教培用遺傳病的診斷修改課件

1、遺傳病的診斷修改遺傳病的診斷修改 第一節(jié) 現(xiàn)癥患者診斷 (symptomatic diagnosis) 第一節(jié) 現(xiàn)癥患者診斷 一、常規(guī)臨床診斷 1. 病史的收集一般病史：患者的一般發(fā)病情況。家族史：本病在家族中的發(fā)病情況?；橐鍪罚夯辇g、有無近親結(jié)婚等。生育史：生育年齡；子女健康狀況；有無流產(chǎn)、 死產(chǎn)、早產(chǎn)；有無藥物接觸史、放射 線接觸史等。 2.癥狀和體征的了解 遺傳病的癥狀和體征有和其它疾病的共同性，亦有遺傳病本身的特殊性。 除注意遺傳病的特異性征候群，還應(yīng)注意身體發(fā)育、智力發(fā)育、性器官發(fā)育情況。 3.臨床輔助檢查 包括實(shí)驗(yàn)室檢查、X線、超聲、心電圖、 腦電圖、CT等。 2.癥狀和體征的了解

2、 二、系譜分析（pedigree analysis） 系譜分析往往是由先證者的癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查和其它輔助檢查作出疾病的診斷后，追溯到家系中其他成員，寫出系譜圖。 二、系譜分析（pedigree analysis） 在繪制系譜過程中要注意： 1.系統(tǒng)、完整 *系譜成員應(yīng)調(diào)查三代以上，（包括死者） *凡有近親婚配、死胎、流產(chǎn)和嬰兒死亡等， 也須詢問清楚，記錄在系譜中。 2.去偽存真 注意區(qū)別病人和家屬所提供信息的真?zhèn)巍?在繪制系譜過程中要注意： 3.注意新的基因突變 沒有家族史的先證者應(yīng)考慮是新的基因突變。 例如：假肥大型肌營養(yǎng)不良（DMD）約有1/3的病例為新的基因突變引起的。一般認(rèn)為是由

3、于患者母親卵子形成過程中X染色體上DMD基因突變所致。 3.注意新的基因突變 對系譜的分析要注意區(qū)別： 1.孟德爾遺傳病 包括AD遺傳病、AR遺傳病、XD遺傳病、XR遺傳病、YL疾病等。 系譜分析對這類疾病的分析非常有用，分析時要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。 對系譜的分析要注意區(qū)別： 1.孟德爾遺傳病 2.非孟德爾遺傳病 (1)線粒體遺傳?。?線粒體基因突變所致的遺傳病只通過母系遺傳，女性患者的子女都可能患病。線粒體遺傳病表現(xiàn)為晚發(fā)、進(jìn)行性加重。 (2)多基因病： 其家族

4、性聚集性可能類似于孟德爾遺傳，但不嚴(yán)格遵循孟德爾分離規(guī)律。 2.非孟德爾遺傳病 3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病 (1)基因組印記 部分來自雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在傳遞上符合孟德爾規(guī)律，但在表達(dá)方面受傳遞的雙親性別影響，因而產(chǎn)生母源印記或父源印記時，在系譜分析中要加以注意。 3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病 1. 父系印記基因: 來自父系的等位基因的表達(dá)被抑制來自母系的等位基因表達(dá) (mono-allelic)2. 母系印記基因:來自母系的等位基因的表達(dá)被抑制來自父系的等位基因表達(dá) (mono-allelic)基因印記 1. 父系印記基因: 基因印記 (2)動態(tài)突變

5、在孟德爾遺傳疾病中，突變后的基因在世代傳遞中穩(wěn)定存在，但在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的遺傳病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目發(fā)生改變。 (2)動態(tài)突變 （一）染色體檢查 又稱核型分析（karyotape analysis)，即通過血液或組織培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本，進(jìn)而顯帶、顯微攝影，分組排列對比分析。 是確診染色體病的主要方法。隨著顯帶技術(shù)的應(yīng)用以及高分辯率染色體顯帶技術(shù)的出現(xiàn)和改進(jìn)，能更準(zhǔn)確地判斷和發(fā)現(xiàn)更多的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常綜合征，還可以發(fā)現(xiàn)新的微畸變綜合征。 三、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查 （一）染色體檢查 三、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查教培用遺傳病的診斷修改課件 1.標(biāo)本來源： 現(xiàn)

