佐劑分類與作用

1、關(guān)于佐劑的分類及作用第1頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四一 佐劑的發(fā)現(xiàn)及其概念 與抗原同時(shí)或預(yù)先應(yīng)用，能夠增強(qiáng)機(jī)體針對抗原的免疫應(yīng)答能力，或改變免疫反應(yīng)類型的制劑1926年，Glenny 等發(fā)現(xiàn)明礬沉淀白喉毒素能產(chǎn)生一種微粒，極大地增強(qiáng)機(jī)體對抗原的特異性免疫應(yīng)答，從而拉開了佐劑使用的序幕。第2頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四1 為什么要使用佐劑？ 可溶性純化蛋白質(zhì)疫苗或蛋白質(zhì)亞單位疫苗的免疫激活作用通常較弱，不足以刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的抗體，因此通常在疫苗制劑中加入佐劑與單獨(dú)應(yīng)用抗原相比，抗原與佐劑聯(lián)合應(yīng)用所需的抗原量較少，機(jī)體產(chǎn)生的抗體量較多，

2、并且還可以減輕免疫耐受第3頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四二 佐劑的作用機(jī)理 1 改變抗原物理性狀，延緩抗原降解和排除，延長體內(nèi)存留的時(shí)間，從而更有效的刺激免疫系統(tǒng)。 2 刺激單核巨噬細(xì)胞增強(qiáng)其對抗原的處理和遞呈能力。 3 刺激淋巴細(xì)胞增生和分化，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的效應(yīng)。4 改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。第4頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四安全，且無短期及長期的毒副作用。佐劑的化學(xué)成分和生物學(xué)形狀清楚，制備批間差異小且易于生產(chǎn)。與單獨(dú)使用抗原相比，佐劑與抗原聯(lián)用能刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。用較少的免疫劑量即可產(chǎn)生效力。保證

3、液體劑型疫苗在較低的濃度下即可刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。進(jìn)入體內(nèi)的佐劑可自行降解且易于從體內(nèi)清除。價(jià)格低廉。三 理想佐劑的必備條件第5頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四四 佐劑的分類 顆粒性佐劑 如氫氧化鋁佐劑 非顆粒性佐劑 如細(xì)胞因子本身具有免疫原性 如如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結(jié)核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等本身不具有免疫原性 如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等來源于植物的佐劑，如皂甙和多糖類提取物等來源于病原微生物的佐劑單磷脂、霍亂毒素以及CpG寡聚脫氧核苷酸等第6頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四五 常用佐劑 鋁鹽佐劑是一類含A

4、l離子的無機(jī)鹽佐劑，主要有氫氧化鋁膠和明礬。氫氧化鋁膠，又稱為鋁膠，由于其生產(chǎn)成本低廉，使用方便，毒性極低。鋁鹽佐劑是第一個(gè)被批準(zhǔn)可用于人的佐劑。1 鋁鹽佐劑第7頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四1-1 作用原理 鋁鹽佐劑是將佐劑與抗原混合,形成凝膠狀態(tài),注入動物體內(nèi)后形成“貯存庫”,這些不溶性顆粒能吸附、分散抗原物質(zhì),增加抗原表面積,在組織中形成一個(gè)富含巨噬細(xì)胞的肉芽腫,延緩吸收。肉芽腫中的抗原緩慢地滲透到組織中,這樣就延長了抗原的刺激時(shí)間,使在正常情況下只能存留數(shù)日的抗原保持達(dá)數(shù)周之久。第8頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四1-2 鋁鹽佐劑的

