鏈球菌腸球菌課件

1、實 驗 五鏈球菌及腸球菌的鑒定 鏈球菌腸球菌課件1實 驗 五鏈球菌及腸球菌的鑒定鏈球菌腸球菌課件1目的要求：1.掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。2.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點、菌體形態(tài)及染色性。鏈球菌腸球菌課件2目的要求：鏈球菌腸球菌課件2步驟與方法1、觀察菌落 將菌株接種于血瓊脂平板上，35孵育18-24h后觀察菌落，記錄菌落大小、形態(tài)、表面、邊緣、透明及顏色、有無溶血及特點。將肺炎鏈球菌繼續(xù)孵育2-3天看菌落中心有無凹陷呈“臍狀”。鏈球菌腸球菌課件3步驟與方法1、觀察菌落鏈球菌腸球菌課件3鏈球菌的溶血性鏈球菌腸球菌課件4鏈球菌的溶血性鏈球菌腸球菌課件4溶血性鏈球菌鏈球菌腸球菌

2、課件5溶血性鏈球菌鏈球菌腸球菌課件52、形態(tài)觀察 涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。 鏈球菌腸球菌課件62、形態(tài)觀察鏈球菌腸球菌課件6肺炎鏈球菌 S. pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌,矛頭狀 ,成雙排列，寬端相對，尖端向外,有莢膜鏈球菌腸球菌課件7肺炎鏈球菌 S. pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜鏈球菌腸球菌課件8肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜鏈球菌腸球菌課件8肺炎鏈球菌莢膜染色特點鏈球菌腸球菌課件9肺炎鏈球菌莢膜染色特點鏈球菌腸球菌課件9肺炎鏈球菌 S. pneumoniae 培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求高，兼性厭氧。初次分離需提供5

3、%-10%的CO2。18-24h后血平板上形成灰白色、圓形、針尖樣的菌落。菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。鏈球菌腸球菌課件10肺炎鏈球菌 S. pneumoniae 培養(yǎng)特性：營養(yǎng)肺炎鏈球菌 S. pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。鏈球菌腸球菌課件11肺炎鏈球菌 S. pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h肺炎鏈球菌 S. pneumoniae主要生化反應(yīng) optochin試驗: 含5g optochin 紙片貼于 涂布有待測菌的平板上35孵育過夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)鏈球菌腸球菌課件1

4、2肺炎鏈球菌 S. pneumoniae主要生化反應(yīng)甲型溶膽汁溶菌試驗 原理：膽汁或膽鹽能活化肺炎鏈球菌的自溶酶，促進細(xì)菌細(xì)胞膜破損或菌體裂解而自溶。 方法：A、平板法：在血瓊脂平板上選擇出待檢的草綠色溶血的菌落，觀察記錄菌落特點，然后于菌落上加一滴去氧膽酸鈉溶液，35孵育15-30min觀察結(jié)果。鏈球菌腸球菌課件13膽汁溶菌試驗鏈球菌腸球菌課件13B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別加入2支試管，再于各管中加入去氧膽酸鈉溶液0.1ml，搖勻后置于37水浴30min后觀察結(jié)果。 結(jié)果判斷：平板法若菌落消失為陽性，不消失為陰性，試管法若液體由渾濁變透明為陽性，不透明為陰性

5、，此試驗是鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌的重要試驗，后者陽性。鏈球菌腸球菌課件14B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色鏈球菌腸球菌課件15痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色鏈球菌腸球菌課件15A群(化膿性)鏈球菌 生物學(xué)性狀 球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽性(G)， 無芽胞，無鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。1. 形態(tài)與染色鏈球菌腸球菌課件16A群(化膿性)鏈球菌 生物學(xué)性狀 球形或橢圓形，鏈狀化膿性鏈球菌鏈球菌腸球菌課件17化膿性鏈球菌鏈球菌腸球菌課件17A群(化膿性)鏈球菌 生物學(xué)性狀 營養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基； 液體培養(yǎng)為沉淀生長； 血平板呈灰白

6、色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一， 多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。2. 培養(yǎng)特性鏈球菌腸球菌課件18A群(化膿性)鏈球菌 生物學(xué)性狀 營養(yǎng)要求高：血平板或含血清桿菌肽敏感試驗 原理：A群化膿性鏈球菌對桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。 方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.04U/片）貼于平板上，35孵育18-24h觀察。 結(jié)果判斷：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，推斷為A群化膿性鏈球菌。鏈球菌腸球菌課件19桿菌肽敏感試驗鏈球菌腸球菌課件19B化膿性鏈球菌桿菌肽陽性鏈球菌腸球菌課件20B化膿性鏈球菌桿菌肽陽性鏈球菌腸球菌課件20B群無乳鏈球菌鏈球菌腸球菌課件21

