提取分離鑒定方法課件

1、 第3節(jié) 天然藥物化學(xué)成分的提取分離 (extraction and isolation) 從有效成分的提取、分離工作開(kāi)始 已知成分：一般先查閱有關(guān)資料,搜集比較該種或該類成分的各種提取方案,尤其是工業(yè)生產(chǎn)方法,再根據(jù)具體條件加以選用。未知有效成分：根據(jù)預(yù)先確定的目標(biāo),在適當(dāng)?shù)幕钚詼y(cè)試體系指導(dǎo)下,進(jìn)行提取、分離并以相應(yīng)的動(dòng)物模型篩選、臨床驗(yàn)證、反復(fù)實(shí)踐,才能達(dá)到目的。 溶劑法 水蒸氣蒸餾法 升華法 提取前藥材的處理：1 新鮮藥材:應(yīng)在采集后數(shù)小時(shí)內(nèi)投入乙醇中。否則，迅速干燥（低溫、通風(fēng)），防止霉變、酶解。2干燥藥料:適當(dāng)粉碎,增大與溶劑的接觸表面。3在進(jìn)行提取之前,應(yīng)對(duì)所用材料的基源、產(chǎn)地、藥

2、用部位、采集時(shí)間與方法等進(jìn)行考查。確定藥材來(lái)源的真實(shí)性，每次實(shí)驗(yàn)之前要將原料藥材留樣。 一、提取方法（一）溶劑提取法 溶劑進(jìn)入生物體細(xì)胞，溶解或分散其化學(xué)成分而變成浸出物的全過(guò)程。 包括浸潤(rùn)、解吸和擴(kuò)散三個(gè)階段。 浸潤(rùn)：滲透階段 溶劑通過(guò)細(xì)胞壁滲透到細(xì)胞中。 解吸：溶解階段 細(xì)胞內(nèi)容物與細(xì)胞組織之間有親和 力，溶劑破除這種親和力。 擴(kuò)散：置換階段 利用細(xì)胞內(nèi)的滲透力產(chǎn)生的壓差而抽提出來(lái)，用溶劑占領(lǐng)內(nèi)容物的位置而將內(nèi)容物置換出來(lái)。細(xì)胞內(nèi)有效成分溶劑滲入有效成分從細(xì)胞內(nèi)溶出濃度由高到低（1）對(duì)已知物的提?。?根據(jù)“相似相溶”原則選擇溶劑。即水溶性成分易溶于親水性溶劑，脂溶性成分易溶于親脂性溶劑（2

3、）對(duì)未知物的提?。?可將固體藥材按極性遞增方式,用不同溶劑, 依次進(jìn)行提取。得到的各個(gè)提取液經(jīng)活性測(cè)試確定有效部位后再做進(jìn)一步分離。 1.選擇溶劑考慮因素2.常見(jiàn)溶劑的種類及其特點(diǎn)3.常用溶劑提取方法4.影響溶劑提取效率的因素環(huán)己烷，石油醚，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇，水極性：親脂性：親水性：比水重的有機(jī)溶劑：與水可以以任意比例混溶的有機(jī)溶劑：與水分層的有機(jī)溶劑：能與水分層的極性最大的有機(jī)溶劑：常用來(lái)從水中萃取苷類、水溶性生物堿類成分的有機(jī)溶劑： 溶解范圍最廣的有機(jī)溶劑：2.常見(jiàn)溶劑的種類及其特點(diǎn)溶劑極性遞增提取法石油醚（可提出油脂、蠟、葉綠素、揮發(fā)油、游離甾體和三萜類

4、化合物）氯仿或乙酸乙酯（可提出游離生物堿、有機(jī)酸及黃酮、香豆素的苷元等中等極性化合物） 丙酮或乙醇、甲醇（可提出苷類、生物堿鹽以及鞣質(zhì)等極性化合物）水（可提取氨基酸、糖類、無(wú)機(jī)鹽等水溶性成分）依次進(jìn)行提取，得到的各個(gè)餾分經(jīng)活性測(cè)試確定有效部位后，再做進(jìn)一步分離。 3.常用溶劑提取方法浸漬法滲漉法煎煮法回流提取法連續(xù)回流提取法（索氏提?。┏R界流體萃取技術(shù)超聲波輔助提取微波輔助提取浸漬法（1）常用溶劑 水、乙醇。（2）儀器裝置 有蓋的容器。 （3）操作過(guò)程 將藥材粗粉置容器中加入適量的溶劑常溫或加熱（4080）浸泡（注：浸泡時(shí)應(yīng)將容器蓋嚴(yán)，并經(jīng)常攪拌或振搖），一般浸泡35日或按規(guī)定時(shí)間傾取上清液

