植物生理生化實(shí)驗(yàn)

1、-. z.植物生理生化實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)習(xí)題一、名詞解釋?zhuān)簶?biāo)準(zhǔn)曲線:用標(biāo)準(zhǔn)溶液制成的曲線。先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在溶液最大吸收波長(zhǎng)下，逐一測(cè)定吸光度，然后用坐標(biāo)紙以溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖， 假設(shè)被測(cè)物質(zhì)對(duì)光的吸收符合光的吸收定律， 必然得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線， 即標(biāo)準(zhǔn)曲線。斐林Folin酚試劑法:又稱lowry法，它結(jié)合了雙縮脲試劑和酚試劑與蛋白質(zhì)的反響，是雙縮脲方法的進(jìn)一步開(kāi)展，可利用其在650nm波長(zhǎng)下的特定吸收進(jìn)展比色測(cè)定。茚三酮顯色法:游離氨基酸與茚三酮共熱時(shí)，能定量生成紫色的二酮茚-二酮茚胺。其吸收峰在570nm，而且在一不定期*圍內(nèi)吸光度與游離氨基酸濃度成正比，因此可

2、用分光光度法測(cè)定其含量。茚三酮溶液與氨基酸共熱，生成氨。氨、茚三酮 與 復(fù)原性茚三酮 發(fā)生反響，生成紫色化合物。該化合物顏色的深淺與氨基酸的含量成正比，通過(guò)測(cè)定570nm 處的光密度，可測(cè)定氨基酸的含量。氮素代謝:氮素及含氮的活體物質(zhì)的同化、異化、排泄，總稱為氮素代謝。淀粉酶：水解淀粉和糖原的酶類(lèi)總稱真空滲入: 指將葉片打孔放入注射器中，加水浸沒(méi)，排出空氣后用手指堵住前端小孔，同時(shí) 把 活塞向外抽拉，即可造成減壓而排出組織中的空氣，輕放活塞，水液即進(jìn)入組織的方法。離心技術(shù): 根據(jù)物質(zhì)顆粒在一個(gè)實(shí)用的離心場(chǎng)中的行為而開(kāi)展起來(lái)的是1.別離細(xì)胞器和生物大分子物質(zhì)的必備的手段之一，也是2.測(cè)定*些純品

3、物質(zhì)的局部性質(zhì)的一種方法。差速離心法基于待測(cè)物質(zhì)顆粒大小、密度、沉降速度 的不同 而得到別離。電泳:各種生物大分子在一定pH條件下，可以解離成帶電荷的顆粒,這種帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而到達(dá)別離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。同工酶: 指催化同一種化學(xué)反響，但其酶本身分子構(gòu)造和帶電性質(zhì)卻有所不同的一組酶。遷移率:指帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度。溶液中帶電粒子在電場(chǎng)中向著與它電性相反的電極移動(dòng)，它的移動(dòng)速度是電場(chǎng)和粒子的有效遷移率(m)的乘積，即：V=mE。聚丙烯酰胺凝膠: 一種人工合成凝膠。以丙烯酰胺為單位， 由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)成的，經(jīng)枯燥粉

4、碎或加工成形制成粒狀，控制交聯(lián)劑的用量可制成各種型號(hào)的凝膠濃縮膠：5%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺凝膠濃度較低，孔徑較大，有堆積作用，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過(guò)凝膠的遷移作用，樣品被濃縮至一個(gè)狹窄的區(qū)帶，使其在進(jìn)入別離膠之前在同一水平線上別離膠：10%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺，凝膠濃度較高，孔徑較小，施加電壓的時(shí)候，小的蛋白可以穿過(guò)孔跑到下面去，分子量大的蛋白就可能被攔住，就跑的慢，通過(guò)這種方式以分子量大小的區(qū)別來(lái)別離蛋白質(zhì)。酶活力 ：又稱酶活性，指酶催化一定化學(xué)反響的能力。比活力：每毫克蛋白質(zhì)所具有的酶活力單位數(shù) 酶活力單位/mg蛋白質(zhì)比活力的大小可以用來(lái)比擬酶制劑中單位質(zhì)量蛋白質(zhì)的催化能力

