藥物分析第五章藥物的鑒別

1、第五章 藥物的鑒別藥品檢驗(yàn)工作的主要內(nèi)容鑒別：判定真?zhèn)螜z查：安全性、有效性、均一性含量測(cè)定：有效成分的定量第五章 藥品的鑒別試驗(yàn)5.1 鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵5.3 藥物鑒別的方法5.2 藥物鑒別的項(xiàng)目5.4 鑒別試驗(yàn)的條件5.5 鑒別反應(yīng)的靈敏度基本要求5.1 鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵目的：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)特征，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法，判斷（鑒別）藥物真?zhèn)?。適用性：僅用于證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其標(biāo)示的藥物，并非對(duì)未知物化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證鑒定。要求：方法專(zhuān)屬，每個(gè)品種一般2-3項(xiàng)不同類(lèi)型的鑒別試驗(yàn)。Principles of Identification Test5.1 鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵分類(lèi)Prin

2、ciples of Identification Test鑒別試驗(yàn)一般鑒別試驗(yàn)有機(jī)藥物無(wú)機(jī)藥物專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)5.2 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目一、性狀和物理常數(shù)二、鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)一般鑒別：區(qū)分藥物的類(lèi)別專(zhuān)屬鑒別：區(qū)分個(gè)別的藥物單體（同類(lèi)或相同母核）的鑒別原料藥制劑鑒別一、性狀和物理常數(shù)Characters/DescriptionPhysical Constants（一）性狀（definition）聚集狀態(tài)、晶形 外觀色澤臭、味性狀（呈現(xiàn)狀態(tài)）：反映了藥物特有的物理性質(zhì)。一、性狀和物理常數(shù)外觀：指藥物的聚集狀態(tài)、 晶型、色澤及臭、味等。溶解度：不同溶劑中的溶解特性 一定程度上反映了藥物的純度。物理常數(shù)：內(nèi)

3、在物理特征 即可鑒別，也可反映純凈的程度。外觀溶解度物理常數(shù)物理常數(shù): 相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、比旋度、吸收系數(shù) 、 折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羥值 第一法：測(cè)定易碎的固體藥品 熔點(diǎn) 第二法：測(cè)定不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等） 第三法：測(cè)定凡士林或其他類(lèi)似的物質(zhì)傳溫液加熱法電熱塊空氣加熱法 比旋度：指在一定波長(zhǎng)下，偏振光透過(guò)1 dm且每1ml中含有 旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。 旋光度測(cè)定在鑒別、檢查、含量測(cè)定中都有應(yīng)用。固體供試品液體供試品例如：維生素C的比旋度測(cè)定： 取本品，精密稱定，加水溶解，并定量稀釋成C為0.10g/ml的溶液，依法測(cè)定旋光度為+2.05至2.15，

4、求 tD =？吸收系數(shù) 吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度 摩爾吸收系數(shù) 溶液濃度 液層厚度 百分吸收系數(shù) 溶液濃度 液層厚度 是指依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化特性，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)類(lèi)鑒別藥物的真?zhèn)巍Ｌ攸c(diǎn)：確定（區(qū)分）類(lèi)別，不能夠確定個(gè)別品種。常見(jiàn)的一般鑒別實(shí)驗(yàn)：丙二酰脲類(lèi)、托烷生物堿類(lèi)、芳香第一胺類(lèi)、有機(jī)氟類(lèi)、無(wú)機(jī)金屬類(lèi)（Na, K, Li, Ca, Ba, Fe,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等）、有機(jī)酸鹽類(lèi)（水楊酸鹽）、無(wú)機(jī)酸鹽類(lèi)。 二、一般鑒別試驗(yàn) （general identification test）二、一般鑒別試驗(yàn)1. 有機(jī)酸鹽(1) 水楊酸水楊酸 + FeCl3中性條件弱酸

5、性條件紅色配位化合物紫色配位化合物一般鑒別試驗(yàn)水楊酸鹽（1）取供試品稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色楊酸沉淀，分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。 2.有機(jī)氟化物有機(jī)氟氧瓶燃燒無(wú)機(jī)氟離子pH4.3 茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰藍(lán)紫色絡(luò)合物陰陽(yáng)離子的特殊反應(yīng)酸根名稱 檢驗(yàn)試劑 現(xiàn) 象 反應(yīng)方程式 SO42- BaCl2溶液 白色加酸不溶 SO42-+Ba2+BaSO4 CO32- 稀酸，Ca(OH)2 氣體使石灰水變混 CO32-+2H+CO2+H2OCa2+CO32-CaCO3 HCO3- 稀酸，Ca(OH)2氣體使石灰水變混 Cl- AgNO3試液 白溶于氨水不溶稀硝酸