7、B群無乳鏈球菌鏈球菌腸球菌課件21CAMP試驗 原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進金黃色葡萄球菌溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。 方法：在羊血瓊脂平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，在將被檢菌距金葡菌接種線3mm處直角接種一短線，35培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。同時設(shè)陽性對照和陰性對照。鏈球菌腸球菌課件22CAMP試驗鏈球菌腸球菌課件22 結(jié)果報告： 在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽性，否則為陰性，此試驗為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗，無乳鏈球菌為陽性，其他為陰性。鏈球菌腸球菌課件23 結(jié)果報告：鏈球菌腸球菌

8、課件23無乳鏈球菌CAMP試驗陽性鏈球菌腸球菌課件24無乳鏈球菌CAMP試驗陽性鏈球菌腸球菌課件24CAMP陽性鏈球菌腸球菌課件25CAMP陽性鏈球菌腸球菌課件25馬尿酸水解試驗 原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。 方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基， 35培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.8ml于另一試管，加入FeCl30.2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。 結(jié)果：出現(xiàn)恒定沉淀物為陽性。鏈球菌腸球菌課件26馬尿酸水解試驗鏈球菌腸球菌課件263、生化反應(yīng) 1）觸酶試驗： 鏈球菌屬

9、為陰性。鏈球菌腸球菌課件273、生化反應(yīng)鏈球菌腸球菌課件27（6）血清學(xué)試驗（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗） 原理：Lancefield根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20多個群，對人類治病的多數(shù)為A群，偶見B、C、D、F、G群。用這6群抗原的兔免疫血清分別致敏的乳膠顆粒，與具有相應(yīng)群特異性抗原的鏈球菌發(fā)生間接乳膠凝集反應(yīng)，可在10min內(nèi)對鏈球菌作出主要的分群鑒定。鏈球菌腸球菌課件28（6）血清學(xué)試驗（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗）鏈球菌腸球菌課 方法：挑取菌落2-3個轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37水浴15min。在卡片的相應(yīng)區(qū)域滴加一滴A、B、C、D、

10、F、G致敏膠乳，再加入處理后的菌懸液一滴分別與膠乳混勻，同時在卡片相應(yīng)區(qū)域加一滴控制液與任意一滴致敏乳膠混勻，作為陽性對照，輕搖卡片，觀察結(jié)果。鏈球菌腸球菌課件29 方法：挑取菌落2-3個轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽性。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。鏈球菌腸球菌課件30結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽性。待檢菌與哪Lancefield血清凝集分型鏈球菌腸球菌課件31Lancefield血清凝集分型鏈球菌腸球菌課件31鏈球菌腸球菌課件32鏈球菌腸球菌課件32（7）膠乳凝集試驗： 原理：抗鏈球菌溶血素“O”

11、（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。鏈球菌腸球菌課件33（7）膠乳凝集試驗：鏈球菌腸球菌課件33 方法：先將病人血清5630min滅活，然后用生理鹽水做1：15稀釋。在反應(yīng)板個空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽性和陰性對照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。鏈球菌腸球菌課件34 方法：先將病人血清5630min滅活， 結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽性、不凝集為陰性。ASO陽性可認(rèn)為患者近期受溶血性鏈球菌感

12、染過，可輔助診斷風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等疾病。鏈球菌腸球菌課件35 結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽性、不凝集為陰性。ASO陽鏈球菌腸球菌課件36鏈球菌腸球菌課件36腸球菌屬步驟和方法1、菌落觀察: 將菌株接種于血瓊脂平板上，35孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)溶血環(huán)，也可無溶血環(huán)。 鏈球菌腸球菌課件37腸球菌屬步驟和方法鏈球菌腸球菌課件372、形態(tài)觀察 涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)及排列。 腸球菌形態(tài)類似鏈球菌，為單個、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭氏陽性球菌。鏈球菌腸球菌課件382、形態(tài)觀察鏈球菌腸球菌課件383、生

13、化反應(yīng)： （1）觸酶試驗：腸球菌屬為陰性反應(yīng)。 （2）膽汁-七葉苷試驗： 原理：培養(yǎng)基的膽汁對某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對七葉苷的水解活性。腸球菌能在膽汁中生長，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。鏈球菌腸球菌課件393、生化反應(yīng)：鏈球菌腸球菌課件39 方法：將被檢菌13個菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35孵育1824h。 結(jié)果：細(xì)菌生長，且培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽性，不變色為陰性。腸球菌為陽性。鏈球菌腸球菌課件40 方法：將被檢菌13個菌落接種于膽汁-（3）65g/L NaCl生長試驗： 原理：腸球菌有很強的耐鹽能力，能在65g/L NaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長。 方法：將待檢菌接種65g/L NaCl血清肉湯中，35孵育18-24h。 結(jié)果：細(xì)菌生長且使得培養(yǎng)基變黃為陽性，不生長為陰性，腸球菌為陽性。鏈球菌腸球菌課件41（3）65g/L NaCl生長試驗：鏈球菌腸球菌課件41（3）PYR試驗： 原理：多