人體解剖生理學(xué)實驗

1、實驗二：神經(jīng)-肌肉標(biāo)本的制備與骨骼肌收縮實驗內(nèi)容坐骨神經(jīng)排腸肌標(biāo)本的制備刺激強度與骨骼肌收縮反應(yīng)的關(guān)系骨骼肌單收縮的分析骨骼肌收縮的總和與強直收縮目的要求學(xué)習(xí)蛙類動物單毀髓與雙毀髓的方法。學(xué)習(xí)并掌握蛙類坐骨神經(jīng)排腸肌標(biāo)本的制備方法。學(xué)習(xí)肌肉實驗的電刺激方法及肌肉收縮的記錄方法。觀察刺激強度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系。3 個時期。式的改變?；驹硗茴惖囊恍┗旧顒雍蜕砉δ芘c恒溫動物相似，若將蛙的神經(jīng)-肌肉表明神經(jīng)和肌肉產(chǎn)生了一次興奮。在生理學(xué)實驗中常利用蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本研究神經(jīng)、肌肉的興奮、興奮性；刺激與反應(yīng)的規(guī)律和肌肉收縮的特征等， 制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的一項基本操作技

2、術(shù)。肌組織對于一個閾上強度的刺激，發(fā)生次迅速的收縮反應(yīng)，稱為單收縮。單收縮的過程可分為 3 個時期：潛伏期、收縮期和舒張期。ft直收縮。動物與器材蛙或蟾蜍、常用手術(shù)器械(手術(shù)剪、手術(shù)鑷、手術(shù)刀、金冠剪、眼科剪、眼科鑷、毀髓針和玻璃分針)、蠟盤、蛙板(木質(zhì)或硬泡沫塑料)、玻璃板、同定針、鋅銅弓、培養(yǎng)皿或不銹鋼盤、污物缸、滴管、紗布、粒棉線、任氏液。計算機采集系統(tǒng)、張力傳感器(100 g)、保護刺激電極、支架、雙凹夾、肌槽。實驗方法與步驟一、神經(jīng)肌肉標(biāo)本的制備破壞腦、脊髓 取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈（勿用手搓）。左手握右手持探針由頭顱后緣的枕骨大孔處垂直刺入椎管（5.1-1）。然后將探針改23出

3、椎管。如蟾蜍仍有反射活動，表示腦和脊髓破壞不徹底，應(yīng)重新破壞。剪除軀干上部皮膚及內(nèi)臟用左手捏住蟾蜍的脊柱右手持粗剪刀在前肢腋窩處連同皮膚、腹肌、脊柱一并剪斷，然后左手握住蟾蜍的后肢，緊靠柱兩側(cè)將腹壁及內(nèi)臟剪去(注意避開坐骨神經(jīng)),并剪去肛門周圍的皮膚，留下脊柱和后肢。剝皮 一只手捏住脊柱的斷端（注意不要捏住脊柱兩側(cè)的神經(jīng)），只手捏住其皮膚的邊緣,向下剝?nèi)ト亢笾钠つw（5.1-2）。將標(biāo)本放在干凈的任氏液中。將手及使用過的探針、剪刀全部沖洗干凈。分離兩腿 用鑷子取出標(biāo)本,左手捏住脊柱斷端,使標(biāo)本背面朝上，右手用粗剪刀剪去突出的骶骨（也可不進行此步）7、8、9到達膝關(guān)節(jié)腘窩處有分支進入腓腸肌（5

