蜂膠中總黃酮的分離及其含量測定

1、蜂膠中總黃酮的別離及其含量測定【摘要】目的利用聚酰胺柱層析別離蜂膠中總黃酮，并運用紫外分光光度法(UV)對其進展含量測定。方法利用聚酰胺柱層析，干法上樣，分別用30、95不同濃度的乙醇進展洗脫，鹽酸鎂粉反響定性檢測及分光光度法定量測定，并對分光光度法進展了改良。結果經定性檢測，30乙醇洗脫液幾無黃酮，紫外分光光度法測量95洗脫液中總黃酮的含量為0.956g/l。結論利用聚酰胺柱層析初步純化蜂膠中總黃酮,并提供了測量蜂膠中總黃酮含量的一種快速、準確的方法紫外分光光度法，為進一步別離其中的單體黃酮及研究其藥理活性打下了基?！娟P鍵詞】蜂膠；總黃酮；聚酰胺柱層析；分光光度法SeparatinandDe

2、terinatinfFlavnidsinPrplisGAXiu-rng，ZANang(DepartentfPharay,hengduedialllege,hengdu610083hina)Abstrat：bjetiveTseparatetheflavnidsinprplisbyplyaidelunhratgraphyandtestablishtheethdfUVfrdeterinatinfflavnid.ethdsFlavnidfprplisasseparatedbyplyaidelunhratgraphyith30%,95%ethanlanddeterinedbyHd-greatinandu

3、ltravilet-visiblespetrphtetry.ResultsThereasalstnflavnidineluatef30%ethanl,thenentratinfeluatef95%ethanlas0.956g/lbyU-VSpetrphtetry.nlusinTheflavnidaspriarilypurifiedbyplyaidelunhratgraphy,andafast,aurateethdultravilet-visiblespetrphtetryasputfrrd.Keyrds:prplis;flavnid;plyaidelunhratgraphy;ultravile

4、t-visiblespetrphtetry蜂膠prplis是蜜蜂從植物樹芽、花苞和樹干處采集的樹膠，并混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等成分而成的一種具有芳香氣味的褐色膠狀固形物。蜂膠的化學成分極為復雜，其主要活性成分包括黃酮類、萜烯類、有機酸、芳香醛、酯類及多種氨基酸、酶、維生素、礦物質等1。黃酮類是蜂膠中最主要的活性物質，具有抗癌，治療糖尿病，抗菌，抗病毒，抗氧化，調節(jié)免疫等多種功能。蜂膠中的黃酮類成分有上百種，但到目前為止僅別離了30多種。為了更加明確蜂膠的有效成分，更加有效地利用蜂膠，本文利用聚酰胺柱層析別離蜂膠中的總黃酮，并運用分光光度法進展了含量測定。1材料與方法1.1主要試劑和儀器1.

5、1.1儀器北京市朝陽區(qū)來廣營醫(yī)療器械廠GD65-1型鼓風枯燥箱；上海良平儀器儀表YB電子天平；上海滬西分析儀器廠DHL-A電腦恒流泵；安捷倫科技上海分析儀器751G分光光度計。1.1.2原料蜂膠原料購自成都永豐養(yǎng)蜂常1.1.3試劑蘆丁標準品中國藥品生物制品鑒定所提供；100200目聚酰胺粉江蘇臨江化工廠；95乙醇成都化學試劑廠；Al(N3)3成都科龍化工廠；NaN2成都化學試劑廠；NaH成都化學試劑廠1.2方法1.2.1聚酰胺柱層析別離蜂膠總黃酮取20凍存的蜂膠塊20.0g，粉碎，80乙醇回流提取3次，3次乙醇液分別為100l,80l,60l(每次45in),提取液合并，減壓濃縮，得總浸膏7.