5、，衡量酶的純度種子生活力: 指種子潛在的發(fā)芽能力或種胚具有的生命力?？鼓嫘? 植物對(duì)逆境的抵抗和忍耐能力，簡(jiǎn)稱為抗性。光合速率: 單位時(shí)間、單位葉面積吸收CO2或放出O2的量。呼吸速率: 單位時(shí)間鮮重或干重的植物組織或原生質(zhì)釋放的CO2或吸收O2的量無(wú)土培養(yǎng):不用土壤而用加有養(yǎng)分溶液的物料作為植物生長(zhǎng)介質(zhì)的栽培方法。超氧化物歧化酶SOD)：普遍存在于動(dòng)、植物體內(nèi)，是一種去除超氧陰離子自由基的酶。硝酸復(fù)原復(fù)原酶:植物氮素同化的關(guān)鍵酶,催化植物體內(nèi)硝酸鹽復(fù)原成亞硝酸鹽的反響。誘導(dǎo)酶：又稱適應(yīng)酶，指植物體內(nèi)本來(lái)不含有，但在特定外來(lái)物質(zhì)的誘導(dǎo)下誘導(dǎo)生成的酶。E.g.硝酸復(fù)原酶可為NO3-誘導(dǎo)生成。二、

6、填空：在測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)含量時(shí)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線是以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，以 吸光值為縱坐標(biāo)。常用的測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)含量的方法有：Folin-酚試劑法(Lowry 法)、考馬斯亮藍(lán)法和紫外吸收法用滴定法測(cè)Vc含量時(shí)，假設(shè)樣品本身帶有顏色，則需先將樣品用_草酸_ 處理。用茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸含量時(shí)，茚三酮溶液與氨基酸共熱生成氨，氨_與茚三酮和復(fù)原性茚三酮反響，生成藍(lán)紫色的二酮茚胺。該化合物顏色的深淺與氨基酸的含量成 正比，可通過(guò)測(cè)定570 nm處的光密度，求出氨基酸的含量。在測(cè)定淀粉酶的活性時(shí)：淀粉酶不耐酸，淀粉酶不耐熱。在測(cè)定淀粉酶活性時(shí)，3，5二硝基水楊酸試劑DNS的作用是1

7、、與復(fù)原糖顯色生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸 2、終止酶活性。聚丙烯酰胺凝膠電泳別離過(guò)氧化物同工酶實(shí)驗(yàn)中，電泳存在三大效應(yīng)，分別是 濃縮效應(yīng)、 分子篩效應(yīng)和 電荷效應(yīng)。測(cè)定硝酸復(fù)原酶活性的方法有 活體法和 離體法。用活體法測(cè)定硝酸復(fù)原酶的材料，取樣前葉子需進(jìn)展一段時(shí)間的光合作用，以積累光合產(chǎn)物，產(chǎn)生更多NADH ，加速硝酸鹽的復(fù)原。葉綠素吸收光譜有 紅光 和 藍(lán)紫光 區(qū)兩個(gè)最強(qiáng)吸收區(qū)。類(lèi)胡蘿卜素吸收光譜最強(qiáng)吸收區(qū)在藍(lán)紫光，它不僅可以吸收傳遞光能，還具有 保護(hù)葉綠素的作用。葉綠素溶液在透射光下呈綠色，在反射光下呈暗紅色。缺 N 和缺 Fe 都能引起缺綠病， 二者區(qū)別在于缺氮 老葉 病。缺乏

8、必需元素Mg、 N 、Ka等，均可引起植物產(chǎn)生缺綠病。缺鈣(Ca)癥首先會(huì)表現(xiàn)于植物的嫰 葉上。植物光合速率測(cè)定方法有 紅外線CO2氣體分析法和 改進(jìn)半葉法等。植物呼吸速率常用的測(cè)定方法有_紅外線法 CO2氣體分析法和改進(jìn)半葉法在研究植物礦質(zhì)元素中,常用的植物溶液培養(yǎng)法有 水溶液培養(yǎng)法、 砂基培養(yǎng)法和 氣栽法 。常用水溶液培養(yǎng)法確定植物生長(zhǎng)的必需元素。水培時(shí)要選用黑色容器裝營(yíng)養(yǎng)液，這是為了防止藻類(lèi)滋生。在植物生理研究中常用的完整植物培養(yǎng)方法有 _、 _ 、_和_。三、選擇題：1、*蛋白質(zhì)pI為7.5，在pH6.0 的緩沖液中進(jìn)展自由界面電泳，其泳動(dòng)方向?yàn)?A A、向負(fù)極移動(dòng) B、向正極移動(dòng) C

