免疫血清制備培訓(xùn)課件

1、免疫血清制備免疫血清制備實驗?zāi)康暮鸵罅私庥绊憴C體免疫應(yīng)答強度的因素;明確初次應(yīng)答和再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生的規(guī)律；制備牛血清白蛋白（BSA）的抗血清；熟悉佐劑的制備和動物免疫的常用方法；了解抗體檢測的常用方法。2免疫血清制備實驗?zāi)康暮鸵罅私庥绊憴C體免疫應(yīng)答強度的因素;2免疫血清制備 在免疫學(xué)實驗中,為制備抗體通常以抗原性物質(zhì)給動物注射,經(jīng)一定時間后,動物血清中可產(chǎn)生大量特異性抗體，這種含有特異性抗體的血清稱免疫血清。 實驗原理3免疫血清制備 在免疫學(xué)實驗中,為制備抗體通常以抗原性物質(zhì)給動物注射,經(jīng)免疫應(yīng)答的影響因素 抗體的產(chǎn)生通常與抗原的質(zhì)和量、動物種類以及接種的途徑有密切關(guān)系。一、抗原分子的結(jié)構(gòu)

2、和性質(zhì) 1.分子量：分子量越大，免疫原性越強。 2.化學(xué)組成及結(jié)構(gòu) （1）蛋白質(zhì) （2）多糖：具有免疫原性, 較蛋白質(zhì)弱。 （3）核酸：多無免疫原性。 3.結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性 4.分子構(gòu)象 5.易接近性 6.物理狀態(tài)4免疫血清制備免疫應(yīng)答的影響因素 抗體的產(chǎn)生通常與抗原的質(zhì)和量、動物二、宿主方面的因素 1.遺傳因素 同種動物不同品系及不同個體對同種抗原產(chǎn)生不同強度的免疫應(yīng)答。 2.其他因素 年齡、性別與健康狀態(tài)。 三、免疫原的劑量及進(jìn)入途徑 （1）劑量 1）劑量不足或過多均不引起免疫應(yīng)答。 2）重復(fù)進(jìn)入引起強免疫應(yīng)答。 （2）途徑：皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、呼吸道和口服免疫應(yīng)答水平依次降低。5免

3、疫血清制備二、宿主方面的因素5免疫血清制備抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律初次應(yīng)答和再次應(yīng)答規(guī)律。 抗體產(chǎn)生的順序規(guī)律：IgM - IgG - IgA - IgD - IgE 6免疫血清制備抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律初次應(yīng)答和再次應(yīng)答規(guī)律。 6免疫血清制備7免疫血清制備7免疫血清制備初次應(yīng)答和再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生比較8免疫血清制備初次應(yīng)答和再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生比較8免疫血清制備實驗方案免疫佐劑制備及動物初次免疫（第一周）再次免疫及血清采集（第二周）血清采集及抗體檢測（第三周）W1W2W3未免疫血清采集再次免疫血清采集初次免疫血清采集初次免疫再次免疫9免疫血清制備實驗方案免疫佐劑制備及動物初次免疫（第一周）W1W2W3未免免

4、疫血清制備培訓(xùn)課件實驗流程12只小鼠小鼠眼眶取血制備血清2只2只8只W1W3W2初次免疫（1只/組）再次 免疫11免疫血清制備實驗流程12只小鼠小鼠眼眶取血制備血清2只2只8只W1W3W1.5mlBSA1.5ml完全福氏佐劑攪拌完全乳化第一周實驗步驟 1.抗原制備滴于水中經(jīng)久不散12免疫血清制備1.5mlBSA1.5ml完全攪拌完全乳化第一周實驗步驟 1 2.動物免疫用1ml注射器12針頭吸出完全乳化的抗原1ml；換4針頭雙后足墊和背部皮下接種，每處約10-20ul。(接種處先用碘酒、酒精消毒)將免疫后的小鼠放回鼠籠。1ml注射器（內(nèi)有乳化好的抗原）貼好標(biāo)簽，4保存下次用。第一周實驗步驟13免

5、疫血清制備 2.動物免疫第一周實驗步驟13免疫血清制備14免疫血清制備14免疫血清制備 3.采集陰性血清（每班2只）用無菌小試管收集未免疫小鼠血（眼眶放血法），標(biāo)記后送準(zhǔn)備室；2,000 rpm離心 10分鐘;吸取血清置1ml塑料管，做好標(biāo)記;注意: 老鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶第一周實驗步驟15免疫血清制備 3.采集陰性血清（每班2只）第一周實驗步驟15免疫血清制備16免疫血清制備16免疫血清制備17免疫血清制備17免疫血清制備第二次課內(nèi)容18免疫血清制備第二次課內(nèi)容18免疫血清制備抗原抗體反應(yīng)抗原與抗體特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。物質(zhì)基礎(chǔ): 1）抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結(jié)合 2

6、）抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表 面的結(jié)合 3）抗原抗體之間的結(jié)合力 4）親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體19免疫血清制備抗原抗體反應(yīng)抗原與抗體特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。19免抗原抗體結(jié)合力靜電引力（electrostatic forces）范德華引力:作用最小（van der Waals interactions）氫鍵:最具特異性 （hydrogen bond ）疏水作用力:作用最大（hydrophobic interactions）抗原抗體結(jié)合力示意圖20免疫血清制備抗原抗體結(jié)合力靜電引力抗原抗體結(jié)合力示意圖20免疫血清制備抗原抗體的親和力和親合力親和力：抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應(yīng)的抗原

7、決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力親合力：抗體結(jié)合部位與抗原表位之間結(jié)合的強度21免疫血清制備抗原抗體的親和力和親合力親和力：抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原抗體的結(jié)合后，使水化層表面電荷減少或消失，水化層變薄，電子云也消失，蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。如再加入電解質(zhì)，如NaCl，則進(jìn)一步使疏水膠體物相互靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。 抗原(親水膠體) 抗體(親水膠體)抗原抗體復(fù)合物 (疏水膠體)電解質(zhì)可見反應(yīng) +22免疫血清制備親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原抗體的結(jié)合后，使水化層表面電荷減少抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律特異性與交叉反應(yīng)性；可逆性：表面的結(jié)合，有可逆性；抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖23免疫血清制備抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律特異性與交叉反應(yīng)性；抗原抗體交叉反應(yīng)示適比性：適合的比例，反應(yīng)才可見；階段性：不可見 可見反應(yīng)；條件依賴性：PH，溫度，電解質(zhì)?？乖贵w反應(yīng)比例性示意圖24免疫血清制備適比性：適合的比例，反應(yīng)才可見；抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖24血清制備：取首次免疫后的小鼠2只，采集血清(方法同上),標(biāo)記后凍存?zhèn)溆?。再次免疫：其余小鼠于腹腔和背部皮下注射上次制備的乳化抗原，每鼠注?.5ml。第二周實驗步驟25免疫血清制備血清制備：第二周實驗步驟25免疫血清制備第三周實驗步驟 血清制備：采集剩余小鼠血,將血置室溫半小時凝固;