紅細(xì)胞血型檢測(cè)12課件

1、輸 血 前 檢 查 輸血前檢查分為兩個(gè)方面: 對(duì)供血者進(jìn)行檢查 對(duì)實(shí)際接受輸血的患者（受血者）進(jìn)行的 檢查輸 血 前 檢 查 輸血前檢查分為兩個(gè)方面:主要內(nèi)容輸血前免疫血液學(xué)檢查鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)酶處理試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)吸收放散試驗(yàn)?zāi)种圃囼?yàn)主要內(nèi)容輸血前免疫血液學(xué)檢查第一節(jié) 輸血前免疫血液學(xué)檢查一、受血者標(biāo)本處理二、受血者和供血者ABO和Rh定型三、不規(guī)則抗體的篩選和鑒定四、交叉配血試驗(yàn)五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的規(guī)范化報(bào)告第一節(jié) 輸血前免疫血液學(xué)檢查一、受血者標(biāo)本處理輸血前檢查的主要程序受血者的病史和血樣本等的檢查、核對(duì)及處理。ABO和Rh定型交叉配血試驗(yàn)標(biāo)簽和發(fā)

2、血輸血前檢查的主要程序受血者的病史和血樣本等的檢查、核對(duì)及受血者病史和血樣的檢查、核對(duì)及處理 輸血申請(qǐng)單 血標(biāo)本要求受血者血樣本受血者病史和血樣的檢查、核對(duì)及處理受血者血樣本為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？ 有時(shí)血漿中可形成小的纖維蛋白凝塊使認(rèn)讀困難 一些通過(guò)補(bǔ)體激活才能反應(yīng)的抗體，用血漿不能檢出(血漿中抗凝劑能螯和鈣并阻止補(bǔ)體激活)為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？ 有時(shí)血漿中可形成小的纖維ABO正反定型不符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)重新采集獻(xiàn)血者與受血者血液標(biāo)本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞分析O型篩選細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果ABO正反定型不

3、符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)復(fù)檢正定型血型結(jié)果的準(zhǔn)確性，糾正漏檢、誤報(bào)亞型能夠糾正因疾病原因造成的紅細(xì)胞抗原減弱造成的血型錯(cuò)誤排除獲得性抗原（如類B抗原）和冷凝集現(xiàn)象對(duì)紅細(xì)胞定型的干擾不規(guī)則抗體ABO正反定型的臨床意義復(fù)檢正定型血型結(jié)果的準(zhǔn)確性，糾正漏檢、誤報(bào)ABO正反定型的臨錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)溶血現(xiàn)象未能識(shí)別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤血清異常紅細(xì)胞致敏近期輸血疾病導(dǎo)致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進(jìn)行大量血漿置換治療錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一(1) 假凝集（串錢(qián)狀凝集）較多見(jiàn)

4、，本身不是抗原與抗體的反應(yīng)。原因： A 某些肝病、腎病等所致的纖維蛋白原及球蛋白的增高。 B 玻片法實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)，水分蒸發(fā)。 C 右旋糖酐、輸注某些造影劑等處理：用生理鹽水洗滌多次，重新配制懸液。(1) 假凝集（串錢(qián)狀凝集）(2) 冷凝集（自身凝集） 冷凝集素正常人血清中存在，但效價(jià)不高，1：16以下，室溫不反應(yīng)。冷凝集素綜合征是免疫球蛋白M(IgM)抗體引起的自體免疫性疾病，又叫“冷血凝集素病”或“冷凝集素病”。原因：（1）自身免疫性溶血性貧血、病毒性肺炎等（2）室溫過(guò)低 處理：37生理鹽水洗滌，并在37做凝集實(shí)驗(yàn)。(2) 冷凝集（自身凝集） 高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理1 臨床資料

5、患者，女，56歲，貧血，Hb30g/L，該患皮膚蒼白，呈極度貧血貌，需輸血治療，血型鑒定為AB型，但與AB型交叉配血分歧。2 ABO定型重新血型鑒定，正定型為AB型，反定型ABO均凝集，該患者無(wú)輸血史，考慮可能為冷凝集素所致。 逐將做血型之玻片置于37溫箱，10min后觀察可見(jiàn)：抗B側(cè)凝集顆粒變小，抗A側(cè)不變；升溫至45，抗B側(cè)凝集消失，抗A測(cè)不變。取出室溫1min后，抗B側(cè)復(fù)又出現(xiàn)凝集，初步定型為A型；用37鹽水將患者RBC洗滌3次，做正定型為A型；將洗滌RBC 1份加患者血清內(nèi)的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也為A型。高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理1 臨床資料 3 血清冷