9、、不運(yùn)動(dòng) D、同時(shí)向正極和負(fù)極移動(dòng)在7.5的時(shí)候，這個(gè)蛋白質(zhì)為電中性，不帶電而6.0的時(shí)候更酸，結(jié)合上的氫就多，于是呈正電性于是就向負(fù)極去了2、進(jìn)展酶活力測(cè)定時(shí)A A、底物濃度必須極大于酶濃度B、酶濃度必須極大于底物濃度，C、酶能提高反響的平衡點(diǎn) D、與底物濃度無(wú)關(guān)3、蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質(zhì)，其吸收頂峰在D波長(zhǎng)處A、260nm B、650nm C、540nm D、280nm4、Folin-酚試劑法(Lowry法)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度時(shí)，用B 波長(zhǎng)比色，測(cè)定光密度值。A、260nm B、650nm C、540nm D、280nm5、不連續(xù)聚丙烯

10、酰胺凝膠電泳比一般電泳的分辨率高，是因?yàn)榫哂幸韵履姆N效應(yīng)？ ABC A、濃縮效應(yīng)B、電荷效應(yīng)C、分子篩效應(yīng)D、粘度效應(yīng)6. 硝酸復(fù)原酶與亞硝酸復(fù)原酶 ( D )A.都是誘導(dǎo)酶 B.硝酸復(fù)原酶不是誘導(dǎo)酶，而亞硝酸復(fù)原酶是 C.都不是誘導(dǎo)酶D.硝酸復(fù)原酶是誘導(dǎo)酶，而亞硝酸復(fù)原酶不是 7、酶的別離提純過(guò)程中，不正確的操作是C 。A、需在低溫下進(jìn)展，一般在05之間B、酶制劑制成干粉后可保存于4冰箱中C、需經(jīng)常使用巰基乙醇以防止酶蛋白二硫鍵發(fā)生復(fù)原D、提純時(shí)間盡量短8、在提取葉綠素時(shí)，研磨葉片時(shí)參加少許CaCO3，其目的是D A.使研磨更充分 B.加速葉綠素溶解 C.使葉綠素a、b別離 D.保護(hù)葉綠素1

11、0、一般而言，正常植物葉片的葉綠素與類(lèi)胡蘿卜素的比值為B A.2:1 B.3:1C.1 :2 D.1:311、葉綠素卟啉環(huán)的中心原子是 C A. Cu B. Fe C. MgD. Mn12、測(cè)定葉綠素總量時(shí)，分光光度計(jì)選用的波長(zhǎng)是 D A.663nm B.645nm C.430nm D.652nm13、在95%提取液中,葉綠素a在紅光區(qū)的最大吸收峰為 ( D )。A、 470 nm B、649 nm C、 656 nm D、665 nm14、植物的幼嫩局部，虧缺以下哪種元素時(shí)，缺素癥首先表現(xiàn)出來(lái)。B A. K B. Ca C. P D. N 15、以下元素中，屬于必需的大量元素有B A、鐵B、

12、氮C、硼D、鋅16、高等植物的老葉由于缺少*一種元素而發(fā)病，下面元素屬于這一類(lèi)的有 A A、氮B、鈣C、鐵17、呼吸作用的底物為( A )。A、有機(jī)物和O2B、CO2和H2O C、有機(jī)物和CO217、光合作用的底物為( B )。A、有機(jī)物和O2B、 CO2和H2OC、有機(jī)物和CO219、小藍(lán)子法測(cè)定呼吸強(qiáng)度生成的白色沉淀是( A ) A、 BaCO3B、Ba(COO)2C、Ba(D、CaCO3Ba(OH)2+ CO2BaCO3+ H2O20、TTC法測(cè)定種子生活力的試驗(yàn)中，活種子的現(xiàn)象為 ( A )。A、種胚全部染成紅色B、種胚全部未染色C、種胚全部染成黑色D、種胚非關(guān)鍵部位染色，而胚根和胚芽

13、的尖端都不染色21、小籃子法測(cè)定呼吸強(qiáng)度中，假設(shè)在滴定時(shí)，外界CO2進(jìn)入呼吸測(cè)定裝置內(nèi)，會(huì)使測(cè)得的結(jié)果(A )。A、偏大B、偏小C、不變D、不一定三、簡(jiǎn)答題1、怎樣提高樣品測(cè)定的準(zhǔn)確性答：正確采集代表性樣品選擇適宜的測(cè)定方法減少測(cè)定誤差正確記錄和處理測(cè)定數(shù)據(jù) 。2、植物材料的取樣有哪些方法？ 答：原始樣品的取樣法：隨機(jī)取樣、對(duì)角線取樣。平均樣品的采樣法：混合取樣法、按比例取樣法。3、簡(jiǎn)述分光光度計(jì)的使用方法。答：檢查721A型分光光度計(jì)的旋鈕和開(kāi)關(guān)，使其回復(fù)零點(diǎn)。按要求接通電源，按下T鍵，翻開(kāi)暗盒蓋和電源開(kāi)關(guān)，指示燈亮。預(yù)熱20分鐘。調(diào)節(jié)波長(zhǎng)旋鈕至所需波長(zhǎng)。選定波長(zhǎng)取比色皿分別盛裝B、S、U液