6、癥病人外周血和身體的各種組織。 2.染色體檢查適應(yīng)證： (1)智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。 (2)夫婦中有染色體異常，如平衡結(jié)構(gòu)重排、嵌合體等。 (3)家族中已有染色體異?；蛳忍旎蝹€體。 (4)多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫。 (5)原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者。 (6)35歲以上的高齡孕婦。 (7)有兩性內(nèi)外生殖器畸形者。 1.標(biāo)本來源： （二）性染色質(zhì)檢查 利用發(fā)根鞘細(xì)胞，皮膚或口腔上皮細(xì)胞，絨毛和羊水細(xì)胞檢查X染色質(zhì)或Y染色質(zhì)。用于兩性畸形或性染色體數(shù)目異常疾病的診斷。 優(yōu)點(diǎn)是方法簡單，有一定價值，但確認(rèn)仍需依靠染色體檢查。 （二）性染色質(zhì)檢查染色質(zhì)檢查 用于由于X染色體數(shù)目異常而引起

7、的性染色體畸變綜合征檢測。如：Turner綜合征 X染色質(zhì)為陰性。 Klinefelter綜合征 X染色質(zhì)為陽性。 2個X染色質(zhì)染色質(zhì)檢查 2個X染色質(zhì) 2. Y染色質(zhì)檢查 利用熒光染料鹽酸喹吖因等染料進(jìn)行Y染色質(zhì)的數(shù)目檢查。這種檢查適用于具有一個或一個以上Y染色體的個體或細(xì)胞群。如正常男性只有一個Y小體，而XYY男性有2個Y小體。 可用于性別的鑒定。 2. Y染色質(zhì)檢查 （三）染色體原位雜交 應(yīng)用生物素、地高辛或熒光染料標(biāo)記的特異性DNA探針與玻片上的細(xì)胞中期染色體或間期核的DNA進(jìn)行雜交檢測。在這些核酸不改變原來結(jié)構(gòu)的情況下，研究核酸片段的位置、相互關(guān)系，因此稱為原位雜交。 （三）染色體原

8、位雜交 應(yīng)用生物素、地高辛或熒 熒光原位雜交（FISH）： 用生物素、地高辛配基等標(biāo)記物標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行原位雜交后，用熒光標(biāo)記的生物素親和蛋白和抗親和蛋白的抗體進(jìn)行免疫檢測和放大，使探針雜交的區(qū)域發(fā)出熒光，這種原位雜交稱為熒光原位雜交。 可完成非整倍體的檢測。 熒光原位雜交（FISH）： 四、生物化學(xué)檢查 單基因遺傳病往往是由于基因突變導(dǎo)致酶和蛋白質(zhì)的改變或缺如，使一些器官的發(fā)育和正常的代謝發(fā)生改變，并在臨床上表現(xiàn)出一系列癥狀。 因此，酶和蛋白質(zhì)的定性和定量分析可反映基因結(jié)構(gòu)的改變，是診斷單基因病的主要方法之一，由于主要采用生化手段故稱之為生物化學(xué)檢查。 四、生物化學(xué)檢查 單基因遺傳病往往

9、是由于基 生化檢查主要是對由于基因突變引起的蛋白質(zhì)和酶結(jié)構(gòu)或功能活性的檢測。此外還包括反應(yīng)底物、中間產(chǎn)物或終產(chǎn)物和受體的結(jié)合能力檢查。該方法特別適用于分子病、先天性代謝缺陷、免疫缺陷等遺傳病的檢查。 該方法所用的材料主要有血液、活檢組織、尿、糞、陰道分泌物、脫落細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞等。 生化檢查主要是對由于基因突變引起的蛋白質(zhì)和酶結(jié)構(gòu) （一）酶和蛋白質(zhì)的分析 利用血液和特定的組織、細(xì)胞對酶的活性和蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行檢測。主要方法有：電泳技術(shù)，酶活性檢測，層析技術(shù)，免疫技術(shù)，氨基酸順序分析技術(shù)等。 （二）代謝產(chǎn)物的檢測 利用血液、尿液和羊水對代謝產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)和量的檢測。主要方法有：血液濾紙片法，顯色反應(yīng)。