6、凝集效價(jià)測(cè)定患者不同稀釋濃度的血清與洗滌后的O型RBC做玻片凝集試驗(yàn)，室溫時(shí)測(cè)得冷凝集效價(jià)為1:2000。4 配血及輸血用A型血按常規(guī)方法做鹽水配血試驗(yàn)，主側(cè)出現(xiàn)凝集次側(cè)因該患RBC自家凝集成顆粒狀，不能進(jìn)行。用37鹽水洗滌后的RBC配成0.05L/L的RBC懸液與A型血清做次側(cè)交叉，無(wú)凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清與A型RBC做次側(cè)交叉，無(wú)凝集及溶血。交叉顯示可以輸血，考慮該患冷凝集素效價(jià)太高，要求臨床保溫輸血，室溫控制在2530。輸A型血200ml，無(wú)不良反應(yīng)。后按同樣方法兩次繼續(xù)輸A型血800ml ?；颊呔鶡o(wú)不良反應(yīng)。因本地缺免疫抑制藥，患者自行出院往北京，在中日友好醫(yī)院診斷為冷凝集

7、素引起的免疫性溶血性貧血。經(jīng)北京紅 十字中心血站鑒定冷凝集素為抗I。 3 血清冷凝集效價(jià)測(cè)定患者不同稀釋濃度的血清5 討論多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一般不超過(guò)1:16，且在20時(shí)凝集即可消失。本例患者由于病理變化，血清中出現(xiàn)高效價(jià)冷凝集素抗-I，在37還能與自身RBC發(fā)生明顯凝集，使血型鑒定出現(xiàn)誤判，并影響交叉配血。 碰到此種情況應(yīng)該留意：血型鑒定時(shí)先用37鹽水洗滌被檢RBC 23次，以消除冷凝集素造成的鑒定錯(cuò)誤。交叉配血時(shí)，次側(cè)RBC也應(yīng)該用37鹽水洗3次，主側(cè)血清先做自家吸收試驗(yàn)吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困難。冷凝集素效價(jià)太高時(shí)，提高室溫2530下反應(yīng)是行之有效的

8、方法。5 討論多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一(3)類B 現(xiàn)象：原因： 被腸道桿菌感染的病人（O、A型），其紅細(xì)胞獲得一種“類B”抗原（變成B、AB型），但血清中含有正常的抗B?，F(xiàn)象： 凝集較疏松，游離RBC多，不受溫度的影響，唾液中無(wú)B型血型物質(zhì)，與AB血清不凝集，只與抗B反應(yīng)病情好轉(zhuǎn)，類B消失。處理：用唾液定血型 吸收放散試驗(yàn)（吸附的抗體通過(guò)加熱等從RBC上釋放出來(lái)） (3)類B 現(xiàn)象：RhD定型及其常見(jiàn)問(wèn)題1.Rh定型RhD定型，試管法最經(jīng)典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認(rèn)IgM抗-D陰性三個(gè)廠家IgG抗-D進(jìn)行確認(rèn)抗人球蛋白法進(jìn)行確認(rèn)三種IgG抗-D試劑均為陰性，報(bào)Rh

9、D陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽(yáng)性，報(bào)弱DRhD定型及其常見(jiàn)問(wèn)題1.Rh定型三個(gè)廠家IgG抗-D進(jìn)行確三. 交叉配血（Crossmatching）目的：驗(yàn)證血型、發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體 輸血前必做，是安全輸血的根本保證。主側(cè)：檢測(cè)病人血清中有無(wú)破壞供者RBC的 抗體存在。（受血者血清+供血者RBC）次側(cè)：檢測(cè)供者血清中有無(wú)破壞病人RBC的 抗體存在。（供血者血清+受血者RBC ）受血者血清對(duì)受血者紅細(xì)胞, 稱為自身對(duì)照三. 交叉配血（Crossmatching）受血者血清對(duì)交叉配血的主次側(cè)交叉配血的主次側(cè)接收申請(qǐng)單和血標(biāo)本 核對(duì)無(wú)誤（如有錯(cuò)誤與醫(yī)生/護(hù)士聯(lián)系）進(jìn)行交叉配血 相合結(jié)果輸入微機(jī)不相

10、合打印發(fā)血單血液中心交叉配血工作流程接收申請(qǐng)單和血標(biāo)本 核對(duì)無(wú)誤進(jìn)行交叉配交叉配血的要求交叉配血應(yīng)在37C孵育，除了鹽水介質(zhì)法外，至少要有抗球蛋白試驗(yàn)。主側(cè)交配絕對(duì)不可以有凝集和溶血現(xiàn)象，次側(cè)交配，在允許條件下可以有凝集現(xiàn)象，但不可以溶血。交叉配血的要求交叉配血應(yīng)在37C孵育，除了鹽水介質(zhì)法外，至少試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)酶介質(zhì)試驗(yàn) 菠蘿酶，無(wú)花果酶，木瓜酶抗球蛋白介質(zhì)試驗(yàn) 經(jīng)典方法、加LISS（低離子介質(zhì)溶液）的方法聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)微柱凝集試驗(yàn)試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見(jiàn)的凝集。主要檢測(cè)IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）?？笰抗

11、B特異性IgG類抗體有時(shí)可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。 鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：422臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽(yáng)性，并在37也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37無(wú)活性者臨床意義不大。 鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試驗(yàn)記錄4+（+）：一個(gè)大凝集塊，背景透明，無(wú)游離細(xì)胞3+（+）：數(shù)個(gè)大凝集塊，背景透明，無(wú)游離細(xì)胞2+（+）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細(xì)胞1+（+）：

