第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識課件

1、第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)2022/10/8第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)2022/10本章內(nèi)容概要：第一節(jié) 實驗用純水第二節(jié) 常用臨床實驗室器材（自學(xué)/復(fù)習(xí)）第三節(jié) 生物化學(xué)檢驗試劑概述第四節(jié) 參考范圍和醫(yī)學(xué)決定水平第五節(jié) 實驗方法與參考物質(zhì)概述第六節(jié) 實驗方法的選擇與評價第七節(jié) 實驗的臨床診斷性能評價第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)2本章內(nèi)容概要：第一節(jié) 實驗用純水第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本教學(xué)目的和要求：1、掌握診斷試劑盒的選擇與性能指標(biāo)評價，實驗方法與參考物質(zhì)的分級，實驗誤差、方法學(xué)評價指

2、標(biāo)以及五種方法學(xué)評價試驗的目的、原理、操作、計算及注意事項。 2、熟悉實驗用純水的等級、制備和純度檢查，化學(xué)試劑的選擇、保存與配制，參考范圍和醫(yī)學(xué)決定水平的基本概念，實驗方法與參考物質(zhì)的基本概念，實驗方法的正確選擇，診斷試驗的性能評價。3、了解參考范圍的建立，溯源性、測量標(biāo)準(zhǔn)、互通性的概念，方法性能判斷。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)3教學(xué)目的和要求：1、掌握診斷試劑盒的選擇與性能指標(biāo)評價，實驗第一節(jié) 實驗用純水天然水 自來水 實驗用純水 經(jīng)簡單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機鹽 經(jīng)蒸餾、離子交換、活性炭吸附、超濾等處理，除去雜質(zhì) (懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì))第3

3、章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)4第一節(jié) 實驗用純水天然水 自來水 實驗用純水 經(jīng)簡單的物實驗室用水等級純水的制備方法水的純度檢查 內(nèi)容概括：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)5實驗室用水等級內(nèi)容概括：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北一、實驗室用水等級表2-1 美國NCCLS等級純水的規(guī)定及用途(1985)級 別級級級pH未定未定5.08.0電阻率(Mcm, 25,最大量)102.01.0硅(mg SiO2/L,最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌落數(shù)）10103未定硅（mgSiO2/L，最大量）0.050.11.0微粒0.2m微孔膜過濾未定未定有機物

4、質(zhì)活性碳過濾未定未定用途原子吸收，火焰光度，熒光，電解質(zhì)，酶，高效層析，電泳，參比液，緩沖液。一般實驗室檢驗，器皿沖洗。器皿洗滌，要求不高的定性試驗。美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS） 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)6一、實驗室用水等級表2-1 美國NCCLS等級純水的規(guī)定及 表2-2 中國國家驗室用水GB6682-2002標(biāo)準(zhǔn)名稱一級二級三級pH范圍(25)（未定）5.07.5電導(dǎo)率（25）ms/m 0.010.100.50電阻率（25，Mcm）1010.2可氧化

5、物質(zhì)mg/L （以O(shè)計）0.080.40吸光度（254nm，1cm光程） 0.0010.01蒸發(fā)殘渣（10525）mg/L 1.02.0可溶性硅（以SiO2計）mg/L0.010.02第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)7 表2-2 中國國家驗室用水GB6682-2002標(biāo)準(zhǔn)名二、純水的制備方法蒸餾法離子交換法其他方法：活性炭吸附法、電滲透法、超濾膜法混合純化系統(tǒng)第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)8二、純水的制備方法蒸餾法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北（一）蒸餾法優(yōu)點:設(shè)備簡單缺點:1、揮發(fā)性物質(zhì)難以去除，有離子干擾； 2、耗能大，耗水多； 3、需注意管道清潔純度：

6、 0.1Mcm（ 25）的蒸餾水（deionized water，DW） 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)9（一）蒸餾法優(yōu)點:設(shè)備簡單缺點:1、揮發(fā)性物質(zhì)難以去除，有離(二) 離子交換法定義：將自來水通過離子交換樹脂以除去水中雜質(zhì)離子，稱為離子交換法。 原理： 擴散 離子交換 吸附第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)10(二) 離子交換法定義：將自來水通過離子交換樹脂以除去水中雜氫型強酸性陽離子交換樹脂(RSO3H，R為母體)，其中的H+與Ca2+、Na+等金屬離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將鈣、鈉離子除去 氫氧型強堿性陰離子交換樹脂(RNOH，R為母體)，其中的OH-與水中的C

7、L-、碳酸根等陰離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將它們除去： 離子交換反應(yīng)第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)11氫型強酸性陽離子交換樹脂(RSO3H，R為母體)，其中優(yōu)點: 除了可去除雜質(zhì)離子以外兼具吸附電中性雜質(zhì)和過濾顆粒雜質(zhì)的作用。缺點: 純度： 5Mcm（ 25）以上的去離子水DW 2、由于離于交換為可逆反應(yīng)，故去離子水并非絕對不含離子 1、設(shè)備較復(fù)雜，成本較高；（目前實驗室應(yīng)用普遍）第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)12優(yōu)點:缺點:純度： 5Mcm（ 25）以上的去離子水D（三）其他方法： 在電場作用下水中各種陽離子趨向陰極，各種陰離子趨向陽極但陽離子只能透過陽膜而被相鄰的

8、陰膜所阻，陰離子與此相反這樣，在一些隔間內(nèi)集中了陽離子和陰離子，即形成含鹽多的濃水，在另一些隔間內(nèi)由于陰、陽離子的遷出降低了含鹽量形成淡水 電滲透法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)13（三）其他方法： 在電場作用下水中各種陽離子趨向1、不需要消耗化學(xué)藥品，設(shè)備簡單，操作方便。消耗電能，當(dāng)原水中鹽濃度過低時，溶液電阻大，用電滲析也不經(jīng)濟 純度:25時104105cm2、對于含鹽量高的海水等用此法比用離子交換法更為經(jīng)濟優(yōu)點:缺點: 電滲透法評價 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)14消耗電能，當(dāng)原水中鹽濃度過低時，溶液電阻大，用電滲純度:炭吸附法:活性炭是一種非常優(yōu)良的吸