14、，置入檢測(cè)室比色皿先用蒸餾水洗后，再用比色液潤(rùn)洗才能裝比色液。B液對(duì)準(zhǔn)光路。調(diào)節(jié)面板零位細(xì)調(diào)，使指示為00.0，即透射比T的零點(diǎn)，同時(shí)一號(hào)閃躍。合下檢測(cè)室蓋.調(diào)節(jié)光量粗、細(xì)調(diào)電位器，使指示為100.0，須反復(fù)5、6兩點(diǎn)操作到達(dá)穩(wěn)定。按下A鍵，指示為.000”同時(shí)一閃躍，如果指示讀數(shù)不是比值時(shí)，應(yīng)調(diào)節(jié)消光調(diào)零電位器，使其到達(dá)要求。拉出或推入拉桿，使U、S液分別置于光路讀取A值，然后移動(dòng)拉桿，讀B管A值，如為0，則前述A值有效。在穩(wěn)定時(shí)，重復(fù)讀數(shù)一次，并按下T鍵。翻開(kāi)檢測(cè)室蓋，取出比色皿，傾去比色液于水槽中，用自來(lái)水沖洗干凈，倒置于外表皿鋪有濾紙中。11關(guān)上電源開(kāi)關(guān)，拔出電源插頭，取出比色皿架，檢

15、查檢測(cè)室內(nèi)是否有液體濺出，并擦凈。檢測(cè)室內(nèi)放入硅膠袋，合上蓋，套上儀器罩。預(yù)熱儀器選定波固定靈敏度檔調(diào)節(jié)0點(diǎn)調(diào)節(jié) T=100%測(cè)定關(guān)機(jī)4. 請(qǐng)介紹3種常用的可溶性蛋白質(zhì)的測(cè)定方法。答：.5、簡(jiǎn)述斐林酚試劑法測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)的原理。188頁(yè)在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物，F(xiàn)olin酚試劑中的磷鉬酸鹽磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基復(fù)原，產(chǎn)生深藍(lán)色鉬蘭和鎢蘭的混合物。在一定的條件下，藍(lán)色深度與蛋白的量成正比。6、植物組織可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定中，斐林酚試劑法、考馬斯亮藍(lán)法兩種方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)？7、Folin-酚試劑法測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)時(shí)受哪些因素的干擾？答： Folin

16、-酚試顯色反響是由絡(luò)氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，因此樣品中假設(shè)含有酚類(lèi)、檸檬酸和巰基類(lèi)化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質(zhì)音絡(luò)氨酸、色氨酸含量的不同而使顯色強(qiáng)度稍有差異。8、用茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸時(shí)，參加Vc的作用是什么？ 答：防止復(fù)原型茚三酮在含氧量高的情況下再氧化9、茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸時(shí)為什么要除去蛋白質(zhì)？用10%乙酸除去蛋白質(zhì)的原理是什么？3四、計(jì)算題1、斐林酚試劑法測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中，以標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)，以650nm吸光度為縱座標(biāo)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線如以下圖所示。實(shí)驗(yàn)中稱取鮮樣0.5g，用5ml蒸餾水提取，取0.1ml提取液同標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定650nm處吸光度

17、為0.50，請(qǐng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量ug，根據(jù)有關(guān)公式，求出每克樣品中的蛋白質(zhì)毫克數(shù)。 解：由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出0.1ml提取液中蛋白質(zhì)含量為67ug 可得，每克樣品中的蛋白質(zhì)毫克數(shù)=(67*5)/(0.1*0.5*1000)=6.7mg/g2、稱取1g葉片和0.3g花瓣，用5 mL提取液分別提取它們的SOD粗酶液，在3 mL反響體系中參加10L粗酶液反響20 min后測(cè)得OD分別為： 葉片 花瓣 未加酶液對(duì)照OD 0.372 0.405 0.727SOD活解：葉片SOD酶活性：0.727-0.372*5000 =489.65U/g葉片鮮重0.727*50%*10*1花瓣SOD酶活性：0.727-0.405*5000 =1476.39U/g葉片鮮重0.727*50%*10*0.3用95