4、.1-3）。游離坐骨神經(jīng)和腓腸肌 用蛙釘或左手的兩個手指將標(biāo)本繃直、固定。先在腹腔面用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng),然后在標(biāo)本的背側(cè)于股二頭肌與半剪去其它不用的組織 操作從脊柱向小腿方向進行。上而下剪去支配腓腸肌以外的神經(jīng)分支，直至腘窩（5.1-4(A)），并搭放在1/3（2/3），制成坐骨神經(jīng)-小腿的標(biāo)本。完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本 將脊椎和坐骨神經(jīng)從腓腸肌上取下，提起腓腸肌的結(jié)扎線剪斷跟腱。用粗剪剪去膝關(guān)節(jié)以下部位，便制成了坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本（圖 5.1-4(B)）。檢驗標(biāo)本 用沾有任氏液的鋅銅弓觸及一下（或電刺激刺激）用熱玻棒、食鹽（1%HSO）刺激坐骨神經(jīng)中樞端（或肌肉），觀察肌肉24收縮

5、有何變化? 如果放上食鹽肌肉無動靜,用任氏液將鹽沖洗掉,再觀察沖洗過程中肌肉收縮有何變化?二、刺激強度與骨骼肌收縮反應(yīng)的關(guān)系實驗儀器用品的準(zhǔn)備(100 g)計算機采集系統(tǒng)的準(zhǔn)備實驗觀察啟動刺激圖標(biāo)，觀察肌肉收縮反應(yīng)。如果肌肉無收縮反應(yīng)，則適當(dāng)增度。同法逐漸增加刺激強度，觀察刺激強度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系。34 次同等高度的收縮曲線和刺激強度(圖)。將實驗結(jié)果填入表。表刺激強度與收縮反應(yīng)的關(guān)系實驗次數(shù)實驗次數(shù)刺激強度（mV）收縮幅度（mm）三、骨骼肌單收縮的分析實驗儀器用品的準(zhǔn)備（見上）實驗觀察刺激腓腸肌選用單刺激方式，調(diào)節(jié)刺激強度、使肌肉收縮的幅度適中(30mm 左右)。將實驗3 個時程：潛伏朋

6、、收縮期與舒張期(圖)。（2）刺激坐骨伸經(jīng)將神經(jīng)搭在肌槽的刺激電極上，刺激輸出與肌槽上的刺激電極連接(圖 2。在刺激參數(shù)部不變的情況下，比較刺激神經(jīng)與刺激腓腸肌的單收縮曲線。四、骨骼肌收縮的總和與強直收縮實驗儀器用品的準(zhǔn)備（見上）實驗觀察收縮的總和510 變化(圖)。強直收縮減慢掃描速度(5mm/5)35mm 1.5 次/s(5)、6 次/s(10)、10 次/s(20)30 次/s(35)45 次50）并記錄肌肉收縮曲線的變化(29)注意事項 1用金屬器械觸碰神經(jīng)干。標(biāo)本的興奮性。制備標(biāo)本時，神經(jīng)纖維應(yīng)盡可能長一些，將附著于神經(jīng)干上的結(jié)締組織使標(biāo)本興奮性穩(wěn)定,再開始實驗效果會較好。各儀器應(yīng)妥

7、善接地，儀器之間、標(biāo)本與電極之間應(yīng)接觸良好。經(jīng)常滴加任氏液，保持標(biāo)本濕潤思考題?金屬器械碰壓或損傷神經(jīng)與腓腸肌，可能引起哪些不良后果?如何保持標(biāo)本的機能正常？是 什 么 ？ 5及生理過程？刺激骨骼肌與刺激神經(jīng)的單收縮曲線有何不同？完全強直收縮的條件與機制。實驗三：影響神經(jīng)沖動傳導(dǎo)的因素觀察實驗?zāi)康模阂龑?dǎo)蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位，并觀察其基本波形（電位）。學(xué)習(xí)和掌握神經(jīng)干動作電位傳導(dǎo)速度測定的原理和方法。何種影響？實驗原理：蛙類的一些基本生命活動和生理功能與恒溫動物相似，若將蛙的神經(jīng)-肌肉表明神經(jīng)和肌肉產(chǎn)生了一次興奮。在生理學(xué)實驗中常利用蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本研究神經(jīng)、肌肉的興奮、興奮性；刺激與反