9、附劑，它是利用木炭、各種果殼和優(yōu)質(zhì)煤等作為原料，通過物理和化學(xué)方法對原料進行破碎、過篩、催化劑活化、漂洗、烘干和篩選等一系列工序加工制造而成。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)15炭吸附法:活性炭是一種非常優(yōu)良的吸附劑，它是利用木炭、各1、設(shè)備簡單，操作方便。純水制備效率低,僅作為各種制備純水配套的一種措施. 2、它具有物理吸附和化學(xué)吸附的雙重特性,可以有選擇的吸附氣相、液相中的各種有機物質(zhì).優(yōu)點:缺點: 炭吸附法評價: 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)161、設(shè)備簡單，操作方便。純水制備效率低,僅作為各種制備純水配超濾膜法特點:僅能除去膠體細菌等大分子物質(zhì)和懸浮物,

10、所得水還需進一步純化.也是作為各種制備純水配套的一種措施.第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)17超濾膜法特點:僅能除去膠體細菌等大分子物質(zhì)和懸浮物,所得水還混合純化系統(tǒng)醫(yī)用超純水設(shè)備 實驗室純水系統(tǒng) 櫥下式全自動逆滲透純水機特點:多種方法混合純化,可獲得純度很高的二級甚至一級純水.電阻率大于2.0Mcm（25）。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)18混合純化系統(tǒng)醫(yī)用超純水設(shè)備 實驗室純水系統(tǒng) 櫥下式全自動逆滲三、水的純度檢查 水電阻率或電導(dǎo)率檢查 檢測殘留物含量 1.電阻率 工具：電導(dǎo)儀或兆歐表 2.可溶性硅限量試驗：以SiO2計。 3.細菌菌落計數(shù) 表示：電導(dǎo)率為每

11、cm長的電導(dǎo)(S/cm)，電導(dǎo)儀的表頭讀數(shù)單位為S/cm，因此電導(dǎo)儀讀數(shù)為1時，電阻率為1106cm =1Mcm步驟：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)19三、水的純度檢查 水電阻率或電導(dǎo)率檢查 檢測殘第二節(jié) 常用臨床實驗室器材一、微量加樣器的使用 微量加樣器又稱微量移液器、微量進樣器。其下端為可裝卸、可更換的尖管形移液嘴（吸頭），上方是控制采樣的推進按鈕。 有固定式和可調(diào)式兩種類型，規(guī)格有l(wèi)級、ml級。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)20第二節(jié) 常用臨床實驗室器材一、微量加樣器的使用 微量工作原理 微量加樣器利用排代原理由活塞的定程運動形成負壓吸入定量的液體，其吸

12、液量由活塞在活塞套內(nèi)移動的距離來確定，再按下按鈕使活塞向下移動，排出活塞腔內(nèi)的氣體而將吸頭內(nèi)的液體排出。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)21工作原理 微量加樣器利用排代原理由活塞的定程運動形成負1.選擇在移液范圍內(nèi)的加樣器，若為可調(diào)式則先將容量調(diào)節(jié)到所需的容量上。2.將吸頭套在加樣器的下端，輕輕轉(zhuǎn)動后牢固地套上，確保密封。3.正式使用前需連續(xù)按動數(shù)次（不吸液體），以保持腔內(nèi)外氣壓一致。4.用手垂直握住加樣器，拇指將按鈕壓至第一停點（第一檔位），并將吸頭浸入到液面下13mm，再緩慢地放松按鈕使之復(fù)位，等待12s后從液體中取出時拖靠掉吸頭外部殘液于被取出的容器內(nèi)壁中。注意避免吸頭與其

13、他任何東西碰撞。5.將吸頭移到加樣容器內(nèi)壁上，輕輕地將按鈕壓至第一停點將液體排出，等待12s，再把按鈕壓至第二停點（第二檔位），排盡全部液體后，吸頭應(yīng)沿容器壁向上滑動取出，此時拖靠吸頭內(nèi)部殘液于加樣容器內(nèi)壁中。再放松按鈕使之復(fù)位，卸下吸頭，完成一次操作過程。 操作方法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)22 操作方法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)第三節(jié) 生物化學(xué)檢驗試劑概述化學(xué)試劑的種類與保存化學(xué)試劑的配制試劑盒的選擇及評價 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)23第三節(jié) 生物化學(xué)檢驗試劑概述化學(xué)試劑的種類與保存第3章生 一、化學(xué)試劑的種類與保存 1.一級

14、優(yōu)級純（G.R）又稱保證試劑，綠色標(biāo)簽，該級別純度最高、雜質(zhì)含量最低，適用于科研和配制校準(zhǔn)溶液 . 2.二級 分析純（A.R）又稱分析試劑，紅色標(biāo)簽，該級別純度較高、雜質(zhì)含量較低，適用于定性和定量分析 . 3.三級 化學(xué)純（C.P），藍色標(biāo)簽，該級別質(zhì)量略低于二級品，適用于一般定量分析和定性試驗 .4.四級 實驗試劑（L.R），黃色標(biāo)簽，該級別試劑質(zhì)量較低、但比工業(yè)用高，適用于一般定性實驗 .普通生化檢驗 準(zhǔn)確的定量分析或配制校準(zhǔn)溶液 （一）化學(xué)試劑的種類 光譜純試劑（S.P）、層析純試劑（ch.p 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)24 一、化學(xué)試劑的種類與保存 1.一級 優(yōu)級純

15、（G.R）又（二）化學(xué)試劑的保存 保存原則:按液體、固體性狀分類，同時按序排列并作好登記，貯于干燥陰冷處。對于易燃、易揮發(fā)的藥品應(yīng)用蠟封瓶塞，貯于干燥陰冷處或冰箱內(nèi)。強酸、強堿試劑應(yīng)分別存放。劇毒藥品則應(yīng)由專人管理，每次使用應(yīng)記錄用量并做好登記。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)25（二）化學(xué)試劑的保存 保存原則:第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本二、化學(xué)試劑的配制 配制方法： 直接配制法：適用于校準(zhǔn)液和一般試劑的配制。 間接配制法：適用于不易恒重的固體試劑和含量不準(zhǔn)的液體試劑，即先配制大概濃度，然后再用校準(zhǔn)液標(biāo)定出準(zhǔn)確濃度。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)26二、化學(xué)

