值的RSD。結(jié)果說明,RSD分別為0.08%0.22%和0.21%2.94%,均小于3.0%,符合指紋圖譜的要求。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4指紋圖譜的建立、分析與評(píng)價(jià)2.4.1指紋圖譜的建立按照供試品溶液制備方法將10批藥材制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣檢測，測定所有供試品溶液的HPL色譜圖。根據(jù)10批次供試品測定結(jié)果所給出的峰數(shù)、峰值(積分值)和相對保存時(shí)間等相關(guān)參數(shù),進(jìn)展分析、比擬，制定優(yōu)化的指紋圖譜。見圖1。2.4.2共有峰確定根據(jù)10批膽木供試品的檢測結(jié)果，比擬色譜圖。選擇膽木供試液圖譜

8、中峰面積較大、峰形較好的色譜峰作為共有峰，共8個(gè)(見圖2)，其中7號(hào)峰為異長春花苷內(nèi)酰胺為膽木藥材主要成分，其峰面積約占總峰面積70%，峰形穩(wěn)定，可將該峰作為參照峰。2.4.3共有峰相關(guān)信息根據(jù)10批膽木樣品的色譜圖結(jié)果，以7號(hào)峰作為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保存時(shí)間，結(jié)果RSD2.0%見表2。8個(gè)共有峰其峰面積總和占總峰面積平均百分比為93%。以參照峰峰面積為基準(zhǔn)，計(jì)算各共有峰峰面積與參照峰峰面積的比值，共有峰面積比值根本固定。結(jié)果見表3。均符合指紋圖譜的要求。表2共有峰相對保存時(shí)間略表3共有峰的峰面積與參照峰面積比值略2.4.4指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)記錄了10批海南五指山地區(qū)不同區(qū)域膽木藥

9、材的指紋圖譜(見圖3)。將測試數(shù)據(jù)導(dǎo)入國家藥典委員會(huì)2022年A版“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)展數(shù)據(jù)處理。得到膽木藥材指紋峰共有形式R(見圖3)；與共有形式比擬，10批海南五指山地區(qū)不同區(qū)域膽木藥材的指紋圖譜相似度分別為0.994，0.995，0.996，0.995，0.994，0.982，0.990，0.989，0.996，0.998。3討論3.1提取溶劑的選擇取同樣量的海南膽木藥材分別采用純乙醇，70%乙醇，50%乙醇，70%甲醇，50%甲醇進(jìn)展加熱回流提取，并將提取液進(jìn)展HPL分析。結(jié)果說明，以70%乙醇提取液的色譜峰強(qiáng)度最大，應(yīng)選擇70%乙醇為提取溶液。3.2檢測波長確實(shí)定在對供

10、試品溶液進(jìn)展HPL分析的同時(shí)，對紫外檢測波長進(jìn)展了挑選，發(fā)如今227n處膽木藥材各色譜峰別離度較好，且主要活性成分異長春花苷內(nèi)酰胺有較強(qiáng)的吸收，應(yīng)選擇227n作為指紋圖譜的檢測波長。3.3梯度洗脫條件確實(shí)定在對供試品溶液進(jìn)展HPL分析時(shí)，分別以甲醇-0.1%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，同時(shí)對這兩種流動(dòng)相進(jìn)展二元等度和梯度洗脫兩種方式的挑選，結(jié)果按表1的條件可得到別離度較好的膽木藥材圖譜。3.4相似度分析結(jié)果說明，海南五指山地區(qū)不同栽培區(qū)域的海南膽木藥材的相似度很好，品質(zhì)根本一致。本實(shí)驗(yàn)對海南膽木藥材指紋圖譜的構(gòu)建進(jìn)展的初步探究，可以為海南膽木藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制提供檢測方法?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1符建，鄺少鐵，曾