5、過(guò)濾提取液。藥材可重復(fù)浸泡23次。（4）提取范圍 適宜含淀粉、樹(shù)膠等成分較多的藥材以及含揮發(fā)性成分、遇熱不穩(wěn)定易分解或被破壞成分的提取。（5）提取優(yōu)缺點(diǎn) 操作簡(jiǎn)便，但提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大，提取效率不高。水為溶劑易發(fā)霉、變質(zhì)，必要時(shí)需加適量的防腐劑。 滲漉法（1）常用溶劑 水、乙醇。 （2）儀器裝置 滲漉裝置。（3）操作過(guò)程 將藥材粉末裝于滲漉筒內(nèi)上端不斷添加新溶劑，使其滲過(guò)藥粉（溶出可溶性成分）提取液。（4）提取范圍 適宜對(duì)熱不穩(wěn) 定且易分解的成分的提取。 （5）優(yōu)缺點(diǎn) 有較大的濃度差，提取效率較高。但溶劑用量大，操作較繁。 煎煮法 （1）常用溶劑 水。 （2）儀器裝置 砂鍋、鋁鍋等。（3）

6、操作過(guò)程 將藥材飲片或粗粉加適量水 直火加熱煮沸1h左右 過(guò)濾提取液。（4）提取范圍 對(duì)含揮發(fā)性及遇熱不穩(wěn)定的成分的藥材不宜用本法。 ，（5）優(yōu)缺點(diǎn) 本法簡(jiǎn)便易行，提取效率比冷浸法高。但水溶性雜質(zhì)多，水煎液易發(fā)霉 連續(xù)回流提取法（1）常用溶劑 有機(jī)溶劑。 （2）儀器裝置 索氏或沙氏提取器 （3）操作過(guò)程 將藥材裝于濾紙袋，放入提取器內(nèi)連接裝置水浴加熱回流提取適當(dāng)時(shí)間提取液。（4）提取范圍 不適于對(duì)熱不穩(wěn)定成分的提取。（5）提取優(yōu)缺點(diǎn) 溶劑用量少，提取效率高。但裝置設(shè)備要求高。提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水或有機(jī)溶劑不加熱效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑

7、滲漉法有機(jī)溶劑不加熱脂溶性成分消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱節(jié)省溶劑、效率最高親脂性較強(qiáng)成分用索氏提取器，時(shí)間長(zhǎng)超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取（supercritical fluid extraction SFE）是一種利用某物質(zhì)在超臨界區(qū)域形成的流體，對(duì)中藥中有效成分進(jìn)行萃取分離的新型技術(shù)，集提取和分離于一體?；驹? 根據(jù)超臨界流體（SF）對(duì)溶質(zhì)有很強(qiáng)的溶解能力，且在溫度和壓力變化時(shí)，流體的密度、黏度和擴(kuò)散系數(shù)隨之變化，對(duì)溶質(zhì)的親和力也隨之變化，從而使不同性質(zhì)

8、的溶質(zhì)被分段萃取出來(lái)，達(dá)到萃取、分離的目的。 SF的特點(diǎn)： 密度大，黏度小，擴(kuò)散系數(shù)大 因溶質(zhì)的溶解性能與溶劑的密度、擴(kuò)散系數(shù)成正比，與黏度成反比。因此，SF對(duì)很多物質(zhì)有很強(qiáng)的溶解能力，同時(shí)SF的高流動(dòng)性和擴(kuò)散能力，有助于所溶解的各成分之間的分離，并能加速溶解平衡，萃取效率高。 物質(zhì)在超臨界流體中的溶解度，受壓力和溫度的影響很大.可以 利用升溫,降壓手段將超臨界流體中所溶解的物質(zhì)分離析出，達(dá)到分離提純的目的(兼有精餾和萃取兩種作用) 超臨界流體萃取法的應(yīng)用 20世紀(jì)50年代起進(jìn)入實(shí)驗(yàn)階段； 如從石油中脫瀝青等。70年代以來(lái)，大量專利涌現(xiàn)； 咖啡豆中脫咖啡因、煙草中脫尼古丁等。70年代末，食品工