16、試劑的配制 配制方法： 直接配制法：適用于校準(zhǔn)液和一 固體試劑恒重后準(zhǔn)確稱量 液體試劑取量時選擇合適的量器準(zhǔn)確吸取要求的體積 試劑配制的溶劑一般為蒸餾水或去離子水，應(yīng)注意對蒸餾水的要求，若需其他溶劑則需注明清楚。 各類試劑分別溶解后按要求順序混合，最后稀釋至刻度。 配制好的試劑應(yīng)在其容器上注明名稱、濃度以及配制時間。 注意事項：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)27 固體試劑恒重后準(zhǔn)確稱量注意事項：第3章生物化學(xué)檢驗三、試劑盒的選擇及評價試劑盒定義：用于檢驗項目測定的含有使用說明書的所有配套試劑的組合。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)28三、試劑盒的選擇及評價試劑盒

17、定義：用于檢驗項目測定的含有使用（一）試劑盒的選擇生化檢驗商品試劑盒包裝類型：液體、干粉（片）、凍干 。 液體型試劑盒：單試劑或雙試劑 優(yōu)點：均一性好、瓶間差異較小、重復(fù)性好、不需復(fù)溶而可避免外源性水質(zhì)的影響、測定結(jié)果較為準(zhǔn)確等 不足：之處在于保存時間較短（特別是酶試劑）、不便于運輸 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)29（一）試劑盒的選擇生化檢驗商品試劑盒包裝類型：液體、干粉（片凍干型試劑：試劑溶解后先分裝成液體，再經(jīng)凍干處理而成 。干粉（片）型試劑：各種干燥的化學(xué)試劑經(jīng)粉碎混合（壓片）而成 優(yōu)點：易于保存。不足：分裝過程中的稱量以及加工過程中的混合均易造成瓶間差 ；復(fù)溶對水的質(zhì)

18、與量要求較高，同時復(fù)溶后的保存期較短、穩(wěn)定性較差，易造成浪費。 優(yōu)點：易于保存，各組份的混合相當(dāng)均勻不足：試劑中殘留的含水量不易準(zhǔn)確控制，易造成瓶間差；復(fù)溶對水的質(zhì)與量要求較高復(fù)溶后的保存期較短、穩(wěn)定性較差，易造成浪費。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)30凍干型試劑：試劑溶解后先分裝成液體，再經(jīng)凍干處理而成 。干 （二）試劑盒的評價 1.初步檢查 完整牢固的內(nèi)外包裝詳盡明確的說明書優(yōu)良的試劑外觀 2.性能指標(biāo)評價（根據(jù)國家衛(wèi)生部頒發(fā)的試劑盒質(zhì)量檢定標(biāo)準(zhǔn)） 準(zhǔn)確度精密度干擾線性范圍穩(wěn)定性反應(yīng)時間曲線 評價前校正儀器、量器，嚴(yán)格控制實驗條件，由熟練的技術(shù)人員操作 第3章生物化學(xué)檢驗實

19、驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)31 （二）試劑盒的評價 1.初步檢查 完整牢固的內(nèi)外包裝2.性穩(wěn)定性試驗 穩(wěn)定性試驗是指試劑盒的不同狀態(tài)在不同條件下貯存后所能保持測定準(zhǔn)確性的性能。狀態(tài)：原包裝及配制的工作液，條件：室溫、冰箱溫度，最終指標(biāo)：有效期（一般指標(biāo)為試劑空白和高值樣本吸光度的變化范圍等）。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)32穩(wěn)定性試驗 穩(wěn)定性試驗是指試劑盒的不同狀態(tài)在不同條件下第四節(jié) 參考范圍和醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)33第四節(jié) 參考范圍和醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍第3章生物化學(xué)檢驗實臨床生化檢驗項目的結(jié)果的臨床意義 正常還是異常，是否及

20、如何給予醫(yī)療措施，療效如何等 醫(yī)學(xué)決定水平 臨界值：確定病情、判斷療效和預(yù)后項目參考范圍區(qū)間：解釋結(jié)果正常與否第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)34臨床生化檢驗項目的結(jié)果的臨床意義 正常還是異常，是否及如何、參考范圍（一）參考范圍的建立（了解）建立包含內(nèi)容：參考個體參考總體參考抽樣組（參考樣本）參考值參考分布參考值范圍參考值區(qū)間等第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)35、參考范圍（一）參考范圍的建立（了解）建立包含內(nèi)容：參考個體(所有參考值剔除離群值并補充數(shù)據(jù)后在95的分布范圍) （參考范圍）第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)36(所有參考值剔除離群值并補充數(shù)

21、據(jù)后在95的分布范圍) （參建立的注意事項：參考抽樣組人數(shù)一般為100例以上； 離群值的判斷與處理； 項目偏高、偏低均屬異常的為雙側(cè)參考值區(qū)間，項目只偏低或只偏高屬異常的則取單側(cè)參考值區(qū)間，正態(tài)： x1.65s或x 1.65s；偏態(tài)：P5或P95的參考限；參考值范圍、參考值區(qū)間、參考范圍；參考范圍并非一成不變的，不能機械地進行比較。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)37建立的注意事項：參考抽樣組人數(shù)一般為100例以上； 離（二）參考范圍概念的正確使用正常值”、“正常值范圍”、“正常范圍（不合理） 參考范圍（IFCC推薦） “正常范圍”等使用不合理的原因在于： “正?！笔窍鄬Φ?。是

22、正常的人被判為 “不正?！薄２徽５娜吮患{入“正?！?。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)38（二）參考范圍概念的正確使用正常值”、“正常值范圍”、“正常二、醫(yī)學(xué)決定水平概念：是指臨床上按照不同病情給予不同處理的指標(biāo)閾值。MDL，DL（或用XC表示）可以用來除外或確定某一臨床情況或預(yù)告將會出現(xiàn)的某一生理變化現(xiàn)象。圖2-1 健康與疾病的理論分布健康人群疾病患者 DL1、DL2分別為低值、高值醫(yī)學(xué)決定水平，DL1左側(cè)的數(shù)值可除外B組疾??；DL2右側(cè)的數(shù)值可確定患者存在B組疾?。籇L1與DL2之間則表明健康與疾病存在交叉 參考范圍第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)39二、醫(yī)學(xué)決