5、種類鋁化合物沉淀疫苗 鋁化合物吸附疫苗第9頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四1-3鋁鹽佐劑存在的缺點(diǎn)3 鋁化合物的佐劑作用在超過一定劑量以后逐漸下降，其原因可能是鋁化合物在一定程度上對巨噬細(xì)胞有毒害作用4 以鋁化合物為佐劑的疫苗不能采用低溫凍干技術(shù)生產(chǎn)，也不能冷凍保存，這兩點(diǎn)限制了以鋁化合物為佐劑的疫苗的保質(zhì)期。1 主要刺激 Th2 相關(guān)抗體的產(chǎn)生，不能刺激 Th1 的細(xì)胞活性,也不加強(qiáng) CD8+細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（CTL）的活性,即只能增強(qiáng)體液免疫，不能增強(qiáng)細(xì)胞免疫。2 會誘導(dǎo)產(chǎn)生 IgE 抗體，增加發(fā)生超敏反應(yīng)的危險(xiǎn)第10頁，共25頁，2022年，5月20日，1

6、9點(diǎn)24分，星期四弗氏佐劑( FA) 分為 弗氏完全佐劑(FCA) 弗氏不完全佐劑( FIA)2 油性佐劑弗氏不完全佐劑是由低引力和低粘度的礦物油及乳化劑組成的一種貯藏性佐劑。弗氏完全佐劑是在不完全佐劑的基礎(chǔ)上加一定量的分枝桿菌而成。組成第11頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四2-1 作用特點(diǎn)對體液和細(xì)胞免疫系統(tǒng)具有很強(qiáng)的激活作用。 FCA 只用于初始免疫,在以后的加強(qiáng)免疫中只用 FIA。佐劑與抗原的體積一般各占 50 %。 最終所形成的抗原佐劑混合物是典型的“油包水”乳膠混合體。FCA 能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生很強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。鋁鹽佐劑和油包水乳劑是典型的短期貯存

7、庫,這種類型的抗原包裹于注射部位,因此不會由于肝臟的清除作用而丟失。第12頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四2-2 副作用皮下注射時(shí)，可在注射部位引起強(qiáng)烈的炎癥和潰瘍在人用疫苗使用受限！第13頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四2-3其他油性佐劑佐劑-65 在體內(nèi)可被代謝或分泌,用于人的流感疫苗,證明安全有效.白油Span佐劑 是用輕質(zhì)礦物油(白油)作油相,用Span-80或Span-85及Tween-80作為乳化劑制成的油乳佐劑,是當(dāng)前獸用生物品中最常用最有效的佐劑之一。第14頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四3 微生物佐

8、劑短小棒狀桿菌(CP)由CP經(jīng)加熱或甲醛滅活制成,為非特異性免疫增強(qiáng)劑,對機(jī)體毒性低,沒有明顯的副作用?？ń槊?BCG)最常用的微生物佐劑之一原是用來預(yù)防結(jié)核病的疫苗,在預(yù)防兒童結(jié)核病方面功效顯著。胞壁酰二酞(MDP)及其衍生物MDP的成分是N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺,有很強(qiáng)的佐劑活性。被認(rèn)為是最有發(fā)展前途的佐劑之一。細(xì)菌脂多糖(LPS)LPS可起到多克隆B細(xì)胞有絲分裂原的作用,也可促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌單核因子。LPS由于具有毒性,所以不能直接成為人用疫苗的佐劑單磷酰脂質(zhì)A(MLA)MLA是一種毒性較低的具有佐劑活性的脂多糖衍生物。霍亂毒素(CT)霍亂毒素是由霍亂弧菌分泌的分子量為

9、84KD的一種不耐熱腸毒素,增強(qiáng)弱免疫原的免疫原性。第15頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四4 表面活性劑類佐劑1 組成 抗原物質(zhì)與由皂樹皮提取的一種糖苷Quil A及膽固醇按 1：1：1 混合后自發(fā)形成的一種具有較高免疫活性的脂質(zhì)小泡。每個(gè)小泡直徑40 nm，約含1012個(gè)分子的蛋白質(zhì)2 作用方式 ISCOM 能夠與抗原的疏水部分結(jié)合，從而將其親水部位暴露于免疫細(xì)胞，將抗原有效地遞呈給抗原提呈細(xì)胞，由于抗原遞呈細(xì)胞的內(nèi)體小泡和胞質(zhì)溶膠的雙重作用，含 ISCOM 的疫苗可以通過 MHC-和 MHC-兩種途徑將抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，同時(shí)激活CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞4-

