微生物的測醫(yī)學宣教培訓課件

1、微生物的測醫(yī)學宣教微生物的測醫(yī)學宣教一、分類碳酸飲料(品)(汽水)類 果汁(漿)及果汁飲料(品)類 蔬菜汁及蔬菜汁飲料(品)類 含乳飲料(品)類 植物蛋白飲料(品)類 瓶裝飲用水類 茶飲料(品)類 固體飲料(品)類 特殊用途飲料(品)類 微生物的測醫(yī)學宣教2一、分類碳酸飲料(品)(汽水)類 微生物的測醫(yī)學宣教2總酸度、pH值、還原糖含量食品中微生物的檢測 細菌總數 大腸菌群數食品添加劑的檢測甜味劑糖精鈉、甜蜜素、安賽蜜、阿斯巴甜。防腐劑苯甲酸、山梨酸微生物的測醫(yī)學宣教3總酸度、pH值、還原糖含量微生物的測醫(yī)學宣教3二、微生物檢驗1、細菌總數菌落總數是指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1

2、g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數。它可以反應食品的新鮮度、被細菌污染的程度、生產過程中食品是否變質和食品生產的一般衛(wèi)生狀況等。因此它是判斷食品衛(wèi)生質量的重要依據之一。微生物的測醫(yī)學宣教4二、微生物檢驗1、細菌總數微生物的測醫(yī)學宣教4流程檢樣做成幾個適當倍數的稀釋液選擇2-3個適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內每皿內加入46適量營養(yǎng)瓊脂菌落數報告微生物的測醫(yī)學宣教5流程檢樣做成幾個適當倍數的稀釋液選擇2-3個適宜稀釋度各（1）樣品的無菌處理以無菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內（瓶內預先置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經

3、充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。 固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質器中以8000r/min100000r/min的速度處理1min，做成1：10的均勻稀釋液。微生物的測醫(yī)學宣教6（1）樣品的無菌處理以無菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪（2）稀釋、接種用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。微生物的測醫(yī)學宣教7（2）稀釋、接種用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿微生物的測醫(yī)學宣教培訓課件根據食品衛(wèi)生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選

4、擇23個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。稀釋液移入平皿后，應及時將涼至46營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基可放置在（461）0C）水浴鍋內保溫注入平皿15ml，并轉動平皿使混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內作空白對照。等瓊脂凝固后，翻轉平板，置（361）0C恒溫箱內培養(yǎng)（482）h取出，計算平板內菌落數目乘以倍數，即得1g（1mL）樣品所含菌落總數。微生物的測醫(yī)學宣教9根據食品衛(wèi)生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選擇23個適宜菌落計數方法做平板菌落計數時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以

5、防遺漏。在記下各平板的菌落數后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數。平板菌落數的選擇 選取菌落數在30300之間的平板作為菌落總數測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應采用兩個平板平均數，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數。微生物的測醫(yī)學宣教10菌落計數方法做平板菌落計數時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢稀釋度的選擇應選擇平均菌落數在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數報告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數均在30300之間，則視兩者之比如何來

6、決定。若其比值小于或等于2，應報告其平均數；若大于2則報告其中較小的數字。 若所有稀釋度平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。 若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數報告之。微生物的測醫(yī)學宣教11稀釋度的選擇應選擇平均菌落數在30300之間的稀釋度，乘簡便方法：菌落總數測定紙微生物的測醫(yī)學宣教12簡便方法：菌落總數測定紙微生物的測醫(yī)學宣教12使用方法微生物的測醫(yī)學宣教13使用方法微生物的測醫(yī)學宣教132、大腸菌群的測定大腸菌群是指在37、24h能發(fā)酵乳糖，產酸、

7、產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭式陰性無芽孢桿菌。大腸菌群數以每100ml（g）檢樣中大腸菌群最可能數（MPN）表示。微生物的測醫(yī)學宣教142、大腸菌群的測定大腸菌群是指在37、24h能發(fā)酵乳糖，產流程乳糖膽鹽發(fā)酵管變黃渾濁，微生物的測醫(yī)學宣教15流程乳糖膽鹽發(fā)酵管變黃渾濁，微生物的測醫(yī)學宣教15培養(yǎng)基配方乳糖膽鹽發(fā)酵雙料:(1)蛋白胨 40g(2)牛膽鹽 10g(3)乳糖 20g(4)蒸餾水 1000ml(5)溴甲酚紫 （1.6g/t） 2ml (6)PH值7.2 -7.4乳糖發(fā)酵管(1)蛋白胨 20g(2)乳糖 10g(3)蒸餾水 1000ml(4)溴甲酚紫 （1.6g/t） 1ml (5)PH