23、定水平概念：是指臨床上按照不同病情給予不同處理的指特點：不同指標(biāo)的的數(shù)量和數(shù)值不同第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)40特點：不同指標(biāo)的的數(shù)量和數(shù)值不同第3章生物化學(xué)檢驗實驗血清清蛋白（Alb）有三個DL，分別是20g/L、35g/L、52g/L。其中20g/L表示肝病患者的預(yù)后嚴(yán)重；35g/L為檢查低清蛋白血癥的界值；52g/L則稍高于參考范圍上限，可除外許多假陽性。 醫(yī)學(xué)決定水平舉例：血清鈣有三個DL，分別是1.75mmol/L、2.75mmol/L、3.38mmol/L。1.75mmol/L作為低血鈣抽搐的第一個決定性水平值，等于或低于1.75mmol/L時，應(yīng)加做其他檢查以

24、明確病人發(fā)生抽搐的可能性，并采取預(yù)防措施；2.75mmol/L作為觀察副甲狀腺功能是否亢進的血清鈣低限值，等于或高于該值時，應(yīng)加做其他檢查以確診或排除原發(fā)性副甲亢的診斷；若大于3.38mmol/L則考慮為高血鈣昏迷，應(yīng)及時做出診斷，不得延誤 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)41血清清蛋白（Alb）有三個DL，分別是20g/L、35g/L第五節(jié) 實驗方法與參考物質(zhì)概述實驗方法（測量方法） 測量程序 下一級方法 下一級測量程序 常規(guī)樣品 產(chǎn)生 定值 校準(zhǔn) 評價同一級參考物質(zhì) 定值 下一級參考物質(zhì) 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)42第五節(jié) 實驗方法與參考物質(zhì)概述實驗方法

25、（測量方法） 測量決定性方法參考方法常規(guī)方法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)43決定性方法參考方法常規(guī)方法第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖一、實驗方法的分級 （一）相關(guān)基本概念（ISO定義）1測量方法(method of measurement)進行測量時所用的、按類別敘述的邏輯操作次序 2測量程序(measurement procedure)用于特定測量的、根據(jù)給定的測量方法具體敘述的一組操作 3真值與給定的特定量的定義一致的值稱為真值(true value)。 在實際工作中經(jīng)常使用的是約定真值 4約定真值對于真值具有適當(dāng)?shù)牟淮_定度，賦予特定量的值，有時它是通過約定而被采用的

26、值，稱為約定真值(conventional true value)，常用某量多次測量的平均值來確定約定真值 5不確定度(uncertainty)，評價方法的屬性，與測量結(jié)果的分散性相聯(lián)系的參數(shù) 測量結(jié)果的分散性 非重復(fù)測量因素造成的結(jié)果不確定性 +第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)44一、實驗方法的分級 （一）相關(guān)基本概念（ISO定義）1測量（二）實驗方法的分級分級依據(jù)：IFCC根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與精密度的不同。決定性方法 參考方法 常規(guī)方法 分為三級：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)45（二）實驗方法的分級分級依據(jù)：IFCC根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與1.決定性方法（d

27、efinitive method）定義： 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測定結(jié)果與“真值”最為接近。主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)461.決定性方法（definitive method）定義：主應(yīng)用： 由于技術(shù)要求太高，費用昂貴只用于產(chǎn)生一級測量程序、評價參考方法。不直接用于鑒定常規(guī)方法的準(zhǔn)確性儲氫重量分析儀一級參考物質(zhì)一級測量程序決定性方法產(chǎn)生 定值（注：一級測量程序適合純物質(zhì)的鑒定，不適合作生物基質(zhì)樣品的分析） 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基

28、本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)47應(yīng)用：儲氫重量分析儀一級參考物質(zhì)一級測量程序決定性方法產(chǎn)生 2.參考方法（reference method）定義： 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機構(gòu)（國家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團體和國際性組織等）頒布的方法。 這類方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復(fù)測定中的隨機誤差可以忽略不計。主要方法： 原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等分類：公認(rèn)的參考方法 推薦的參考方法 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)482.參考方法（reference method）定義：主要方應(yīng)用： 主

29、要用于鑒定常規(guī)方法，評價其偏差、干擾因素，并決定是否可以被接受；產(chǎn)生二級參考測量程序（適合于分析復(fù)雜生物樣品 ）用于鑒定二級參考物和為質(zhì)控物定值；用于商品試劑盒的質(zhì)量評價；參考方法可以產(chǎn)生出更低等級的廠家選定測量程序、廠家常務(wù)測量程序、用戶常規(guī)測量程序，分別為廠家工作校準(zhǔn)物、廠家產(chǎn)品校準(zhǔn)物和常規(guī)標(biāo)本定值。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)49應(yīng)用：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)49國際約定參考測量程序(international conventional reference measurement procedure) 它們得出的結(jié)果不能溯源至SI單位，但被廣泛承認(rèn)

30、。其可以為廠家工作校準(zhǔn)物定值 。應(yīng)用：一級、二級、國際約定參考測量程序可統(tǒng)稱為參考測量程序 定義： 比二級參考測量程序等級低的一類程序。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)50國際約定參考測量程序 它們得出的結(jié)果不能溯源至SI單位3常規(guī)方法（routine method） 定義： 應(yīng)具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度和特異度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，?jīng)濟實用，其性能指標(biāo)符合臨床或其它目的的需要。主要方法：溴甲酚綠法雙縮脲法J-G法等偏差已知方法偏差未知方法分類：根據(jù)準(zhǔn)確度確定與否 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)513常規(guī)方法（routine method） 定義：主要方法應(yīng)用：臨床常