8、應(yīng)的規(guī)律和肌肉收縮的特征等， 制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的一項基本操作技術(shù)。奮過程所發(fā)生的這種電位變化稱神經(jīng)干動作電位。如果將兩個引導(dǎo)電極置于正常完整的神經(jīng)干表面，當(dāng)神經(jīng)干的一端興奮之后，興奮波會先后通過兩個引導(dǎo)電極(r1r1,5.5-1)，可記錄到兩個相反方一個方向的電位偏轉(zhuǎn)波形，稱為單向動作電位?；淖?，這一點不同于單根神經(jīng)纖維的動作電位。A類纖維為主，傳導(dǎo)速度(V)大約為3540 m/s。測定神經(jīng)沖動在神經(jīng)干上傳導(dǎo)的距離(d)與通過這段距離所需的時間(t)，V=d/tt1，t2，t2t1d(5.5 15.5-2r1r2動作電位的傳導(dǎo)速度與動作電位產(chǎn)生的速度密切相關(guān),都是以離子運

9、動為基動作電位在神經(jīng)干上傳導(dǎo)的速度產(chǎn)生影響。儀器與試劑及材料：玻璃分針、蛙板（或玻璃板）、蛙釘、細(xì)線、培養(yǎng)皿、滴管、雙凹夾、培養(yǎng)皿、 1.5 倍氯化鉀任氏液、0.5實驗方法與步驟：神經(jīng)肌肉標(biāo)本的制備坐骨神經(jīng)標(biāo)本的制備儀器及標(biāo)本的連結(jié)用浸有任氏液的棉球擦拭神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒上的電極，標(biāo)本盒內(nèi)放置一遠中端置于引導(dǎo)電極上。5.5-1816Hz，0.10.2ms，2V)0.10.52 ms/cm。外觸發(fā)輸入接刺激器的觸發(fā)輸出端。觸發(fā)選擇置于外觸發(fā)同步。開啟至熒光屏中間。5.5-2CH1、CH2觀測和測定雙相動作電位緩慢增大刺激強度，在偽跡后出現(xiàn)的先上(負(fù)相波)后下(正相波)的電作電位波形的變化。讀出波寬為

10、某一數(shù)值時的閾刺激。增大刺激強度的過程中，偽跡和動作電位均隨之加大，但當(dāng)強度加大加大。這是區(qū)別刺激偽跡與動作電位的可靠方法之一。5.5-3)將神經(jīng)干標(biāo)本放置的方向倒換后，雙相動作電位的波形有無變化？r1,r15觀察單相動作電位用鑷子將兩個引導(dǎo)電極r1,r13mol/L溶液的濾紙片貼在第二個引導(dǎo)電極數(shù)值。6動作電位傳導(dǎo)速度的測定換一根坐骨神經(jīng)，按步驟3（1）搭放在神經(jīng)屏蔽盒的電極上。進入“神經(jīng)干動作電位傳導(dǎo)速度”模擬實驗菜單，或在顯示方式菜單中選擇“比較顯示方式”（則可在一個通道內(nèi)顯示兩個通道的圖形個通道中（或示波器的上、下線）觀察到先后形成的兩個雙向動作電位波形。t1，下線為t2(t2t1d(

11、即測定 r245min導(dǎo)速度。255 min的傳導(dǎo)速度。實驗結(jié)果：Vd/(t2t1)(m/s)。注意事項：用金屬器械觸碰神經(jīng)干。標(biāo)本的興奮性。制備標(biāo)本時，神經(jīng)纖維應(yīng)盡可能長一些，將附著于神經(jīng)干上的結(jié)締組織使標(biāo)本興奮性穩(wěn)定,再開始實驗效果會較好。各儀器應(yīng)妥善接地，儀器之間、標(biāo)本與電極之間應(yīng)接觸良好。經(jīng)常滴加任氏液，保持神經(jīng)標(biāo)本濕潤，但要用濾紙片吸去神經(jīng)干上過多上，以免影響動作電位的波形。測定動作電位傳導(dǎo)速度時，兩對引導(dǎo)電極間的距離應(yīng)盡可能大。思考題：KCl特性有矛盾嗎？為什么?引導(dǎo)電極調(diào)換位置后，動作電位波形有無變化?為什么?t1的？4為什么? 附：刺激偽跡 逐漸增大刺激強度時，在屏幕的左側(cè)基線