9、業(yè)中的應(yīng)用日益廣泛： 從啤酒花中提取酒花精已形成了生產(chǎn)規(guī)模。80年代以來(lái)，廣泛地用于香精和香辛料成分的提取。從菊花、梅花、梔子花、米蘭花、玫瑰花中提取天然花香劑；從胡椒、肉桂、芫荽、月桂、薄荷等中提取香辛料，對(duì)綠茶和紅茶進(jìn)行全成分提取等夾帶劑：在萃取物和超臨界流體組成的二元系中加入第三組分，可使原來(lái)成分的溶解度得以改善。 CO2-SF通常脂溶性成分可在低壓條件下萃取，如揮發(fā)油、烴、酯、內(nèi)酯、醚、環(huán)氧化合物等；若成分的極性基團(tuán)增多則要在較高的壓力下才能被萃取；而高分子物（如蠟、蛋白質(zhì)、樹(shù)膠等）則很難萃取。 超臨界萃取中加入夾帶劑可加大溶解度。例如，在2104kPa和70條件下，棕櫚酸在CO2-S

10、F中的溶解度是0.25（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）；在同樣條件下，于體系中加入10乙醇，棕櫚酸的溶解度可 提高到5.0以上。 一般來(lái)說(shuō)，具有很好溶解性能的溶劑，也往往是很好的夾帶劑，例如，甲醇、乙醇、丙酮等。通常夾帶劑的用量不超過(guò)15。超臨界流體萃取的主要設(shè)備是萃取器和分離器： 超界萃取裝置（1）萃取能力強(qiáng)：超臨界狀態(tài)下的流體對(duì)溶質(zhì)的溶解度大大地增加了，一般可達(dá)幾個(gè)數(shù)量級(jí)； （2）萃取物的純度較高；（3）臨界壓力和臨界溫度較低；Tc=31.26，Pc=7.4MPa （4）不腐蝕設(shè)備，廉價(jià)，易得，安全；（5）提取速度快；（6）適合遇熱分解的熱敏性物料。（7）溶劑回收簡(jiǎn)單方便，節(jié)省能源。（8）能與GC、IR、MS

11、、GS/MS等現(xiàn)代分析手段結(jié)合起來(lái)，能高效快速地進(jìn)行成分分析。超臨界二氧化碳萃取技術(shù)的特點(diǎn)超聲波提取法 溶劑超聲波 用超聲波作用于溶劑可產(chǎn)生空化現(xiàn)象（瞬間具有幾千個(gè)大氣壓的壓力，局部溫度可達(dá)千度），使植物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體瞬間破裂，溶劑能迅速滲透進(jìn)入細(xì)胞，溶解出化學(xué)成分，因而成為一種快速、高效、節(jié)能的新型提取方法。 目前，在實(shí)驗(yàn)室中有逐漸取代傳統(tǒng)提取方法的趨勢(shì)。胡蘿卜中多糖在水中煎煮1h，提取率1.98%；超聲波輔助45min，提取率2.81%微波輔助提取法原理： 利用樣品中目標(biāo)物分子在微波電磁場(chǎng)的作用下，從原來(lái)的熱運(yùn)動(dòng)狀態(tài)轉(zhuǎn)為跟隨微波交變電磁場(chǎng)而快速排列取向，將微波能量轉(zhuǎn)化為樣品內(nèi)的能量，從