6、0g。利用聚酰胺柱色譜粗分，用95乙醇洗去吸附劑中的醇溶性雜質，干法上樣，分別用30和95乙醇洗脫，鹽酸鎂粉反響，30洗脫液呈陰性，95洗脫液呈陽性，證明30洗脫液中幾無黃酮，95洗脫液中為總黃酮，為供試液。1.2.2運用分光光度法測定供試液中總黃酮的含量1.2.2.1標準液的配制精細稱取蘆丁標準品20g，置100l容量瓶中，80乙醇溶解，定容，即得0.2g/l蘆丁標準液。1.2.2.2標準曲線的制備精細汲取蘆丁標準液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0l于10l容量瓶中，加5NaN2試液0.4l，搖勻，靜置6in，加10Al(N3)30.4l，靜置6in，加4NaH4.0l，用蒸餾

7、水補足，搖勻。另分別汲取蘆丁標準液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0l于10l容量瓶中，蒸餾水定容，分別作為上述6管的空白對照即加一樣量的蘆丁，不加顯色劑作為空白對照；放置15in，510n處比色。以濃度與吸光度A進展線性回歸，得回歸方程為A=12.4910.0025，R=0.9992。1.2.2.3測定樣品含量精細汲取供試品溶液0.5l，置10l容量瓶中，以供試液為空白對照，按標準曲線項下方法顯色，平行測定5次，并根據標準曲線計算供試液中總黃酮含量。結果見表。1.2.2.4穩(wěn)定性試驗汲取供試液適量，按標準表195乙醇洗脫液中總黃酮的含量曲線項下方法在5in，10in，15in，2

8、0in時測定，以確定供試液的穩(wěn)定性。1.2.2.5精細性實驗汲取供試液適量，按標準曲線項下方法重復測定5次，計算其變異系數RSD。1.2.2.6回收率實驗精細汲取含量的供試液適量，共5份，分別參加蘆丁標準品適量，按標準曲線項下方法測定，計算其平均回收率和RSD。2結果2.1供試液中總黃酮的含量供試液經顯色平行5次的平均吸光度A=0.597，代入回歸方程，計算，得總黃酮含量為0.956g/l。2.2穩(wěn)定性實驗參加顯色劑后15in內，供試液吸光度值幾乎無變化，15in后吸光度值急劇下降，且顏色變淡，證明測定應在參加顯色劑后15in內進展。2.3精細性實驗精細性實驗的變異系數RSD為1.1，說明該方

9、法精細性良好。2.4回收率試驗經回收率實驗，測得平均回收率為99.76，RSD為2.10。結果見表2。3討論3.1由于產地不同，蜂膠的成分及各種理化性質有較大的差異針對這一特點，本文對成都地區(qū)產的蜂膠的提取所用乙醇最正確濃度進展了討論，發(fā)現用80乙醇提取時，提取液中總黃酮含量最高文獻報道用70或95提取3，確定80乙醇為總黃酮的最正確提取濃度，為類似工作提供了參考。3.2聚酰胺是別離總黃酮較為理想的吸附劑，而梯度乙醇是常用洗脫劑在預實驗中，分別用10%,30%,50%,70%,95%乙醇進展梯度洗脫，鹽酸鎂粉反響檢測各洗脫成分，10%，30%乙醇洗脫液中幾無黃酮，50%，70%，95%乙醇洗脫液中均含有黃酮，所以在實驗中用30洗去水溶性和低醇溶性成分，用95乙醇洗洗脫下總黃酮等有效成分，從而初步別離出蜂膠中的總黃酮。表2回收率試驗結果3.3分光光度法測定總黃酮含量在510n處，蘆丁標準液和供試液的吸收值均較顯色劑的吸收值大，所以測黃酮含量時分別以蘆丁標準液和供試液為空白對照，而不以顯色劑為空白對照，從而進步了實驗的準確性，對分光光度法進展了改良。分光光度法測定蜂膠中的總黃酮含量的方法簡便，快速，靈敏性高，是一種較好的方法?！緟⒖嘉?/p>