10、 （一）酶和蛋白質(zhì)的分析 利用血液和特定的組織、第二節(jié) 癥狀前診斷（pre-symptomatic diagnosis） 指在遺傳病的臨床癥狀出現(xiàn)前所作的診斷。 是針對一些常染色體顯性(AD)遺傳病的雜合子個體的一種診斷方法。這些個體往往發(fā)病年齡延遲，并已經(jīng)生育后代，有1/2的可能性將致病基因傳給子代，造成子代發(fā)病。如果能在雜合子個體生育之前或出現(xiàn)癥狀之前就作出診斷，可以避免他將致病基因傳遞給后代，減少遺傳病的發(fā)病率。第二節(jié) 癥狀前診斷 常染色體顯性雜合子個體的癥狀前診斷方法有三種： 1家系分析法和風(fēng)險估計(jì) 2生化檢查 3基因分析 新生兒篩查（neonatal screening）也是一種癥狀

11、前的診斷。是對已出生的新生兒進(jìn)行某些遺傳病的診斷，是出生后預(yù)防和治療某些遺傳病的有效方法。 常染色體顯性雜合子個體的癥狀前診斷方法有三種：第三節(jié) 產(chǎn)前診斷（prenatal diagnosis） 產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrauterine diagnosis）是對胚胎或胎兒在出生前是否患有某種遺傳病或先天畸形作出準(zhǔn)確的診斷。 第三節(jié) 產(chǎn)前診斷 產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrau 一、產(chǎn)前診斷的適應(yīng)征 135歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史； 2夫婦之一有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常者；或曾生育過染色體病患兒的孕婦； 3已知或推測孕婦是AR或XR攜帶者；曾生育過某種單基因遺傳病患兒的孕

12、婦； 一、產(chǎn)前診斷的適應(yīng)征 135歲以上的 4曾生育過先天畸形（尤其是神經(jīng)管畸形）的孕婦； 5有原因不明的自然流產(chǎn)，畸胎，死產(chǎn)及新生兒死亡的孕婦。 6. 有遺傳病家族史，又系近親結(jié)婚的孕婦。 4曾生育過先天畸形（尤其是神經(jīng)管畸二、產(chǎn)前診斷的方法 儀器診斷 包括：X線檢查 超聲波檢查 胎兒鏡檢查 細(xì)胞學(xué)方法（染色體檢查；染色質(zhì)檢查） 生化方法（蛋白質(zhì)或酶檢查；代謝產(chǎn)物檢查） 分子生物學(xué)方法（基因分析） 利用限制酶酶切技術(shù)、分子雜交技術(shù)、PCR技術(shù)等分子生物學(xué)手段，對羊水細(xì)胞、絨毛或其他胎兒組織中提取的DNA進(jìn)行基因診斷。 二、產(chǎn)前診斷的方法 儀器診斷 三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技術(shù)可用于檢測的標(biāo)本

13、： 羊水上清液、羊水細(xì)胞 絨毛 臍帶血、孕婦外周血中胎兒細(xì)胞 孕婦血清和尿液 受精卵、胚胎組織 三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技術(shù)可用于檢測的 羊膜穿刺術(shù)（amniocentesis） 羊膜穿刺術(shù)一般在妊娠1618周時進(jìn)行。因?yàn)榇藭r羊水量多、胎兒浮動，穿刺時容易進(jìn)針，且不易傷及胎兒。取材最好是在B超監(jiān)視下進(jìn)行。 對抽取的羊水及其中的胎兒脫落細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，分析染色體以及生化和基因的檢測。 羊膜穿刺術(shù)（amniocentesis） 絨毛吸取術(shù) （chorionic villus aspiration sampling, CVS） 絨毛吸取術(shù)一般可在妊娠早期79周時進(jìn)行。取樣最好在B超監(jiān)視下進(jìn)行。通過

14、該技術(shù)獲得絨毛，可作為胎兒性別鑒定、核型分析、生化檢查和DNA分析。 絨毛吸取術(shù) 絨毛吸取術(shù)一般可在妊娠早期7 臍帶穿刺術(shù)（cordocentesis） 臍帶穿刺術(shù)可在B超監(jiān)視下進(jìn)行。用一細(xì)針經(jīng)孕婦腹壁進(jìn)入胎兒的臍帶，抽取胎兒臍靜脈血。 一般在孕中期（妊娠18周）進(jìn)行。 臍血可作染色體或血液學(xué)各種檢查，亦可用于因羊水細(xì)胞培養(yǎng)失敗、DNA分析無法診斷而能用胎兒血漿或血細(xì)胞進(jìn)行生化檢測的疾病、或在錯過絨毛和羊水取樣時機(jī)時進(jìn)行。 臍帶穿刺術(shù)（cordocentesis） 孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞分離 孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞是一項(xiàng)非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷技術(shù)，并易于被孕婦接受。孕婦外周血中的胎兒細(xì)胞至少有3種，