12、而加速目標(biāo)物從固相進(jìn)入溶劑相的過(guò)程。優(yōu)點(diǎn)：快、節(jié)能缺點(diǎn)：對(duì)原料形狀、含水等有要求 可使成分消解例如：櫻桃中多糖在水中煎煮1h，提取率3.2% 利用微波輔助45min，提取率5.41% 藥材的粉碎度 粉碎是為了增大與溶劑的接觸面積，提高提取效率。但具體提取時(shí)粉碎的程度要根據(jù)藥材質(zhì)地、提取方法及提取溶劑來(lái)決定。質(zhì)地堅(jiān)硬的藥材應(yīng)粉碎較細(xì)，而質(zhì)地輕薄的藥材可用粗粉或不用粉碎。含大量黏液質(zhì)的藥材如果粉碎過(guò)細(xì)，則提出的雜質(zhì)量增加。以水為溶劑進(jìn)行提取時(shí)藥材易膨脹，可用粗粉；以乙醇為溶劑可粉碎較細(xì)。用滲漉法提取時(shí)，藥粉不可過(guò)細(xì)，否則，會(huì)導(dǎo)致滲漉困難。4.提取的注意事項(xiàng)提取時(shí)間 提取需要一定的時(shí)間，但當(dāng)藥材組織

13、內(nèi)外溶液濃度達(dá)到平衡后，成分就不再溶出。此時(shí)再增加提取時(shí)間也無(wú)益。提取溫度 通常升高溫度有利于提取。但提取溫度升高，雜質(zhì)的溶出率也相應(yīng)增大。同時(shí)也易導(dǎo)致對(duì)熱不穩(wěn)定成分及揮發(fā)性成分的損失。 升華法是固體物質(zhì)受熱不經(jīng)過(guò)熔融，直接變成蒸汽，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。天然藥物中有些成分具有升華的性質(zhì)，可以用升華法提取。如：樟木中樟腦的提取、大黃中蒽醌的提取、茶葉中咖啡因的提取。（二） 升華法（三）水蒸汽蒸餾法 水蒸氣通入含有揮發(fā)性成分的藥材中，使藥材中揮發(fā)性成分隨水蒸氣蒸餾出來(lái)的提取方法。 適用范圍： 適用于能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞并難溶于水的成分的提取。 如：揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分

14、子的醌類成分。 揮發(fā)性生物堿如麻黃堿和檳榔堿亦可用此法提取。 原理：dalton分壓定律，相互不溶也不起化學(xué)作用的液體混合物的蒸汽總壓，等于該溫度下各組分飽和蒸氣壓（即分壓）之和。因此盡管各組分本身的沸點(diǎn)高于混合液的沸點(diǎn)，但當(dāng)分壓總和等于大氣壓時(shí)，液體混合物即開(kāi)始沸騰并被蒸餾出來(lái)。 P總=PA+PB T總含水醇H2O 應(yīng)用：脫色等溶劑溶劑在柱色譜中流動(dòng)相叫洗脫劑；在TLC和PPC中叫展開(kāi)劑。常見(jiàn)溶劑的洗脫能力順序?yàn)椋?己烷、苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水 注：對(duì)極性吸附劑洗脫能力依次增強(qiáng) 對(duì)非極性吸附劑洗脫能力依次減弱一般應(yīng)用時(shí)選擇二種或三種不同極性的溶劑混合使用，以達(dá)到最佳分

15、離效果。 CH3OH-H2O （7:3） CHCl3-CH3OH-H2O （7:2:1）被分離的物質(zhì) 在吸附劑和洗脫劑一定時(shí)，各組分的分離情況直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)。常見(jiàn)官能團(tuán)的極性按下列順序依次增加： CH2CH2CH3, CH2CH2, CH=CH, CH3， ROR, COOR,C=O, CHO, SH, CONR, NH2, ROH, ArOH, COOH 注：極性基團(tuán)數(shù)目多，極性大；同系物中碳原子數(shù)目少，被 吸附強(qiáng)一些。2吸附劑、溶劑、被分離物質(zhì)的選擇 被分離物質(zhì)極性強(qiáng)，選擇較弱吸附能力的吸附劑，洗脫劑極性由小到大按一定梯度遞增。1 被分離物質(zhì)極性很小，選擇吸附性較強(qiáng)的吸附 劑，