12、上第一個波即為偽它的產(chǎn)生機制有二，一是通過刺激電極與記錄電極之間的電容偶合進入放大器， 細(xì)胞膜的電纜學(xué)說 細(xì)胞外液和細(xì)胞內(nèi)液均為含電解質(zhì)的液體，可以看作為兩個導(dǎo)體，有一定的電阻；細(xì)胞膜是含脂質(zhì)的膜，相對地視作絕緣體，與前雙極記錄法 本實驗使用的記錄方法為雙極記錄法，所記錄到的電位變刺激的極性法則 以直流電作用于神經(jīng)時，在通電、斷電時均可產(chǎn)生興記錄介質(zhì) 通常所說雙相動作電位的波形，其記錄介質(zhì)是空氣或油。若上滴過多的任氏液。實驗四：蛙類離體心臟灌流及藥物影響（綜合設(shè)計性實驗）實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)離體蛙心灌流的實驗方法，了解離體器官的研究方法。了解腎上腺素、乙酰膽堿等激素、神經(jīng)遞質(zhì)對心臟活動的調(diào)節(jié)意義。實

13、驗原理：壞，例如酸堿度及離子濃度的急劇改變等，心臟的活動就會受到影響。釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力量減弱，心率減慢。的影響與其內(nèi)部所含物質(zhì)的成份有關(guān)。動物與器材：蛙心夾,計算機采集系統(tǒng),張力傳感器,滴管,培養(yǎng)皿,污物缸,紗布,棉線,橡皮泥, ,0.65%NaCl1%CaCl1%KCl3%2.5%NaHCO1:50002乙酰膽堿,300U/ml方法與步驟：取一只蛙或蟾蜍,雙毀髓后背位于蠟盤中,仔細(xì)識別心臟周圍的大血管。在左動脈下方穿一線,于動脈圓錐處結(jié)扎,再從左右兩動脈下方穿一線,并打一活蛙心套管,然后將盛有少量任氏液的斯氏蛙心套管,由開口處插入動脈圓錐.當(dāng)套管進到大動脈圓錐基部時,應(yīng)將套管稍稍后

14、退,提取蛙心夾連線并使蛙心套管尖端向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進,經(jīng)動脈瓣插入心室腔內(nèi)。此時可見吸去套管中的血液,更換新鮮任氏液。穩(wěn)定套管后,輕輕提起備用線,將左右動脈連同插入的套管用雙結(jié)扎緊(不得漏液),再將結(jié)線固定在套管的小玻璃鉤上,然心室內(nèi)余血,使血管內(nèi)灌流液不再有殘留血液,保持套管內(nèi)液面高度一致,進行實驗。將插好的離體心臟套管固定在支架上,用蛙心夾住少許的心尖部肌肉.再將蛙心尖上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。注意:勿使灌流液滴到張力傳感器上,調(diào)節(jié)顯示器的心臟收縮的曲線幅度適中。實驗觀察度。實驗項目設(shè)計及結(jié)果觀察溫度對無機離子蛙心活動的影響A、把蛙心套管內(nèi)任氏液全部換為 0.