10、1免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）第16頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四ISCOM 可以顯著提高 T 細(xì)胞的增殖、分化，并誘導(dǎo)多種亞型 IgG 及特異性抗體的生，引起動物對多種抗原產(chǎn)生高滴度的抗體應(yīng)答。具有佐劑和抗原遞呈的雙重功能。應(yīng)用于多種細(xì)菌、病毒和寄生蟲病的疫苗，具有產(chǎn)生“ 全面” 免疫應(yīng)答的效力， 可長期增強(qiáng)特異性抗體應(yīng)答。ISCOM能有效地通過粘膜給藥，從而可以用于抗呼吸道感染。3 作用特點(diǎn)第17頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四它并不是一種可以和任何抗原都能形成復(fù)合體的佐劑，只有那些含有很多疏水基團(tuán)的抗原或免疫原才能與 ISCOM 形成

11、復(fù)合體，含親水基團(tuán)多的抗原不適合與 ISCOM 佐劑混合制備疫苗。4 存在的不足第18頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四4-2 脂質(zhì)體1 結(jié)構(gòu) ：類似生物膜，一般由磷脂和膽固醇形成的雙分子層包被目標(biāo)物形成的超微球狀制劑。2 特點(diǎn)：脂質(zhì)體注入體內(nèi)后能自然聚集到某些組織；脂質(zhì)體可以通過接觸、吸附、吞噬、融合和脂質(zhì)交換等方式與細(xì)胞相互作用；脂質(zhì)體可以增加所攜帶藥物對淋巴系統(tǒng)的指向性和靶組織的滯留性，延緩藥物釋放，提高療效；無毒并且還可以降低藥物對正常細(xì)胞的毒性第19頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四5 分子佐劑 5-1 細(xì)胞因子化學(xué)組成 多屬小分子多肽

12、或糖蛋白，是由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類生物活性物質(zhì)。特點(diǎn) 對Th細(xì)胞的分化起重要作用,能增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的功能,還有誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子的產(chǎn)生,對機(jī)體的免疫應(yīng)答具有廣泛的上調(diào)作用。 IL-2與外殼蛋白的共表達(dá)形式至少使疫苗效率升高100倍第20頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四5-1-1 細(xì)胞因子種類IL-2 一種重要的T細(xì)胞生長因子IL-12 由單核細(xì)胞和B細(xì)胞產(chǎn)生,具有多種生物活性, 是迄今所知誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答的最主要的細(xì)胞因子。IL-18 是最近發(fā)現(xiàn)的鼠和人的細(xì)胞因子,可誘導(dǎo)Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞高效分泌IFN-,促進(jìn)T細(xì)胞

13、增生,與IL-12產(chǎn)生協(xié)同作用等。IL-15 主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,在哺乳動物一個(gè)主要的功能為調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的發(fā)育與增殖,通過NK細(xì)胞產(chǎn)生IL-15共刺激細(xì)胞因子從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞間的相互作用。IFN- 是一種有效的免疫佐劑,它能協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性、增強(qiáng)抗原呈遞第21頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四5-2 CpG序列(CpG）CpG序列 一類其序列大部分以非甲基化的胞嘧啶核苷酸和鳥嘌呤核苷酸(CpG)為基元的寡聚體,由于這種特征性序列可激活多種免疫效應(yīng)細(xì)胞,故又被稱作免疫刺激DNA序列作用特點(diǎn) 可激活T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞, 產(chǎn)生大量的多種細(xì)胞因子, 增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫效應(yīng)。優(yōu)點(diǎn) CpG引起的免疫反應(yīng)以Th1型為主,因此可以很好的激發(fā)粘膜免疫反應(yīng)雖然CpG-DNA具有安全、有效等優(yōu)點(diǎn)。第22頁，共25頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期四CpG序列作為免疫佐劑有如下特點(diǎn)與常