基因診斷與基因治療課件

1、基因診斷利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)方法，直接檢測基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否異常，從而對疾病做出診斷的方法。 基因治療基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術(shù)?；蛟\斷與基因治療1基因診斷利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)方法，直接檢測基基因診斷的特點(diǎn)針對性強(qiáng)靈敏性高特異性強(qiáng)檢測樣品獲取方便適應(yīng)性強(qiáng)基因診斷與基因治療2基因診斷的特點(diǎn)針對性強(qiáng)靈敏性高特異性強(qiáng)檢測樣品獲取方便適應(yīng)性基因診斷常用的技術(shù)方法 一六四 二核酸分子雜交DNA芯片限制性內(nèi)切核酸酶酶譜分析 聚合酶

2、鏈反應(yīng)三五 單鏈構(gòu)多態(tài)性檢(SSCP)DNA序列測定基因診斷與基因治療3基因診斷常用的技術(shù)方法 一六四 二核酸分子雜交DNA芯片限制Southern印跡雜交基因診斷與基因治療4Southern印跡雜交基因診斷與基因治療4Northern 印跡雜交法提取RNA樣本RNA變性瓊脂糖凝膠電泳分離轉(zhuǎn)移至膜探針（標(biāo)記DNA或RNA）與之雜交顯影或顯色檢測信號(hào)。 Northern法可用于檢測組織細(xì)胞中總RNA或mRNA基因診斷與基因治療5Northern 印跡雜交法提取RNA樣本RNA變性瓊脂PCR產(chǎn)物變性后，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，正?；蚝妥儺惢虻倪w移位置不同，可分析確定致病基因的存在。 PCR/單鏈

3、構(gòu)象多態(tài)性分析（SSCP）過程原理基因診斷與基因治療6PCR/單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（SSCP）過程原理基因診斷與基因基因診斷與基因治療7基因診斷與基因治療7基因治療的策略一基因置換二基因添加三基因干預(yù)四自殺基因治療五基因免疫治療基因診斷與基因治療8基因治療的策略一基因置換二基因添加三基因干預(yù)四自殺基因治療五一、基因置換基因診斷與基因治療9一、基因置換基因診斷與基因治療9二、基因添加基因診斷與基因治療10二、基因添加基因診斷與基因治療10三、基因干預(yù)基因診斷與基因治療11三、基因干預(yù)基因診斷與基因治療11四、自殺基因治療基因診斷與基因治療12四、自殺基因治療基因診斷與基因治療12基因診斷與基因治療

4、13基因診斷與基因治療13五、基因免疫治療基因診斷與基因治療14五、基因免疫治療基因診斷與基因治療14體細(xì)胞基因治療基因治療的兩種方式生殖細(xì)胞基因治療1只限于某一體細(xì)胞的基因的改變2只限于某個(gè)體的當(dāng)代1對缺陷的生殖細(xì)胞進(jìn)行矯正2當(dāng)代及子代基因診斷與基因治療15體細(xì)胞基因治療基因治療的兩種方式生殖細(xì)胞基因治療1只限于某一存在的一些問題1對特定座位基因轉(zhuǎn)移，目前還存在較大困難；2隨機(jī)插入可能引起后代的基因突變。體細(xì)胞基因治療1）靶細(xì)胞的遺傳修飾至今尚無實(shí)質(zhì)性展；2）基因轉(zhuǎn)移效率不高，只能用顯微注射法；3）只適用于排卵周期短而次數(shù)多的動(dòng)物，很難適用于人類。 （但目前輔助生殖技術(shù)的發(fā)展較為有效的解決了

5、獲取卵細(xì)胞的辦法。一次可獲取少者3-5個(gè)，多者十幾個(gè)。）生殖細(xì)胞基因治療基因診斷與基因治療16存在的一些問題1對特定座位基因轉(zhuǎn)移，目前還存在較大困難；體細(xì)基因治療的基本程序基因診斷與基因治療17基因治療的基本程序基因診斷與基因治療17（一）治療性基因的獲得在了解疾病發(fā)生的分子機(jī)制基礎(chǔ)上， 選擇對疾病有治療作用的特定基因。 治療性基因獲得的方法很多： 用酶切或探針雜交法從基因組DNA文庫獲得，從cDNA文庫獲取，PCR擴(kuò)增，人工合成等。 基因診斷與基因治療18（一）治療性基因的獲得在了解疾病發(fā)生的分子機(jī)制基礎(chǔ)上， 選擇（二）基因載體的選擇 基因治療關(guān)鍵步驟之一，是將治療基因高效轉(zhuǎn)移 入患者體內(nèi)、