15、即滋養(yǎng)葉細(xì)胞、有核紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。 目前許多學(xué)者都致力于解決胎兒細(xì)胞的識別、富集和如何排除母血的“污染”等。此方法將以簡便、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)在遺傳病的預(yù)防中發(fā)揮作用。 孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞分離四、植入前診斷（preimplantation diagnosis） 植入前診斷是利用微操作技術(shù)和DNA擴(kuò)增技術(shù)對胚泡植入前進(jìn)行檢測。 植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantation genetic diagnosis,PGD） 是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對體外受精的胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，確定正常后再將胚胎植入子宮。 四、植入前診斷（preimplantation diagno 獲得植入前胚胎的主要方法：

16、子宮沖洗 體外授精 植入前診斷的基本技術(shù)： （1） 胚胎組織微活檢： 目前多采用在68個細(xì)胞期，通過顯微操作技術(shù)取出12個細(xì)胞進(jìn)行染色體或基因的檢查。 獲得植入前胚胎的主要方法： （2） PCR技術(shù)： 單細(xì)胞PCR技術(shù)主要用于單基因遺傳病的診斷。采用引物延伸預(yù)擴(kuò)增技術(shù)，以隨機(jī)引物對單個細(xì)胞基因組進(jìn)行全基因擴(kuò)增，使單個細(xì)胞的多位點(diǎn)分析成為可能。熒光PCR也是常用的技術(shù)。 （3） FISH技術(shù)： 該技術(shù)利用熒光標(biāo)記的特定探針與固定在玻片上的卵裂球細(xì)胞核進(jìn)行雜交，在顯微鏡下鑒定染色體是否存在單體、三體等異常。 （2） PCR技術(shù)：第四節(jié) 基因診斷 （gene diagnosis） 采用分子生物學(xué)方法

17、在DNA水平或RNA水平對某一基因進(jìn)行分析，從而對特定的疾病進(jìn)行診斷。 第四節(jié) 基因診斷 臍帶血、孕婦外周血中胎兒細(xì)胞來發(fā)展十分迅速的大規(guī)模、PKU家系PAH基因STR連鎖分析DMD基因缺失的多重PCR系譜分析對這類疾病的分析非常有用，分析時要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。Klinefelter綜合征植入前診斷是利用微操作技術(shù)和DNA擴(kuò)增技術(shù)對胚泡植入前進(jìn)行檢測。ASO HybridizationNormal probeRFLP、VNTR、SSCP、AMPFLP等技術(shù)均可用

18、于連鎖分析。一般在孕中期（妊娠18周）進(jìn)行。此外還包括反應(yīng)底物、中間產(chǎn)物或終產(chǎn)物和受體的結(jié)合能力檢查。Western印跡雜交（molecular hybridization）產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrauterine diagnosis）是對胚胎或胎兒在出生前是否患有某種遺傳病或先天畸形作出準(zhǔn)確的診斷。 基因診斷的特點(diǎn): (1)針對直接病因診斷。 (2)特異性強(qiáng)，靈敏度高。 (3)適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣，因基因探針可為任何來源、任何種類，其探針序列可為未知或已知，待檢測的目的基因可為一個特定基因或基因組合。 (4)目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無組織和發(fā)育特異性，因此可用于檢測一些具有組織表

19、達(dá)特異性和分化階段表達(dá)特異性的基因。臍帶血、孕婦外周血中胎兒細(xì)胞 基因診斷的特點(diǎn): 基因診斷的樣本： 可以是任何有核細(xì)胞，包括： (1)外周血白細(xì)胞、口腔黏膜細(xì)胞。 (2)活檢標(biāo)本、石蠟包埋的組織塊。 (3)沉淀細(xì)胞（唾液、痰液、尿液）。 (4)羊水細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、進(jìn)入母體循環(huán)的胎兒細(xì)胞。 基因診斷的樣本： （一）基因診斷的基本技術(shù) 分子雜交技術(shù) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù) DNA序列測定技術(shù) 基因芯片技術(shù) （一）基因診斷的基本技術(shù) 1.分子雜交技術(shù) （molecular hybridization） 原理：雙鏈DNA在加熱到一定溫度以上或在堿性溶液中會變性成為兩條單鏈，互補(bǔ)的兩條DNA單鏈