31、規(guī)檢驗使用常規(guī)方法在作出評定以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法（recommended method ） 產(chǎn)生用戶常規(guī)測量程序 我國臨床檢驗中心推薦的常規(guī)方法是葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法是國際上推薦的參考方法。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)52應(yīng)用：我國臨床檢驗中心推薦的常規(guī)方法是葡萄糖氧化酶法,己糖激二、參考物質(zhì)的分級（一）相關(guān)基本概念（ISO定義） 1參考物質(zhì)：具有一種或幾種理化性質(zhì)已經(jīng)充分確定的特性，用以校準(zhǔn)儀器、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)，稱為參考物（reference materialRM）。國內(nèi)多稱為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)物、標(biāo)準(zhǔn)品。 2測量系統(tǒng)(m

32、easuring system)：完成一個項目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)物、測量程序、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計劃等的組合，又稱檢測系統(tǒng)。 3溯源性(traceability)、溯源鏈： 4參考實驗室參考測量實驗室的簡稱，是運行參考測量程序、提供有給定不確定度的測量結(jié)果的實驗室。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)53二、參考物質(zhì)的分級（一）相關(guān)基本概念（ISO定義） 1溯源性(traceability)、溯源鏈定義：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家或國際測量標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系起來的特性，稱為溯源性。其不間斷的比較鏈稱為溯源鏈。 特點

33、：溯源性是測量結(jié)果（包括測量標(biāo)準(zhǔn)即校準(zhǔn)物的測量結(jié)果）的屬性，不宜用于測量方法或測量程序。 了解第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)54溯源性(traceability)、溯源鏈定義：通過一條具有 溯源鏈的理想終點是SI單位的定義，但目前只有少部分檢驗項目可以溯源至SI單位 連續(xù)的比較鏈?zhǔn)侵赣嬃繉W(xué)級別由低到高的、交替出現(xiàn)的測量程序和校準(zhǔn)物。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)55 溯源鏈的理想終點是SI單位的定義，但目前只有少部分檢（二）參考物質(zhì)的分類與分級分類：按功能參考物質(zhì) 校準(zhǔn)物質(zhì)：又稱校準(zhǔn)物(calibrator)，是在校準(zhǔn)函數(shù)中其值被用作自變量的參考物質(zhì)(對測量系

34、統(tǒng)校準(zhǔn)或?qū)Σ牧腺x值)。 正確性質(zhì)控物質(zhì)：（國內(nèi)多稱為質(zhì)控物、質(zhì)控品、控制物）是用于評價一種測量系統(tǒng)的測量偏差的參考物質(zhì) 質(zhì)控物不能當(dāng)作校準(zhǔn)物使用，校準(zhǔn)物也不能當(dāng)作質(zhì)控物使用 定值血清非定值血清凍干質(zhì)控物（血清）混合血清液體質(zhì)控物（血清）按有無測定值按物理形狀第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)56（二）參考物質(zhì)的分類與分級分類：按功能參考物質(zhì) 校準(zhǔn)物質(zhì)：又 參考物質(zhì)可以是純的或混合的液體、固體（如鐠釹濾光片）或氣體（如標(biāo)準(zhǔn)的CO2氣體）。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)57 參考物質(zhì)可以是純的或混合的液體、固體（如鐠釹第3章生分級：根據(jù)參考物質(zhì)的校準(zhǔn)性質(zhì)分為：1一級參考

35、物質(zhì)（一級校準(zhǔn)物、原級參考物、一級標(biāo)準(zhǔn)品） 定義：是一種高度穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，所含的雜質(zhì)已經(jīng)定量。具有最高計量學(xué)特性的參考物質(zhì)，是測量單位的具體體現(xiàn)。其值由決定性方法產(chǎn)生的一級參考測量程序確定。 應(yīng)用：校準(zhǔn)二級參考測量程序以及為二級參考物質(zhì)定值。 一級參考物質(zhì)、二級參考物質(zhì)、工作校準(zhǔn)物三級第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)58分級：根據(jù)參考物質(zhì)的校準(zhǔn)性質(zhì)分為：1一級參考物質(zhì)（一級校準(zhǔn)（二級校準(zhǔn)物、次級參考物、二級標(biāo)準(zhǔn)品）2二級參考物質(zhì)定義：由二級參考測量程序定值，可以是與實際臨床樣品基質(zhì)相似的物質(zhì)。 應(yīng)用：校準(zhǔn)試劑盒廠家選定測量程序。在發(fā)達國家的二級參考物質(zhì)通常是有證參考物質(zhì)。 需

36、要強調(diào)的是，只有對于可溯源至SI單位的小分子檢驗項目，才可分為一級參考物質(zhì)和二級參考物質(zhì)。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)59（二級校準(zhǔn)物、次級參考物、二級標(biāo)準(zhǔn)品）2二級參考物質(zhì)定義：3工作校準(zhǔn)物(working calibrator)(一般參考物質(zhì)） 工作校準(zhǔn)物 分類：廠家工作校準(zhǔn)物廠家產(chǎn)品校準(zhǔn)物（主要）廠家選定測量程序廠家常務(wù)測量程序定值定值有證參考物質(zhì)和一般參考物質(zhì)的區(qū)別是前者有明確的溯源性和不確定度要求 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)603工作校準(zhǔn)物(working calibrator)(一般國際約定校準(zhǔn)物質(zhì) 定義：它們的量值不能溯源至SI單位，但屬于

37、國際約定的，因而也被廣泛承認(rèn) 。由國際約定參考測量程序定值。應(yīng)用：校準(zhǔn)廠家選定測量程序。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)61國際約定校準(zhǔn)物質(zhì) 定義：它們的量值不能溯源至SI單位，但屬于決定性方法參考方法常規(guī)方法國際約定校準(zhǔn)物質(zhì)國際約定參考測量程序第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)62決定性方法參考方法常規(guī)方法國際約定校準(zhǔn)物質(zhì)國際約定參考測量程第六節(jié) 實驗方法的選擇與評價 實驗方法為臨床提供準(zhǔn)確可靠的信息臨床生化檢驗分析保證應(yīng)用 實驗方法的選擇和評價第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)63第六節(jié) 實驗方法的選擇與評價 實驗誤差方法學(xué)評價指標(biāo)實驗方法選擇與評價

