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1、項(xiàng)目二細(xì)菌的染色技術(shù)食品藥品職業(yè)學(xué)院中藥和生物系中藥和生物系1細(xì)菌按細(xì)胞壁組成不同分為細(xì)菌染色技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)細(xì)菌基本結(jié)構(gòu):細(xì)胞壁革蘭陽性菌:G+革蘭陰性菌:G-2實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)。掌握細(xì)菌革蘭染色方法及其結(jié)果判斷。熟悉革蘭染色法的實(shí)際意義。學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù),鞏固油鏡的使用方法。 細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法3實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法染色目的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的色差,在顯微鏡下更易于識(shí)別。鑒別細(xì)菌染色方法單染色:用于觀察細(xì)菌大小及形態(tài);復(fù)染色/革蘭染色:用于鑒別細(xì)菌,指導(dǎo)臨床合理用藥;其他方法:負(fù)染色、銀染色等4實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法
2、常用染料堿性染料:美蘭、結(jié)晶紫、番紅等;酸性染料:伊紅、酸性復(fù)紅等;中性染料:如基姆薩氏(Gimsa)染料 5實(shí)驗(yàn)步驟細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法涂片、固定初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色95%酒精復(fù)染復(fù)紅油鏡鏡檢7實(shí)驗(yàn)步驟 制片:自制標(biāo)本片細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法涂片干燥固定8涂片過程的無菌操作10實(shí)驗(yàn)步驟 制片:自制標(biāo)本片細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法涂片載玻片要潔凈無油 涂片時(shí),取菌切不可多,更不可將培養(yǎng)基刮下,涂抹要均勻,菌膜不宜過厚。以免影響顯微鏡觀察tips11實(shí)驗(yàn)步驟 制片:自制標(biāo)本片細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法干燥菌膜面朝上 玻片切勿離火焰太近,因溫度太高會(huì)破壞菌體形態(tài)。tips12實(shí)驗(yàn)步驟 Grams染色細(xì)菌染色技術(shù)示例 細(xì)菌革蘭染色法初染結(jié)晶紫媒染盧戈碘液脫色95%酒精復(fù)染沙黃/番紅革蘭染色要嚴(yán)格控制各試劑的作用時(shí)間,尤其是酒精脫色,時(shí)間過短,G-可染成紫色造成假陽性;反之,G+也可染成紅色造成假陰性。 tips14tips2.4.5.水洗后勿使染料干凅,稍微甩干后直接進(jìn)行下一步操作,以免染料結(jié)晶干擾顯微觀察 7.水洗后務(wù)必等標(biāo)本片干燥后方進(jìn)行油鏡觀察,否則油水分層,難以清晰觀察物象 水流不要直接
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