15、65%NaCl 溶液，觀察心跳變化。B0.65%NaCl1%CaCl2溶液 12 滴，觀察心跳變化。C1%CaCl121%KCl122觀察心跳變化。DKCl0.01%23觀察心跳變化。遞質(zhì)和激素對蛙心活動的影響A、把含腎上腺素的溶液吸出，換以任氏液，加入 0.01%乙酰膽堿溶液 12滴，觀察心跳變化。B、把含乙酰膽堿的溶液吸出，換以任氏液，加入 3%乳酸溶液 12 滴，觀察心跳變化。待心跳變化明顯時，立即加入 2.5%NaHCO3逐步恢復(fù)。心血管藥物對蛙心活動的影響溶液 12 滴，觀察心跳K實驗結(jié)果。觀察自己提取的植物制劑和人民常飲用的化合物對例題蛙心的活動影響中草藥：夾竹桃葉、蟾酥、蛙皮素、

16、煙葉、茶葉等。有機化合物：乙醇、甲醇等。（鮮組織用量多些泡冷卻后備用。設(shè)計實驗觀察的項目數(shù)量10進行實驗。注意事項：3復(fù)正常后再進行下一項實驗。錯。響實驗結(jié)果。蛙心插管內(nèi)液面應(yīng)保持恒定高度。保持記紋鼓轉(zhuǎn)速均勻一致。思考題：本實驗說明心肌的那些生理特征？用實驗說明內(nèi)環(huán)境相對恒定的意義。試分析任氏液中適量離子,鈣離子,鉀離子對心肌的影響。為何強調(diào)實驗保持灌流液面的恒定?灌流量對心臟活動的有什么影響？試想,活的機體在心交感神經(jīng)興奮時或迷走神經(jīng)興奮時對心臟有何影響附：離子和藥物對離體蛙心活動的影響的解釋K對心臟活動的影響：總體看來心肌對細(xì)胞外 K濃度變化比較敏感；但是不同部位心肌的敏感性有所不同，心房

17、肌最敏感，房室束浦肯野纖維系統(tǒng)次之，竇房結(jié)敏感性較低。細(xì)胞外液鉀濃度增高時，對興奮性的影響與其濃度增高的程度有關(guān)。當(dāng) K 濃度輕度或者中度升高時，細(xì)胞內(nèi)外K的濃度梯度減小，K外流的力量減弱,靜息電位（RP）的絕對值減小,和閾電位(TP)差值減小,細(xì)胞的興奮性增高；當(dāng) K 的濃度大幅度的升高，RP 的絕對值減小（膜內(nèi)55mv 左右）時，鈉通道的開放效率降低，鈉通道逐漸失活，興奮性降低或者喪失，嚴(yán)重時，可導(dǎo)致心肌停搏于舒張狀態(tài)。此時，僅由Ca2的內(nèi)流來構(gòu)成動作電位，故上升支小而緩慢，使興奮傳導(dǎo)速度減慢，傳導(dǎo)性降低。K程加速，平臺期縮短，不應(yīng)期也縮短。KCa2在細(xì)胞膜上有競KCa2減少，心肌細(xì)胞內(nèi)C

18、a2Ca2能力。4 期自動除極速度減慢，導(dǎo)致竇房結(jié)自律性降低，心率減慢。Ca2對心臟活動的影響：Ca2Na用。因此，細(xì)胞外Ca2濃度發(fā)生變化時，與Ca2Na動都將受到影響，而對靜息電位則無明顯作用。Ca2NaNa0電位的差距加大，興奮性降低；發(fā)生興奮后，Na0Ca202Ca20Ca2極加速、不應(yīng)期和動作電位時程均縮短。Ca2Ca2Ca2去甲腎上腺素對心臟活動的影響：去甲腎上腺素與心肌細(xì)胞膜上的cAMPCa2Ca24If，使心率加快。乙酰膽堿對心臟活動的影響：McAMPCa2可以能使傳導(dǎo)速度減慢，心率降低。50.65NaCl 對心臟活動的影響：0.65NaClCa2濃度、K+濃度大大降低，使心肌的收縮能力減弱，心率減慢。63乳酸對心臟活動的影響：