20、在一定條件下結(jié)合成為雙鏈。即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。 1.分子雜交技術(shù) 因此 ，當(dāng)一段已知基因的核酸序列作為探針，與變性后的單鏈DNA接觸時，如果兩者的堿基完全配對，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列。 因此 ，當(dāng)一段已知基因的核酸序列作為探針，與變 基因探針（probe）： 是一段帶有標(biāo)記的，與待測基因有關(guān)的核苷酸序列。 探針種類: 基因組探針（genomic probe） cDNA探針（cDNA probe） 寡核苷酸探針（oligonucleotide

21、probe） 基因探針（probe）：雜交方法： 斑點(diǎn)雜交 Southern雜交 Northern雜交 Western印跡雜交 原位雜交 寡核苷酸探針雜交雜交方法： 2.聚合酶鏈反應(yīng) （polymerase chain reaction，PCR） 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)是在體外迅速的選擇擴(kuò)增特定的靶DNA的方法。又稱體外DNA克隆技術(shù)。 PCR的原理： （1）按靶DNA片段的5和3端的堿基順序各合成兩條引物（長約20個堿基的寡核苷酸）； （2）將待測DNA變性后，加入四種單核苷 （dNTP），引物和耐熱DNA聚合酶（Taq 酶）； 2.聚合酶鏈反應(yīng) （3）反應(yīng)液進(jìn)行熱循環(huán)，每一周期經(jīng)過變性（9295

22、），復(fù)性（4060）和延伸（6572）三個階段產(chǎn)生倍增的DNA。一般進(jìn)行2040個周期。PCR原理示意圖 （3）反應(yīng)液進(jìn)行熱循環(huán)，每一周期經(jīng)過變性（9295 Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，Sanger建立了DNA測序的酶學(xué)方法。 最新的DNA自動測序法以不同熒光色素標(biāo)記的四種不同脫氧核苷酸為原料進(jìn)行酶促合成反應(yīng)，經(jīng)過凝膠電泳分離，應(yīng)用激光分析及計(jì)算機(jī)處理就能直接讀出堿基順序。極大地推進(jìn)了生命科學(xué)的發(fā)展和人類基因組計(jì)劃的進(jìn)程，而且測序的長度可以達(dá)到1000bp以上。測序技術(shù)( DNA sequencing） Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，San DNA測序（DNA

23、 Sequencing)是檢測未知突變和已知突變基因的最基本和最重要的實(shí)驗(yàn)手段。 DNA熒光自動測序法示意圖 DNA測序（DNA Sequencing)是檢測未知 基因芯片技術(shù)是近年來發(fā)展十分迅速的大規(guī)模、高通量分子檢測技術(shù)。其基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定于支持物上，形成矩陣點(diǎn)?，F(xiàn)在的技術(shù)可以做到在1cm2上排列成千上萬個“點(diǎn)”。 4.基因芯片技術(shù)(gene chip) 基因芯片技術(shù)是近年 4.基因芯片技術(shù)(gene 樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子，然后按堿基配對原理進(jìn)行雜交，再通過熒光檢測系統(tǒng)等

24、對芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上的熒光信號做出比較和檢測，得出所要的信息?；蛐酒ぷ髁鞒淌疽鈭D 樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入 （二）基因診斷的途經(jīng) 1.直接診斷 檢測突變基因 直接診斷是直接檢測致病突變的基因。它通常使用基因本身或緊鄰的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì)，這稱為直接基因診斷，它適用已知基因異常的疾病。 （二）基因診斷的途經(jīng) 當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,或者對致病基因以及分子機(jī)制已完全了解,或者對致病基因以及分子機(jī)制部分了解但已知其中規(guī)律,可應(yīng)用此途徑。 當(dāng)致病基因的某種突變類型