16、并用弱極性洗脫劑；即：被分離物極性與洗脫劑相同，與吸附劑相反 3.簡(jiǎn)單吸附法用于物質(zhì)的濃縮與精制 應(yīng)用：結(jié)晶、重結(jié)晶中脫色、脫臭從大量稀水液中濃縮微量物質(zhì)活性炭吸附法： 吸附力與結(jié)構(gòu)的關(guān)系： 分子量大分子量??；芳香族脂肪族 含-OH, -COOH, -NH2 多少 洗脫劑的洗脫能力： 吡啶15%酚/醇7%酚/水醇含水醇水甲醇提取液 活性碳 攪拌,靜置,上清液無(wú)黃酮反應(yīng)為止活性碳7%酚水15%酚醇洗脫液乙醚乙醚(殘余酚)黃酮苷(用吡啶可將苷元洗脫下來(lái)) 一葉萩水提取液 調(diào) pH8.5 活性碳活性碳操作同上苯回流 一葉萩堿吸附色譜常見(jiàn)的操作方式： 吸附薄層色譜（TLC）：化學(xué)成分的分離、鑒定及探索

17、柱色譜分離的條件 吸附柱色譜：化學(xué)成分的分離制備。 4.吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離 硅膠吸附柱色譜氧化鋁吸附柱色譜 A吸附劑：3060倍，有時(shí)100200倍 B裝柱： 徑高比（d/h）1:151:20 干法裝柱/濕法裝柱 C上樣： 干法上樣/濕法上樣 D洗脫： 等度/梯度（洗脫劑極性遞增） 托尾： 化學(xué)吸附：硅膠堿性成分洗脫劑加堿 E. 收集、檢查、合并相同餾分，回收溶劑，放置、析晶、抽濾，得純品 F洗脫系統(tǒng)的選擇： TLC Rf=0.10.2薄層色譜（TLC）微量、快速的色譜方法應(yīng)用：混合物的分離；純物質(zhì)的鑒定；監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程；摸索和確定柱色譜的洗脫條件根據(jù)分離原理不同：分為吸附薄層色譜（吸附

18、劑）和分配薄層色譜（支持劑）吸附薄層色譜法 此法是將吸附劑均勻地鋪在玻璃板上形成薄層，把欲分離的試樣溶液點(diǎn)加到薄層板的一端，然后用合適的展開(kāi)劑展開(kāi)，使混合物中各成分得以分離的方法?；驹恚豪梦絼?duì)樣品中各成分吸附能力不同以及展開(kāi)劑對(duì)它們的解吸附能力的不同，使各成分達(dá)到分離。三要素：吸附劑、被分離成分、展開(kāi)劑化合物在吸附薄層上移動(dòng)的速度與展開(kāi)劑、被分離成分的極性有關(guān)。展開(kāi)劑的極性越大，化合物的移動(dòng)速度越快；被分離成分的極性越大，移動(dòng)速度越慢。吸附薄層色譜條件的選擇吸附薄層色譜的操作步驟操作步驟：制板 活化 點(diǎn)樣 展開(kāi) 顯色 計(jì)算Rf值 1、制板：選板板的材質(zhì)：金屬板、玻璃板、塑料板板的規(guī)格

19、：515、520、1010、2020大小清洗干燥：鋪板：板的種類：軟板（干法制板）：不含粘合劑硬板（濕法制板）：含粘合劑粘合劑：羧基基纖維素鈉（CMC-Na) 淀粉、鍛石膏(G)等鋪板方法：傾注法、平鋪法、涂鋪器法自動(dòng)鋪板器 干法制板示意圖濕法制板示意圖注意：硬板必需要活化陰干后于烘箱中110烘30分鐘 2、點(diǎn) 樣 ：點(diǎn)樣工具毛細(xì)管（0.5mm）移液管微量進(jìn)樣器：樣品處理液體樣品：直接點(diǎn)樣固體樣品：極性相近、揮發(fā)性高的有機(jī)溶劑 切忌：不能用水或甲醇：溶液濃度：12：斑點(diǎn)直徑：小于2-3mm ：點(diǎn)樣次數(shù)：一般23次，每次間隔一定時(shí)間（等溶劑揮發(fā)干）1.52cm起始線原點(diǎn)3、展開(kāi)：注意避免邊緣效應(yīng)