6、并能調(diào)控其適度表達(dá)。 常用的載體有兩類：病毒載體和非病毒載體。 病毒載體：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體， 腺病毒載體，腺相關(guān)病毒載體等； 非病毒載體：與病毒載體的主要區(qū)別在于：采用理化方法將治療基因轉(zhuǎn)移入患者體內(nèi)。 基因診斷與基因治療19（二）基因載體的選擇 基因治療關(guān)鍵步驟之一，是將治療基因高效（三）靶細(xì)胞的選擇 基因治療的受體細(xì)胞有生殖細(xì)胞和體細(xì)胞兩大類。 對生殖細(xì)胞進(jìn)行基因治療，可使該生殖細(xì)胞分化發(fā)育成長的個(gè)體及其后代均具有正?；?，理論上講是根治遺傳病的理想方法。 但由于涉及安全性和倫理學(xué)問題，目前基因治療中禁止使用生殖細(xì)胞作為靶細(xì)胞，只限于使用體細(xì)胞。 基因診斷與基因治療20（三）靶細(xì)胞的選擇 基

7、因治療的受體細(xì)胞有生殖細(xì)胞和體細(xì)胞兩人類基因治療中，將治療基因?qū)氚屑?xì)胞有兩種 途徑。 一種為直接體內(nèi)療法（in vivo）： 即，將治療基因直接導(dǎo)入體內(nèi)有關(guān)組織細(xì)胞； 另一種為間接體內(nèi)療法（ex vivo）： 即，在體外先將治療基因?qū)肱囵B(yǎng)的靶細(xì)胞內(nèi)，再將已獲得表達(dá)外源基因的遺傳修飾細(xì)胞回輸入病人體內(nèi)，達(dá)到治療目的。 基因診斷與基因治療21人類基因治療中，將治療基因?qū)氚屑?xì)胞有兩種 途徑。 治療基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法 化學(xué)方法物理方法膜融合法病毒載體法質(zhì)粒DNA直接轉(zhuǎn)移法（四）基因轉(zhuǎn)移方法 磷酸鈣法 DEAE葡聚糖法 電穿孔法 粒子轟擊法（基因槍法）基因診斷與基因治療22 ( 五 ) 轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)

8、胞的選擇鑒定 標(biāo)記基因技術(shù) 基因缺陷型受體細(xì)胞技術(shù) 基因共轉(zhuǎn)染技術(shù) 分子雜交技術(shù) 外源基因表達(dá)鑒定 基因診斷與基因治療23 ( 五 ) 轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的選擇鑒定 標(biāo)記基因技術(shù) ( 六 ) 回輸體內(nèi) 將治療性基因修飾的細(xì)胞以不同方式回輸體內(nèi)。 基因診斷與基因治療24 ( 六 ) 回輸體內(nèi) 將治療性基因修飾的細(xì)胞以不同基因治療的應(yīng)用與展望基因診斷與基因治療25基因治療的應(yīng)用與展望基因診斷與基因治療25(一)基因治療應(yīng)滿足的條件： 3、靶細(xì)胞易獲取、培養(yǎng)、及回輸體內(nèi)。2、僅限體細(xì)胞的基因治療 1、單基因缺陷疾病 4、治療效果應(yīng)勝過對病人的危害。 5、表達(dá)水平無需調(diào)控且無副作用。 6、需經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證安全可行?；蛟\斷與基因治療26(一)基因治療應(yīng)滿足的條件： 3、靶細(xì)胞易獲取、培養(yǎng)、及回（二）基因治療有待解決的問題 1、難以獲得真正有治療作用的基因。 2、外源基因的表達(dá)難以在體內(nèi)精確調(diào)控。基因診斷與基因治療27（二）基因治療有待解決的問題 1、難以獲得真正有治療作用的 3、體細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后，其生物學(xué)特性會(huì)有改變。