25、與發(fā)病有直接的因果關(guān)系, 2. 間接診斷 基因連鎖分析 當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知或突變類型較多時；或致病基因本身尚屬未知時，但被檢測基因有緊密連鎖的DNA多態(tài)標(biāo)記，可以通過對受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。 2. 間接診斷 基因連鎖分析 連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性位，特別是基因突變部位或緊鄰的多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMPFLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。 連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性 （三）基因診斷的方法選擇： 各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些

26、異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。根據(jù)對基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法。 （三）基因診斷的方法選擇： 各種遺傳病的基因異常是Mutation probe如果能在雜合子個體生育之前或出現(xiàn)癥狀之前就作出診斷，可以避免他將致病基因傳遞給后代，減少遺傳病的發(fā)病率。熒光PCR也是常用的技術(shù)。2夫婦之一有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常者；該方法特別適用于分子病、先天性代謝缺陷、免疫缺陷等遺傳病的檢查。(3)適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣，因基因探針可為任何來源、任何種類，其探針序列可為未知或已知，待檢測的目的基因可為一個特定基因或基因組合。（pre-symptomatic diagnosis）PAH基因Sph

27、切點(diǎn) Sph酶對PKU的RFLP分析也須詢問清楚，記錄在系譜中。(1)基因組印記植入前遺傳學(xué)診斷(4)羊水細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、進(jìn)入母體循環(huán)的胎兒細(xì)胞。如果能在雜合子個體生育之前或出現(xiàn)癥狀之前就作出診斷，可以避免他將致病基因傳遞給后代，減少遺傳病的發(fā)病率。PCR的原理：(symptomatic diagnosis)cDNA探針（cDNA probe）（chorionic villus aspiration sampling, CVS）52外顯子區(qū)段缺失；子宮沖洗 遺傳的基因診斷方法基因異常 方法 探針、引物或限制酶基因缺失 基因組DNA印跡雜交 缺失基因的探針 PCR擴(kuò)增 引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)

28、點(diǎn)突變 RFLP分析 突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶 ASO雜交 正常和異常的ASO探針 PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析 引物包括突變部位 （RFLP、SSCP、DGGE）基因已知 基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性 基因內(nèi)或旁但異常不明 （RFLP、 SSCP、AMP-FLP） 側(cè)序列探針或引物 連鎖分析 基因未知 與疾病連鎖的多態(tài)性， 與疾病連鎖的多態(tài) 如SSCP、AMP-FLP連鎖分析， 位點(diǎn)探針或引物 RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析Mutation probe （三）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用 1.對單基因病的基因診斷 （1）點(diǎn)突變型遺傳病的基因診斷 鐮狀細(xì)胞性貧血的基因診斷 （三）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用

29、 鐮狀細(xì)鐮狀細(xì)胞貧血(HbS)： 第57位密碼子Mst： CCTNAGGA： CCTGAGGAGS： CCTGTGGAGAA AS SS 1.2 Kb 0.2Kb1.40 Kb1.20 Kb0.20 Kb鐮狀細(xì)胞貧血(HbS)： 第57位密碼子MstASO HybridizationPKU, ARNormal probeMutation probeASO HybridizationPKU, ARNormal 無過氧化氫酶血癥（acatalasemia) 是一種常染色體隱性遺傳病，患者過氧化氫酶活性只有正常人的0.2%0.4%，雜合體血液中過氧化氫酶活性則處于中間水平。過氧化氫酶基因由13個外顯

30、子和12個內(nèi)含子組成。應(yīng)用32P標(biāo)記PCR反應(yīng)中底物方法，擴(kuò)增第4個外顯子和內(nèi)含子附近的203bp片段，應(yīng)用SSCP法可清楚地判斷患者和雜合體。 PCR-SSCP法檢測無過氧化氫酶血癥 無過氧化氫酶血癥（acatalasemia) PCaa/aa aa/- aa/a- a-/- -/-14kb10kb10kb 4kbBamH IBamH I左側(cè)：16號染色體上攜有數(shù)目不同的基因右側(cè)：a基因探針雜交的結(jié)果1) -地貧基因缺失的診斷正常貧血癥狀攜帶者HbH（2）基因缺失型遺傳病的診斷aa/aa aa/- aa/a- a-/- 2) DMDBMD的缺失型診斷： DMD基因缺失的多重PCRPrn.啟動子；1.正常，九條帶；2.基因全缺失；3.啟動子區(qū)缺失；4.第3外顯子缺失；5.第13外