20、（要進(jìn)行飽和處理）：展開(kāi)方式：上行展開(kāi)、下行展開(kāi) ：展開(kāi)要求：展開(kāi)劑位于起始線以下：展開(kāi)時(shí)間：展開(kāi)劑攀延到薄層板3/4處展開(kāi)缸蓋展開(kāi)缸薄層板溶劑展開(kāi)操作示意圖理想展開(kāi)邊緣效應(yīng)4、顯色顯色方法：熒光顯色：化學(xué)顯色：UV顯色（紫外線顯色）熒光物質(zhì)顯色：通用顯色劑（I2）：未知成分常用專屬顯色劑：特定官能團(tuán)5、計(jì)算Rf值Rf值終止線色斑起始線一般Rf值在（0.050.85）之間極性越大，吸附力越強(qiáng)，Rf值越小基本步驟：一看、二照、三碘、四顯常見(jiàn)化合物的薄層色譜顯色劑化合物顯色劑生物堿碘化鉍鉀黃酮類三氯化鋁乙醇液蒽醌類1.乙酸鎂甲醇液 2. 5%氫氧化鉀糖類鄰苯二甲酸-苯胺強(qiáng)心苷1.氯胺T-三氯乙酸

21、2. Kedde試劑甾體三氯化銻冰醋酸酚類三氯化鐵水溶液酸類葡萄糖苯胺 將計(jì)算出的Rf值與已知化合物的Rf值對(duì)照，也可與文獻(xiàn)上記載的Rf值比較，進(jìn)行定性鑒別。 薄層色譜廣泛應(yīng)用于植物各類化學(xué)成分的分離鑒定，也可應(yīng)用于中草藥品種、藥材及其制劑真?zhèn)蔚臋z查、質(zhì)量控制和資源調(diào)查。藥典一部采用薄層色譜法作鑒別的中藥材和中藥成方制劑品種已達(dá)1523種。5.聚酰胺柱色譜 高分子聚合物不溶于常見(jiàn)有機(jī)溶劑對(duì)堿穩(wěn)定對(duì)酸特別是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性差 可溶于濃鹽酸、冰乙酸、甲酸中性 質(zhì)分子間氫鍵半化學(xué)吸附吸附原理化合物在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目：越多，越強(qiáng)。形成氫鍵的基團(tuán)所處的位置： 處于易形成分子內(nèi)氫鍵

22、者，減弱。分子中芳香化程度：高，增強(qiáng)。影響吸附力的因素各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力水 甲醇 乙醇 氫氧化鈉水溶液 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素水溶液 影響吸附力強(qiáng)弱的因素化合物在不同溶劑中的吸附力，隨溶劑極性增強(qiáng)而增強(qiáng)水中最強(qiáng)常以水裝柱、樣品以水溶解上樣含水醇中次之醇中最弱常以濃度漸高的含水醇梯度洗脫 EtOH-H2O最常用 弱強(qiáng)醌類、黃酮類等酚性的制備和分離 吸附是可逆的（鞣質(zhì)例外），分離效果好，吸附容量大脫鞣處理 對(duì)鞣質(zhì)的吸附特別強(qiáng)，近乎不可逆，特別適合于植物粗提物的脫鞣處理。 生物堿、萜類、甾類、糖類、氨基酸等化合物的分離也有用途 應(yīng) 用聚酰胺柱色譜洗脫劑聚酰胺操作步驟：裝柱上樣洗脫6.

23、大孔吸附樹(shù)脂 高分子聚合物白色球形顆粒多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不溶于酸、堿、有機(jī)溶劑吸附原理：分子間力 氫鍵分子篩 性質(zhì)原理大孔吸附樹(shù)脂原理是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分離材料,它的吸附性是由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果。分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)的性質(zhì)所決定。 比表面積、表面電性、孔徑、能否與化合物形成氫鍵樹(shù)脂的性質(zhì)：非極性樹(shù)脂 易吸附非極性化合物 極性樹(shù)脂 易吸附極性化合物溶劑的性質(zhì)：物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹(shù)脂對(duì)此物質(zhì)的吸附力就小 影響吸附力強(qiáng)弱的因素水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。最常用：乙醇水 根據(jù)吸附作用強(qiáng)弱選用不同的洗脫液或不同濃度的同一溶劑。對(duì)非極性大孔樹(shù)脂,洗脫液極性越小,洗脫能