6、 Cl-+ Ag+AgCl Br- AgNO3試液 黃微溶氨水不溶稀硝酸 Br-+ Ag+AgBr 陰陽(yáng)離子的特殊反應(yīng)離子鑒別方法鑒別原理現(xiàn) 象Na+焰色反應(yīng)光譜主要譜線589nm可見(jiàn)光區(qū)鮮黃色K+焰色反應(yīng)光譜主要譜線766nm，769nm紫色Ca2+焰色反應(yīng)光譜主要譜線622nm可見(jiàn)光區(qū)磚紅色Ba2+焰色反應(yīng)光譜主要譜線553nm，500nm黃綠色Li+焰色反應(yīng)光譜主要譜線670nm胭脂紅色NH4+NaOH 石蕊試液NH4+OH-NH3+H2O有刺鼻氣味，濕石蕊試紙變蘭 通過(guò)一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類(lèi)藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物。例如: 鈉鹽的焰色試驗(yàn),不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它

7、某一種鈉鹽藥物。 必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,再進(jìn)行專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。一般鑒別試驗(yàn)三、專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn) (specific identification test)依據(jù)：特定藥物分子中的特殊性質(zhì)、特征基團(tuán)或官能團(tuán)的專(zhuān)屬反應(yīng)或測(cè)定進(jìn)行鑒別藥物的真?zhèn)巍?.3 藥物鑒別的方法鑒別方法化學(xué)鑒別法顏色變化鑒別法沉淀生成鑒別法氣體生成鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)光譜鑒別法紫外可見(jiàn)光譜鑒別法紅外光譜鑒別法色譜鑒別法薄層色譜法高效液相色譜法氣相色譜法生物學(xué)法5.3 藥物鑒別的方法藥物的鑒別方法要求專(zhuān)屬性強(qiáng)，耐用性好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，快速。常用方法：化學(xué)法、光譜法、色譜法和生物學(xué)法。中藥材鑒別方

8、法：還有顯微鑒別法和特征圖譜或指紋圖譜鑒別法。制劑的鑒別：盡可能與原材料相同：必須：排除輔料干擾；多組份或微量成分，需用更靈敏、專(zhuān)屬的方法。特殊性質(zhì)：采用特定方法，如手性、晶型等。 三氯化鐵呈色反應(yīng)(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 異羥肟酸鐵反應(yīng)(Ar-COOH; Ar-COOR) 1. 顏色變化鑒別法 茚三酮呈色反應(yīng)(脂肪氨基，氨基酸） 重氮化-偶合呈色反應(yīng)(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。一、化學(xué)鑒別法一、化學(xué)鑒別法 2. 沉淀生成鑒別法 與硫氰化鉻銨的沉淀反應(yīng) 其它沉淀反應(yīng)(如

9、生物堿沉淀劑） 一、化學(xué)鑒別法 藥物本身在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光 藥物溶液加硫酸后在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光 3. 熒光反應(yīng)鑒別法 藥物與溴反應(yīng)后，在可見(jiàn)光下發(fā)出熒光 藥物與間苯二酚溴反應(yīng)后，發(fā)射出熒光 藥物其它反應(yīng)后，發(fā)射出熒光 制備衍生物： 藥物試劑 具有熒光的衍生物一、化學(xué)鑒別法 胺類(lèi)、酰脲類(lèi)、酰胺類(lèi)藥物經(jīng)強(qiáng)堿處理 生成氨氣 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 含硫藥物經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，生成硫 4. 氣體生成反應(yīng)鑒別法 化氫氣體(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有機(jī)藥物，加熱。生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺類(lèi)藥物酸水解后，加 乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯一、化學(xué)鑒別法制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)法 藥物試劑

10、 新化合物有一定mp; 藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費(fèi)時(shí) 間，應(yīng)用較少。二、光譜鑒別法 測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng) 規(guī)定濃度的供試液在最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定吸收度1.紫外光譜鑒別法 規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法 規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法 經(jīng)化學(xué)處理后, 測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物吸收光譜特性 氟胞嘧啶紫外光譜鑒別 本品的8g/mL鹽酸溶液91000.1mol/L)，最大吸收波長(zhǎng)286nm，吸光度約為0.57，最小吸收波長(zhǎng)244nm。 二、光譜鑒別法 壓片法2. 紅外光譜鑒別法 糊法 膜法 溶液法氯羥去甲安定紅外光譜鑒別ChP和BP均采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜法例中國(guó)藥典對(duì)某藥物的鑒別：本品的紅外吸收?qǐng)D譜