38、的原則、內(nèi)容和步驟方法學(xué)評價試驗 方法性能判斷 主要內(nèi)容：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)64實驗誤差主要內(nèi)容：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥、實驗誤差（一）概念實驗誤差簡稱誤差（error），指測量結(jié)果與被測量的真值的差異。（約定真值）周期性系統(tǒng)誤差 圖2-3誤差的分類 誤差系統(tǒng)誤差隨機誤差恒定系統(tǒng)誤差可變系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差復(fù)雜系統(tǒng)誤差已定系統(tǒng)誤差未定系統(tǒng)誤差（二）分類根據(jù)變化性質(zhì)不同，誤差可以分為系統(tǒng)誤差和隨機誤差兩大類 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)65、實驗誤差（一）概念實驗誤差簡稱誤差（error），指測量結(jié)1.系統(tǒng)誤差（systemati

39、c error，SE） 定義：相當(dāng)于不準(zhǔn)確度（inaccuracy）或偏倚（bias），指重復(fù)多次測量的結(jié)果均值（X）與真值（T）之差。 特點:具有單向性，而沒有隨機性，常有一定的大小和方向； 增加測定次數(shù)也不能消除 。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)661.系統(tǒng)誤差（systematic error，SE） 定義系統(tǒng)誤差分類：按變化規(guī)律 恒定系統(tǒng)誤差（CE）：由干擾物引起的大小恒定的誤差，該誤差與被測物濃度無關(guān)，而與干擾物濃度相關(guān)，因此有正負之分。能夠修正可變系統(tǒng)誤差： 比例系統(tǒng)誤差（PE）：周期性系統(tǒng)誤差復(fù)雜系統(tǒng)誤差指與被測物濃度的變化而成比例變化的誤差，能夠修正。 周期性出

40、現(xiàn)的誤差，能夠修正。 方向和大小未知或部分未知但通常可以估計其界限，其中的一部分可以在測試中加以消除。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)67系統(tǒng)誤差分類：按變化規(guī)律 恒定系統(tǒng)誤差（CE）：由干擾物引造成系統(tǒng)誤差的主要原因： 方法誤差：主要是由于方法分析性能存在固有缺陷所致如方法特異性不高、樣本中非測定成分的干擾物等； 儀器和試劑誤差：主要見于儀器波長未經(jīng)校正、量器不準(zhǔn)、試劑質(zhì)量不好等造成。 最嚴(yán)重，最難避免第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)68造成系統(tǒng)誤差的主要原因： 方法誤差：主要是由于方法分析性能2.隨機誤差（random error，RE） 定義：相當(dāng)于不精密度

41、（imprecision），或絕對偏差（di），指某次測量值（xi）與重復(fù)測量的結(jié)果均值（X）之差 特點:可正可負、大小不定 ； 分析步驟越多，造成這種誤差的機會就越多。增加測定次數(shù)，其算術(shù)均值接近于真值，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布 。不可避免、必然出現(xiàn)的，但可控制在一定范圍內(nèi)。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)692.隨機誤差（random error，RE） 定義：相當(dāng)于常用表示方法：最常見的：標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV） 造成隨機誤差的原因： 技術(shù)人員的操作不規(guī)范儀器、試劑、環(huán)境因素等條件的突然改變。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)70常用表示方法：最常見的：標(biāo)準(zhǔn)差（s）

42、、變異系數(shù)（CV） 造成 系統(tǒng)誤差 隨機誤差引起兩種誤差的原因是相對的第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)71 系統(tǒng)誤差 粗大誤差（parasitic error ）定義：指錯讀示值、使用有缺陷的計量器具、計量器具使用不正確、環(huán)境干擾等造成的大誤差，稱為粗大誤差，或稱為疏失誤差、過失誤差、粗差。處理：粗大誤差為離群值，要被剔除 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)72粗大誤差（parasitic error ）處理：粗大誤差為（三）誤差的表示方法1. 絕對誤差（偏差）：指某次測量值（xi）與真值（T）之差：絕對誤差xiT （單次）或bias xT（平行） 2. 相對誤差 指

43、絕對誤差占真值的百分比：描述準(zhǔn)確度描述準(zhǔn)確度描述精密度第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)73（三）誤差的表示方法1. 絕對誤差（偏差）：指某次測量值（x描述精密度1.標(biāo)準(zhǔn)差 即標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation，s)的簡稱。它是方差（s2）的平方根值。其單位與原始數(shù)據(jù)單位相同，測定次數(shù)一般要求20次（n=20）以上。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)74描述精密度1.標(biāo)準(zhǔn)差 即標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard dev2.變異系數(shù)(coefficient of variation，CV) 指樣本標(biāo)準(zhǔn)差與樣本均值的百分比，它主要用于比較各組數(shù)據(jù)間的離散度，沒有單位。

44、CV值越大，反映各組數(shù)據(jù)間的變異越大，精精密度越差。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)752.變異系數(shù)(coefficient of variatio4平均偏差：指各絕對偏差（di）取絕對值后的算術(shù)平均值 5相對偏差 指某次測量的絕對偏差占測定均值的百分比：6相對平均偏差 指平均偏差占測定均值的百分比：3.絕對偏差指某次測量值（xi）與重復(fù)測量的結(jié)果均值（X）之差 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)764平均偏差：指各絕對偏差（di）取絕對值后的算術(shù)平均值 5二、方法學(xué)評價指標(biāo)精密度準(zhǔn)確度靈敏度、檢測限與生物檢測限互通性、特異性與干擾線性范圍與測量范圍 第3章生物化學(xué)

45、檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)77二、方法學(xué)評價指標(biāo)精密度第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北（一）精密度定義：精密度(precision)表示對同一樣本在規(guī)定條件下多次重復(fù)測量結(jié)果之間或各次結(jié)果與均值之間的符合程度。它反映的是隨機誤差的大小 。表示方法：標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV）需注明重復(fù)次數(shù)（n）和均值（X） 分類及評價方法：普通化學(xué)分析方法的精密度 生化檢驗方法的精密度第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)78（一）精密度定義：精密度(precision)表示對同一樣本1.普通化學(xué)分析方法的精密度 （1）平行雙樣的相對偏差：一個樣本分成兩管同步平行測定 （2）一組測量值的標(biāo)