24、力越強(qiáng)。對(duì)于中等極性的大孔樹(shù)脂和極性較大的化合物來(lái)說(shuō),則選用極性較大的溶劑為宜。 廣泛應(yīng)用于化合物的分離與富集工作中 如：苷類、糖類的分離 生物堿的精制 多糖、黃酮、三萜類化合物的分離。 洗脫劑應(yīng) 用練習(xí)：利用大孔吸附樹(shù)脂從某植物提取物中將多糖、黃酮苷元、三萜皂苷的分離開(kāi)。（三） 根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離1.基本概念 利用混合物中各種成分在兩相互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的差異而獲得分離的方法。 分配系數(shù)K 值：兩種相互不能任意混溶的溶劑置分液漏斗中充分振搖，放置后即可分成兩相，溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配比(K)在一定溫度及壓力下為一常數(shù)， K = CU / CL CU示溶質(zhì)在上相溶劑

25、中的濃度; CL示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。 分離的難易可用分離因子來(lái)表示。 定義為A、B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值。 =KA / KB （KA KB） 值越大，化合物A、B越容易分開(kāi) 100 1次萃取，基本分離 10100 1012次 2 100次以上 1 無(wú)法分離上層下層（1）簡(jiǎn)單液液萃取法（2）逆流分溶法 CCD （Counter current distribution）（3）紙色譜 PC （ Paper chromatography）（4）液滴逆流色譜 DCCC （Droplet counter current chromarography）（5）高速逆流色譜 HSCCC

26、(High speed counter current chromarography） （6)液液分配柱色譜2.方法50 A有機(jī)溶劑/水B有機(jī)溶劑/酸、堿水 PH 物質(zhì)存在狀態(tài)溶解性KCPH梯度萃取 梯度調(diào)節(jié)PH，每次改變一種成分的存在狀態(tài)，依次分離 缺點(diǎn)：手工操作繁瑣、溶劑用量大、易乳化（1）簡(jiǎn)單液液萃取法上層下層例：HA1、HA2、B，且HA1 HA2，如何分離? PH 12 B A- 3 BH+ HA （2）逆流分溶法 CCD50工作原理：多次、連續(xù)的液液萃取craig逆流分溶儀萃取單元及工作過(guò)程優(yōu)點(diǎn)：避免手工操作缺點(diǎn)：溶劑用量大 機(jī)械操作導(dǎo)致破損、漏液、乳化 CCD法操作條件溫和、樣品

27、容易回收, 適于中等極性、不穩(wěn)定物質(zhì)的分離。樣品極性過(guò)大或過(guò)小,或分配系數(shù)受濃度或溫度影響過(guò)大時(shí)則不易采用此法分離。易于乳化的溶劑萃取系統(tǒng)也不宜采用。振搖萃取（a）靜置分層(b)兩相分開(kāi)(c)轉(zhuǎn)移(d) （3）紙色譜 PC 用途： 借助紙色譜求值，并選擇理想的分離條件 = Rfa (1-Rf b) / Rfb (1-Rf a) 將紙色譜的Rf值代入即可求出，進(jìn)行多次紙色譜就可找出最佳分離條件 以濾紙作為載體，以濾紙纖維上吸附的水份做固定相，用于水互不相溶的溶劑做展開(kāi)劑的分配色譜。相當(dāng)于多次萃取。紙色譜的操作選擇合適的濾紙：選擇原則：光滑整齊，無(wú)折痕適宜的機(jī)械強(qiáng)度，潤(rùn)濕不變形純度高，雜質(zhì)含量少濾

28、紙種類：快速濾紙：結(jié)構(gòu)疏松，宜用來(lái)分離Rf值相差 較大的成分。慢速濾紙：結(jié)構(gòu)致密，宜用來(lái)分離Rf值相差 較小的成分 中速濾紙：比較常用 點(diǎn)樣：展開(kāi)：顯色：計(jì)算Rf值與薄層色譜相似（4）液滴逆流色譜 DCCC droplet counter current chromarography 流動(dòng)相呈液滴形式在固定相間交換，分離效果好。多用于分離皂苷、蛋白質(zhì)、糖類等。流動(dòng)相液滴垂直上下，經(jīng)過(guò)固定相液 （5）高速逆流色譜 HSCCC high speed countercurrent chromarography 行星式旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力場(chǎng)使固定相保留在蛇形管內(nèi),流動(dòng)相單向、低速經(jīng)過(guò)固定相 DCCC和HS