11、應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集XX圖）一致。USP采用對(duì)照品法例阿莫西林的鑒別試驗(yàn)：取本品，經(jīng)干燥后用溴化鉀壓片法測(cè)定，所得的圖譜與USP阿莫西林參考標(biāo)準(zhǔn)品圖譜一致。紅外光譜鑒別法 JP采用規(guī)定條件下測(cè)定一定波數(shù)處的特征吸收峰 例氯羥去甲安定的測(cè)定：取本品，干 燥后用KBr壓片法測(cè)定，其紅外吸收光譜圖中3440cm-1,3220cm-1,1695cm-1,1614cm-1,1324cm-1,1132cm-1,828cm-1處有吸收。對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例1：熊膽、牛膽、豬膽的紅外圖譜比較在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有明顯的差別光譜法紅外分光光度法熊膽牛膽豬膽（1）輔料無(wú)干擾，與原

12、料藥標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照（2）輔料干擾不能完全消除，用指紋區(qū)特征峰鑒別二、光譜鑒別法（三）近紅外光譜法（四）原子吸收法（五）核磁共振法（六）質(zhì)譜鑒別法（七）X射線粉末衍射法三、色譜鑒別方法（ HPLC GC TLC) 適用于復(fù)雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時(shí)進(jìn)行的特點(diǎn)。采用與對(duì)照品（或經(jīng)確證的已知藥品）在相同的色譜條件下進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行比較其保留行為。三、色譜鑒別方法1、相同濃度的供試品與對(duì)照品比較，主斑點(diǎn)，顏色與位置應(yīng)一致。2、供試品與對(duì)照品等體積混合，主斑點(diǎn)，位置應(yīng)一致。3、結(jié)構(gòu)相似的其他藥物與供試品溶液的主斑點(diǎn)比較：應(yīng)區(qū)分4、3項(xiàng)下兩種溶液等體積混合，應(yīng)得到清晰分離的斑點(diǎn)：

13、應(yīng)區(qū)分sr混sRsRTLC(二）高效液相色譜法(HPLC) （含量測(cè)定）供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致。內(nèi)標(biāo)（三）氣相色譜法 (GC) 同HPLC要求四、顯微鑒別法靈芝孢子的電鏡掃描照片 靈芝破壁孢子的電鏡掃描照片 Electron scanning microscope 澤瀉內(nèi)皮層細(xì)胞 牡丹皮草酸鈣簇晶 茯苓菌絲 山藥淀粉粒 山茱萸果皮表皮細(xì)胞 地黃薄壁組織六味地黃丸中藥材的顯微特征圖 藥物鑒別方法新動(dòng)向儀器用于藥物鑒別的數(shù)量大大增加，尤其是紅外和HPLC法。英美采用儀器鑒別法和化學(xué)鑒別法的比例為2:1。制劑廣泛采用IR法鑒別，采用提取分離后再壓片繪譜。鑒別條目簡(jiǎn)練，選擇專(zhuān)屬的方法鑒別，平

14、均每個(gè)品種收2條左右。 （一）溶液的濃度 （二）溶液的溫度 （三）溶液的酸堿度 （四）試驗(yàn)時(shí)間 （五）干擾成分的存在5.4 鑒別試驗(yàn)條件（一）溶液的濃度 溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié)果的判斷。 （如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；UV法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的溫度 溫度過(guò)高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不到結(jié)果。5.4 鑒別試驗(yàn)條件5.4 鑒別試驗(yàn)條件 （三）溶液的酸堿度 試反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定和以觀察狀態(tài)。 （四）試驗(yàn)時(shí)間 有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)較慢，需要一定的反應(yīng)時(shí)間和條件。 （五）干擾成分的存在 藥物制劑的鑒別，其它成分則會(huì)干擾檢查結(jié)果的現(xiàn)象觀察。 1、反應(yīng)靈敏度和空白試驗(yàn)5.5 鑒別試驗(yàn)的靈敏度（sensitivity）最低檢出量（minimum detectable quantity）最低檢出濃度（minimum det