免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)課件

1、免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)利用免疫學(xué)原理來檢測抗原、多種免疫分子(抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子和粘附分子等)及免疫細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過程。有助于疾病的輔助診斷、治療及預(yù)后判斷 。2免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)利用免疫學(xué)原理來檢測抗原、多種免疫分子(抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子 一、 凝集反應(yīng) 顆粒性抗原（細(xì)胞、細(xì)菌等）或吸附于免疫無關(guān)載體上的可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適量電解質(zhì)的存在下，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。 1、直接凝集反應(yīng) （1）玻片凝集試驗(yàn) ABO血型鑒定 （2）試管凝集試驗(yàn) 肥達(dá)試驗(yàn)效價(jià)（滴度）：以出現(xiàn)明顯抗原抗體反應(yīng)現(xiàn)象的最高稀釋度作為待檢抗原（或抗體）的含量。 3免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù) 一、 凝集反應(yīng) 3免凝集反應(yīng)（agglutin

2、ation)顆粒型抗原細(xì)菌、細(xì)胞抗體（凝集素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時(shí)凝集反應(yīng)（凝集成團(tuán)）4免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)凝集反應(yīng)（agglutination)顆粒型抗原抗體電解質(zhì)1. 直接凝集試驗(yàn)玻片法試管法含有已知抗體的診斷血清待檢菌液生理鹽水特點(diǎn)簡便、快速不能定量UUUU待檢血清鹽水簡便、快速能定量肥達(dá)氏試驗(yàn)（widal test)傷寒、副傷寒已知抗原5免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)1. 直接凝集試驗(yàn)玻片法試管法含有已知抗體待檢菌液生理鹽水特ABO血型鑒定紅細(xì)胞表面抗原 抗A抗體 抗B抗體 血型 A + - A B - + B H - - O A,B + + AB6免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)ABO血型鑒定紅細(xì)胞表面抗原 抗A抗體

3、 免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)課件8免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)8免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù) 二、沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，當(dāng)兩者比例合適，并有適量電解質(zhì)存在時(shí)，形成肉眼可見的沉淀物或沉淀線。 9免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù) 二、沉淀反應(yīng)9免疫實(shí)沉淀試驗(yàn)（precipitation test）可溶性抗原細(xì)胞裂解液抗體（沉淀素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時(shí)沉淀反應(yīng)（清澄液中出現(xiàn)混濁沉淀）10免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)沉淀試驗(yàn)（precipitation test）可溶性抗原沉淀反應(yīng)分類（1）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) a.單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) b.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（2）免疫電泳試驗(yàn) 對(duì)流免疫電泳：原理：在陰極孔內(nèi)加抗原，陽極孔內(nèi)加抗體。通電后，抗原帶負(fù)電荷較多，分子較小

4、，向陽極泳動(dòng)；抗體分子帶負(fù)電荷較少，加上分子量大，在瓊脂的電滲作用下向陰極泳動(dòng)。 （3）環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 11免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)沉淀反應(yīng)分類11免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（1）單向擴(kuò)散試驗(yàn)（Single redial diffusion test）預(yù)先混有抗體12免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（1）單向擴(kuò)散試驗(yàn)預(yù)先混有抗體12免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（2）雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（Double diffusion test）13免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（2）雙向擴(kuò)散試驗(yàn)13免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（3）對(duì)流免疫電泳作用及特點(diǎn)：抗體球蛋白移向陰極，抗原分子移向陽極，當(dāng)兩者在適當(dāng)比例處相遇，即形成灰白色沉淀線。檢查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比雙向擴(kuò)散法高約10倍，只需12小時(shí)即可獲

5、得檢驗(yàn)結(jié)果。不能定量測定。AgAb_+14免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（3）對(duì)流免疫電泳作用及特點(diǎn)：AgAb_+14免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)三、 免疫標(biāo)記技術(shù) 原理： 利用酶、熒光素、膠體金、發(fā)光物質(zhì)以及放射性核素等標(biāo)記物來標(biāo)記抗原或抗體，再與標(biāo)本中的抗體或抗原反應(yīng)，最后測定復(fù)合物中的標(biāo)記物。 優(yōu)點(diǎn)：特異、敏感、快速，可作定性、定量或定位測定。 15免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)三、 免疫標(biāo)記技術(shù)15免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)依據(jù)檢測物分兩類： 1.免疫組化技術(shù)(immunohistochemical technique)，用于組織/細(xì)胞中抗原或抗體的定位； 2.免疫測定(immunoassay)，用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的檢測。 依據(jù)標(biāo)記物的不同，可

6、分為： 酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)和放射免疫技術(shù)。 1、酶免疫技術(shù) 酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。16免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)依據(jù)檢測物分兩類：16免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 屬固相酶免疫測定 ELISA原理： 把待測標(biāo)本(含有未知抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的順序與固相抗原或抗體起反應(yīng)，再洗滌固相載體，隨后加入酶的底物，底物受酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物。根據(jù)顏色的深淺對(duì)待測物質(zhì)定性或定量。17免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immuno三種試劑：固

7、相抗原或抗體 即把抗原或抗體用合適的方法連接到固相載體表面，同時(shí)保留它們的免疫活性；酶標(biāo)抗原或抗體 即把某些酶用合適的方法連接到抗原或抗體表面，同時(shí)保留它們的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)；酶作用的底物 常用的底物是鄰苯二胺18免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)三種試劑：18免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)ELISA的類型： (1)雙抗體夾心法 測抗原 1）已知抗體包被 2）洗板 3）加待檢抗原標(biāo)本 4）洗板 5）加酶標(biāo)記抗體 6）洗板 7）加底物顯色，測定 19免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)ELISA的類型：19免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（2）間接法 測抗體 1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待檢病人血清 4）洗板

8、 5）加酶標(biāo)記抗人IgG 6）洗板 7）加底物顯色，測定（3）競爭法 測抗原或抗體 測定抗原：在待測管中加入受檢抗原和酶標(biāo)抗原，使它們同固相抗體進(jìn)行競爭性結(jié)合。 20免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)（2）間接法 測抗體20免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）間接法Ag待檢血清酶標(biāo)抗抗體檢測抗體雙抗體法Ag檢測抗原待檢抗原抗原競爭法Ag待檢抗原酶標(biāo)抗原Ag檢測抗原21免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）間接法Ag待檢血清酶標(biāo)抗抗體檢 2、膠體金免疫技術(shù) 以膠體金為標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)。常與膜載體技術(shù)結(jié)合，包括斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)和斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)等。斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)(dot gold immunochromatographic assay，DICA) 以硝酸纖維素膜為載體 如早早孕試驗(yàn)22免疫