29、CCC廣泛用于皂苷、生物堿、酸性化合物、蛋白質(zhì)、糖類的分離精制。固定相涂覆于硅膠等多孔載體上，裝柱流動(dòng)相通過(guò)色譜柱進(jìn)行洗脫物質(zhì)在兩相溶劑中作逆流分布 分配比不同，被洗脫速度不同 4要素（6）液液分配柱色譜 定義 分配色譜法是以一種多孔物質(zhì)為支持劑，兩相溶劑中的一相在色譜過(guò)程中始終固定在支持劑上（稱為固定相），用與固定相不互溶的另一相溶劑來(lái)洗脫或展開(kāi)（在色譜過(guò)程中始終是移動(dòng)的一相，稱為移動(dòng)相），混合物中各成分在固定相和移動(dòng)相之間進(jìn)行連續(xù)的、動(dòng)態(tài)的不斷分配，使分配系數(shù)不同的物質(zhì)分離。正相色譜與反相色譜固定相極性大于流動(dòng)相極性為正相色譜，反之為反相色譜常用反相色譜的固定相硅膠經(jīng)化學(xué)修飾,鍵合長(zhǎng)度不同

30、的烴基(R)、形成親油表面而成。根據(jù)烴基(-R)長(zhǎng)度為乙基(-C2H5)還是辛基(-C8H17)或十八烷基(-C18H37),分別命名為RP(reverse phase)-2、RP-8及RP-18。三者親脂性強(qiáng)弱順序如下:RP-18RP-8RP-2。 加壓液相色譜特點(diǎn)加壓流動(dòng)相，流速快載體顆粒小，機(jī)械強(qiáng)度大，比表面極大耐壓柱材自動(dòng)檢測(cè)、收集、分部 種類：快速色譜 Flash chromatography 2.02105Pa 低壓液相色譜 LPLC, 5.05105Pa中壓液相色譜 MPLC, 5.0520.2105Pa高壓液相色譜 HPLC, 20.2105Pa high performanc

31、e liquid chromatography 克服了簡(jiǎn)單萃取及CCD溶劑容量大、易乳化的缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)載體可能造成化學(xué)吸附，如硅膠4根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離透析法超濾法超速離心凝膠濾過(guò)法 gel filtration： 凝膠滲透色譜 gel permeation chromtography 分子篩濾過(guò) molecular sieve filtration凝膠濾過(guò)法 gel filtration： 凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用按分子量由大到小的順序分離原 理葡聚糖凝膠Sephadex G： 葡聚糖+交聯(lián)劑（環(huán)氧氯丙烷） 分子篩 水中應(yīng)用：分離蛋白質(zhì)、肽、多糖和苷類 分離水溶性成份 商品型

32、號(hào)按交聯(lián)度分類，以10倍吸水量（ml/g）表示羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20: Sephadex G-25羥丙基化所得 分子篩和反相色譜相結(jié)合 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用 水溶性、脂溶性成分都可分 凝膠的種類、性質(zhì)及應(yīng)用:OHOCH2CH2CH2OHSephadex GSephadex LH-20例：下列化合物分別為黃酮苷元及其單糖苷、雙糖苷，流經(jīng)Sephadex G 柱用水洗脫，寫出洗脫順序。離子交換樹(shù)脂為固定相，水，含水溶劑裝柱含水流動(dòng)相通過(guò)樹(shù)脂可交換離子與樹(shù)脂上的交換基團(tuán)交換，吸附到樹(shù)脂上 中性及無(wú)交換離子的成分流出將吸附到柱上的成分洗脫下來(lái) 洗脫液：稀酸或稀堿溶液離子交換原理5根據(jù)物質(zhì)離解程度不同分離進(jìn)行分離 離子交換法 球形顆粒，不溶于水，可在水中溶脹離子交換樹(shù)脂的性質(zhì)離子交換樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)母核離子交換基團(tuán)離子交換樹(shù)脂的種類陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)酸性（-SO3-H+） 弱酸性（-COO-H+） 陰離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)堿性（-N+（CH3）3Cl-） 弱堿性（-NH2，-NH-，-N=） 離子交換樹(shù)脂的應(yīng)用不同電荷離子的分離 如水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離相同電荷但解離程度不同離子的分離 如堿性不同的生物堿的分離 水