12、細(xì)小的凝集塊，背景渾濁W+（）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果0（-）：無(wú)凝集，無(wú)溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血 試驗(yàn)記錄試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)結(jié)果分析：陽(yáng)性-凝集或溶血 陰性-無(wú)凝集或溶血先觀察有無(wú)溶血、再觀察有無(wú)凝集注意事項(xiàng)：細(xì)胞濃度25%（嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作）、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱凝集分析優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快捷、直觀。缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)結(jié)果分析：陽(yáng)性-凝集或溶血 酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。 蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少

13、紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使IgG分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無(wú)花果酶。方法：期法-酶液直接加入血清和細(xì)胞的混合物中。 期法-用酶處理細(xì)胞再與血清進(jìn)行反應(yīng)。兩種方法比較：期法 操作方便 期法 敏感酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰優(yōu)點(diǎn)： 成本低，快速。 缺點(diǎn)：（1）破壞某些抗原（如MN，Duffy） （2）酶批次不同，活性不同，難以標(biāo) 準(zhǔn)化。 （3）需確定最適孵育時(shí)間，處理過(guò)度 則會(huì)降解IgG。 （4）假陽(yáng)性高。 應(yīng)用：現(xiàn)已少用，主要用于ABO

14、新生兒溶血病 檢查，Rh抗體篩檢。酶介質(zhì)法優(yōu)點(diǎn)： 成本低，快速。酶介質(zhì)法用于測(cè)定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。用不完全抗體測(cè)定紅細(xì)胞血型，如Rh血型。交叉配血。3抗人球蛋白法：又稱Coombs試驗(yàn)。是最早用于檢查不完全抗體的方法。主要用于檢測(cè)IgG、IgA等抗體參與的抗原-抗體反應(yīng)，也可測(cè)定補(bǔ)體組分C3、C4片段參與的免疫反應(yīng)用于測(cè)定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。3抗人球蛋白法：又稱第一階段致敏階段 第二階段 真凝集階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全抗體致敏；間接法可用于鑒定Rh血型及血清中是否存在不完全抗體第一階段 第二階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全抗球蛋白試劑不純假

15、陽(yáng)性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝標(biāo)本漏加試劑離心過(guò)度紅細(xì)胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過(guò)程不連續(xù)離心過(guò)度紅細(xì)胞過(guò)多或過(guò)少血清濃度過(guò)大孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗(yàn)鹽水保存不當(dāng)紅細(xì)胞直抗陽(yáng)性抗球蛋白試劑不純假陽(yáng)性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝 優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)典，特異（金標(biāo)準(zhǔn)），可測(cè)補(bǔ)體致 敏，受冷凝集素影響相對(duì)少。 缺點(diǎn)：煩瑣（需兩次三洗），孵育時(shí)間長(zhǎng)，不適用于急診和血庫(kù)存的大批量工作。且易受殘留血清蛋白影響。 注意事項(xiàng)：每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽(yáng)性對(duì)照；實(shí)驗(yàn)器材清潔；注意抗原抗體比例、孵育時(shí)間、溫度等條件，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作；排除自身抗體干擾抗人球蛋白法抗人球蛋白法低離

16、子聚凝胺技術(shù)原理 聚凝胺（Polybrene），一種高價(jià)離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細(xì)胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。低離子聚凝胺技術(shù)原理 1 紅細(xì)胞間有一定間距2 加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4 紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1 紅細(xì)胞間有一定間距聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸1 紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)

17、胞結(jié)合使其特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4 由于不完全抗體的結(jié)合，紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體1 紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之優(yōu)點(diǎn)：快速，方便，適于急診，試劑易保存， 可測(cè)IgG、 IgM。缺點(diǎn)：易受冷凝集素和肝素等多價(jià)陰離子的干擾，且作效價(jià)測(cè)定時(shí)易造成溶血；不能檢測(cè)補(bǔ)體致敏。對(duì)無(wú)唾液酸的紅細(xì)胞無(wú)作用（多凝集紅細(xì)胞）。注意事項(xiàng)：抗原抗體比例適當(dāng)；實(shí)驗(yàn)步驟過(guò)程中聚凝胺應(yīng)去除干凈。 聚凝胺法聚凝胺法微柱凝膠試驗(yàn) 原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過(guò)篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過(guò)凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過(guò)凝膠的間隙，沉積到底部。微柱凝膠試驗(yàn) 原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化 結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研室 結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研優(yōu)點(diǎn)：快速（孵育時(shí)間可少到5min）、方便、敏感（較凝聚胺法和抗人球蛋白法敏感）、特異。 結(jié)果可保存 ，操作技術(shù)要求較低。缺點(diǎn)：微柱凝膠易變性，需避光，和防止干裂。成本較高。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作；患者自身抗體干擾；注意加樣順序；配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。凝膠微柱法凝膠微柱法