8、值7.2 -7.4微生物的測醫(yī)學宣教16培養(yǎng)基配方乳糖膽鹽發(fā)酵雙料:乳糖發(fā)酵管微生物的測醫(yī)學宣教16伊紅美藍培養(yǎng)基：成分：蛋白胨10g乳糖10g磷酸氫二鉀2g瓊脂 17g2伊紅水溶液 20ml0.65美藍水溶液 13ml蒸餾水 1000mlpH為7.1制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于熱蒸餾水中，校正pH，分裝于燒瓶內， 121高壓滅菌15min備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50-55，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。微生物的測醫(yī)學宣教17伊紅美藍培養(yǎng)基：微生物的測醫(yī)學宣教17伊紅美蘭瓊脂平板劃線培養(yǎng)大腸菌群的典型菌落（1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落（2）紫黑色，不帶或略帶金屬

9、光澤的菌落（3）淡紫紅色、中心色較深的菌落。 微生物的測醫(yī)學宣教18伊紅美蘭瓊脂平板劃線培養(yǎng)大腸菌群的典型菌落（1）深紫黑色，具革蘭氏染色陰性菌微生物的測醫(yī)學宣教19革蘭氏染色陰性菌微生物的測醫(yī)學宣教19紙片法微生物的測醫(yī)學宣教20紙片法微生物的測醫(yī)學宣教20MPN表 陰性管數 MpN 95可信限100 mL(g) 1mL(g)，*30.1mL(g)*30.0lmL(g)*3 下限上限 0 0 0 30 5 0 0 1 30 0 0 2 30 90 0 0 3 30 0 1 0 30 5 0 1 1 60 130 0 1 2 90 0 1 3 120 續(xù)表 陽性管數 MPN 95可信限100m

10、L(g)1mL(g)3 0.l mL(g)x3 0.0lmL(g)X3 下限上限 0 2 0 60 0 2 1 90 0 2 2 120 0 2 3 160 0 3 0 90 0 3 1 130 0 3 2 160 0 3 3 190 1 0 0 40 5 200 1 0 1 70 10 210 1 0 2 110 1 0 3 150 1 1 0 70 10 230 1 1 1 110 30 360 1 1 2 150 1 1 3 190 1 2 0 110 30 360 1 2 1 150 1 2 2 200 1 2 3 240 1 3 0 160 1 3 1 200 1 3 2 240 1

11、 3 3 290 2 0 0 90 10 360 2 0 1 140 30 370 2 0 2 200 2 0 3 260 2 1 0 150 30 440 2 1 1 200 70 890 2 1 2 270 2 1 3 34o 微生物的測醫(yī)學宣教21MPN表革蘭氏染色革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸銨結晶紫染1分鐘。 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數滴，并輕輕搖動進行脫色，30秒后水洗，吸去水分。 7）蕃紅梁色液（?。┤?0秒鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。 染色的

12、結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。 微生物的測醫(yī)學宣教22革蘭氏染色革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步分光光度計使用方法微生物的測醫(yī)學宣教23分光光度計使用方法微生物的測醫(yī)學宣教23微生物的測醫(yī)學宣教24微生物的測醫(yī)學宣教242使用方法（1）預熱儀器 將選擇開關置于“T”，打開電源開關，使儀器預熱20分鐘。為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預熱儀器時和不測定時應將試樣室蓋打開，使光路切斷。（2）選定波長 根據實驗要求，轉動波長手輪，調至所需要的單色波長。（3）固定靈敏度檔 使用時，調到“1”擋。（4）調節(jié)T=0% 輕輕旋動“0%”旋鈕，使數字顯示為“00.0”

13、，（此時試樣室是打開的）。（5）調節(jié)T=100% 將盛蒸餾水（或空白溶液，或純溶劑）的比色皿放入比色皿座架中的第一格內，并對準光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數字顯示正好為“100.0”。（6）吸光度的測定 將選擇開關置于“A”，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調節(jié)吸光度調節(jié)旋鈕，使數字顯示為“.000”。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架拉手，使待測溶液進入光路，此時數字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數后，打開試樣室蓋，切斷光路。重復上述測定操作1-2次，讀取相應的吸光度值，取平均值。（8）關機 實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，