46、準(zhǔn)差：一個樣本分成n份同一批測定 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)791.普通化學(xué)分析方法的精密度 （1）平行雙樣的相對偏差：一個（3）重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（sr） 定義：是指同一觀測者在同一實驗室對同一樣本用同一儀器、同一試劑和校準(zhǔn)物（試劑盒）在盡可能短的時間內(nèi)進行多次重復(fù)測量結(jié)果的一致性（“五同一短”）。計算：在相同條件下，對某一樣本進行m輪n次的重復(fù)測定，各輪重復(fù)測量次數(shù)n相同，可計算重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（sr）表示重復(fù)性精密度： rr（i=1，2，3，.m）（i=1，2，3，.n）第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)80（3）重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（sr）計算：在相同條件下，對某一樣本進

47、行（4）再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差（sR）（多用于實驗室間的質(zhì)量評價 ）定義：在改變了的測量條件下，考察同一樣品的各測量結(jié)果的一致性（“一同”）。改變了的測量條件包括：觀測者、實驗室、時間、方法、儀器、試劑、校準(zhǔn)物等，也可以保持方法不變來考察。最后報告統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)時要詳細說明測量條件。 計算：假定對同一樣本在不同的實驗室測量，或者同一實驗室在不同時期測量，進行了m輪n次的重復(fù)測定，以sR表示再現(xiàn)性精密度（reproducibility precision，復(fù)現(xiàn)性精密度）計算各輪的標(biāo)準(zhǔn)差si；計算重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（sr）；計算室間（組間）標(biāo)準(zhǔn)差sL；計算再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差（sR）；（i=1，2，3，.m）R第3章生物化學(xué)

48、檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)81（4）再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差（sR）（多用于實驗室間的質(zhì)量評價 ）定義2. 生化檢驗方法的精密度 （1）常見的精密度試驗（重復(fù)性試驗） 1）操作選擇高低濃度的2個穩(wěn)定樣本（濃度水平數(shù)可以是3個，種類可以是混合血清、質(zhì)控物），做批內(nèi)和天間（即日間）重復(fù)測量。批內(nèi)：將2個評價樣本隨機插入病人樣本序列同時測定，一批各20次。天間：每天隨同病人樣本測定2個評價樣本各1次，各累積20次 2）計算將2個水平的樣本結(jié)果分別按批內(nèi)、天間排序，分別計算均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV） 3）不精密度的判斷標(biāo)準(zhǔn)推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)不精密度CV、天間不精密度CV應(yīng)分別小于允許分析誤差（E

49、A）的1/4、1/3 (EA ,CLIA88) 較低標(biāo)準(zhǔn)1.96s EA 其它標(biāo)準(zhǔn)：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)822. 生化檢驗方法的精密度 （1）常見的精密度試驗（重復(fù)性試第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)83第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)83（2）平行樣本測量的標(biāo)準(zhǔn)差：適用于平時做得很少的樣本，或很難保存的樣本，或者沒有合適的質(zhì)控物 1）操作隨機選取10份（n=10）高低濃度的新鮮病人樣本，每份平行做2次 2）計算計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。標(biāo)準(zhǔn)差的計算公式 3）評價該法受樣本例數(shù)n、濃度的影響很大，得到的標(biāo)準(zhǔn)差不穩(wěn)定。僅做了一批試驗，不能代表天間變異

50、 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)84（2）平行樣本測量的標(biāo)準(zhǔn)差：1）操作隨機選取10份（n=1（3）美國NCCLS的精密度評價方案（總精密度試驗）EP5-A 取高低濃度的2個穩(wěn)定樣本，每個樣本每天測定2批次（批間間隔不得少于2h），每次測定均作雙份，共做20天。因此一共是202280個結(jié)果。按EP5-A的公式計算批內(nèi)、批間、天間、總標(biāo)準(zhǔn)差，及相應(yīng)的變異系數(shù)。判斷：批內(nèi)、批間、總CV應(yīng)分別小于1/4EA、1/3EA、EA（EA來自于CLIA88 ）；同時做標(biāo)準(zhǔn)差估計和F檢驗. 操作與計算:第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)85（3）美國NCCLS的精密度評價方案（總精

51、密度試驗）EP5-（二）準(zhǔn)確度（accuracy）定義：指測定值與真值（T）之間的符合程度,采用多次反復(fù)測定的平均值（x）即約定真值來代表真值。 表示方法：1. 絕對誤差（偏差）：指某次測量值（xi）與真值（T）之差：絕對誤差xiT （單次）或bias xT（平行） 2. 偏差系數(shù)或相對誤差 指絕對誤差占真值的百分比：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)86（二）準(zhǔn)確度（accuracy）定義：指測定值與真值（T）之評價方法：即方法學(xué)評價試驗?；厥赵囼灨蓴_試驗方法比較試驗線性范圍試驗 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)87評價方法：即方法學(xué)評價試驗。回收試驗第3章生物化學(xué)

52、檢驗實驗室（三）靈敏度、檢測限與生物檢測限1.靈敏度（sensitivity，S） 定義：是指檢測信號變化量（y）與被測物變化量（x）的比值，又稱為敏感度 意義：反映儀器、試劑對樣本濃度變化的反應(yīng)能力 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)88（三）靈敏度、檢測限與生物檢測限1.靈敏度（sensitiv應(yīng)用： 吸收光譜分析中A-C曲線呈線性時的斜率（A/C）即為反應(yīng)的靈敏度，顯色反應(yīng)的顏色越深，則靈敏度越高。 特點： 吸光系數(shù)與靈敏度成正比，靈敏度有計量單位； 靈敏度的高低應(yīng)按照其樣品的醫(yī)學(xué)決定水平（Xc）來選擇合適的化學(xué)反應(yīng)，并不是靈敏度愈高愈好。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖

53、北中醫(yī)藥大學(xué)89應(yīng)用：特點：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)82. 檢測限（DL、D；或LOD） 相對檢測限（質(zhì)量）絕對檢測限（濃度）定義：在給定的置信水平上能夠檢出被測物的最小濃度或最小質(zhì)量，又稱檢出限、檢測低限、檢出低限。表示方法：檢測出信號為3sb時的樣本濃度 =yk值取3（99.7%可能） 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)902. 檢測限（DL、D；或LOD） 相對檢測限（質(zhì)量）定義：3.生物檢測限（BLD，生物檢出限） 表示方法：定義：某濃度的樣本單次檢測所具有的最小響應(yīng)信號剛大于空白檢測限響應(yīng)信號，其濃度稱為生物檢測限，或稱為生物檢出限測定方法： 用空白

54、血清溶解校準(zhǔn)物，配制一系列從最低到逐漸升高的校準(zhǔn)液，加試劑反應(yīng)后測定響應(yīng)信號，按式2.16求出檢測限D(zhuǎn)并找到相應(yīng)濃度管，再求出各個比其濃度漸升的校準(zhǔn)液的響應(yīng)信號與3s檢測限樣本的差值，與檢測限D(zhuǎn)進行比較，D的最低校準(zhǔn)液濃度即為BLD。檢測限與靈敏度的關(guān)系 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)913.生物檢測限（BLD，生物檢出限） 表示方法：定義：某濃度（四）互通性、特異性與干擾互通性(commutability)指用不同測量程序測定參考物質(zhì)時的測定結(jié)果之間的數(shù)字關(guān)系，與測定臨床樣品時測定結(jié)果的數(shù)字關(guān)系的一致程度，又稱為互換性、替換性等。 基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect，基體效

55、應(yīng)、介質(zhì)效應(yīng)) ：被測物以外的某種樣品特性對測定因而對被測物的值的影響。 影響量 干擾(interference)干擾物本身不產(chǎn)生測定信號，但它增大或減小測定值 。非特異性(unspecificity)影響量本身產(chǎn)生測定信號 特異性(specificity)即專一性，指在特定實驗條件下分析試劑只與被測物起反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)相似的非被測物發(fā)生反應(yīng)。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)92（四）互通性、特異性與干擾互通性(commutability線性范圍（linear range）指檢測信號與被測物濃度呈線性時的被測物濃度范圍。測量范圍（measuring range，分析范圍）指

56、在允許誤差極限內(nèi)所能檢測的被測物濃度范圍。 線性范圍測量范圍線性測定方法 線性范圍應(yīng)該足夠?qū)?，至少?yīng)包含95的臨床樣本。太窄后容易導(dǎo)致系統(tǒng)誤差。 （五） 線性范圍與測量范圍第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)93線性范圍（linear range）指檢測信號與被測物濃度呈三、實驗方法選擇與評價的原則、內(nèi)容和步驟（一）實驗方法選擇的原則1.實用性 指所選的方法簡便、快速、價廉、安全等。2.可靠性 指所選的方法相對精密、準(zhǔn)確、特異、穩(wěn)定、靈敏且有較寬的測量范圍，能夠保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性符合方法的允許誤差。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)94三、實驗方法選擇與評價的原則、內(nèi)容

57、和步驟（一）實驗方法選擇的（二）實驗方法評價的基本內(nèi)容實驗方法評價的基本內(nèi)容： 通過一系列評價試驗，檢測能表示其精密度和準(zhǔn)確度的相應(yīng)誤差類型及大小與規(guī)定的性能指標(biāo)相比較，決定候選方法能否可以接受。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)95（二）實驗方法評價的基本內(nèi)容實驗方法評價的基本內(nèi)容：第3章生（三）實驗方法選擇與評價的步驟查閱文獻確定候選方法初步評價試驗最后評價試驗評價后試驗方法應(yīng)用第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)96（三）實驗方法選擇與評價的步驟查閱文獻第3章生物化學(xué)檢驗實驗四、方法學(xué)評價試驗（一）重復(fù)性試驗（二）回收試驗 （三）干擾試驗（四）線性范圍試驗（五） 方

58、法比較試驗（對比試驗）第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)97四、方法學(xué)評價試驗（一）重復(fù)性試驗第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基重復(fù)性試驗?zāi)康模簷z測候選方法的隨機誤差，考察其精密度。方法：將同一材料分成數(shù)份，對其進行反復(fù)多次的測定，計算出均值（x）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系（CV ）。原理：批內(nèi)重復(fù)性測定是將1份穩(wěn)定樣本隨機插入臨床血清樣本序列中測定，做批內(nèi)重復(fù)測量，所得的批內(nèi)不精密度CV應(yīng)小于允許分析誤差（EA）的1/4為合格。EA采用CLIA88可接受范圍指標(biāo)。第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)98重復(fù)性試驗?zāi)康模簷z測候選方法的隨機誤差，考察其精密度。第3章第3章生物化學(xué)檢驗實

59、驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)99第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)99 一般要求批內(nèi)CV5 實驗操作第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)100 一般要求批內(nèi)CV5 實驗操作第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基注意事項（了解）1.樣本的選擇2.被測物的濃度3.離群值的剔除4.不能單獨將重復(fù)樣本設(shè)為一組測定20次，而應(yīng)該與臨床血清樣本隨機排序后穿插測定。5.評價標(biāo)準(zhǔn)Ga.n 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)101注意事項（了解）1.樣本的選擇Ga.n 第3章生物化學(xué)檢驗實回收試驗?zāi)康模?用來考察候選方法對加入到常規(guī)分析樣品中的純分析物含量進行準(zhǔn)確測定的能力，其目的是檢測候選

60、方法的比例系統(tǒng)誤差（PE），以恒量該方法的準(zhǔn)確度。意義： 測得的比例系統(tǒng)誤差（PE）值隨被測物濃度的增加而增加。 實驗內(nèi)容第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)102回收試驗?zāi)康模阂饬x：實驗內(nèi)容第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識原理： 將濃度已知的含被測物的各校準(zhǔn)液加入至病人樣品（原樣品）中成為一系列分析樣品（回收樣品），在原樣品中加入相同體積的無被測物的溶劑作為基礎(chǔ)樣品，用候選方法對這些樣品進行同步測定，計算回收率、平均回收率，考察候選方法的比例系統(tǒng)誤差。一般項目的平均回收率應(yīng)在95105之間。 第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識湖北中醫(yī)藥大學(xué)103原理：第3章生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識