酶性質(zhì)-最適pH值測定

1、酶性質(zhì)一最適pH選擇姓名：俞華軍 班級：09級生科3班 學(xué)號：200900140157時間：2011/04/11實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庹莆諟y定酶最適pH的實(shí)驗(yàn)原理和方法了解酶的一般特性和性質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理酶的催化活性與環(huán)境PH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定PH范圍內(nèi)才有 活性，酶活性最高時的PH,稱為酶的最適PH。高于或低于此PH時酶的活性逐 漸降低。值得指出的是，不同的酶最適PH也不同，如胃蛋白酶的最適PH為 1.52.5,胰蛋白酶的最適PH為8。酶的最適PH不是一個特征性的物理常數(shù)，對于同一個酶，其最適PH因緩 沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。如唾液淀粉酶最適PH為6.8,但在磷酸緩沖 液中，其最適PH為6

2、.46.6，而在乙酸緩沖液中則為5.6。實(shí)驗(yàn)器材1.2.1.2.儀器：8支試管(15x15)、電磁攪拌器、水浴鍋、電磁加熱爐、沸水浴、 玻璃棒、錐形瓶(x9)、100ml容量瓶(x2)、吸管2ml (x2)、10ml (x2)、3ml (x3)、液槍 0.5ml (x2)、1.0ml (x2)、點(diǎn)樣板、吸管 (x2)、燒杯200ml (x2)、洗耳球、冰水??；3.材料：人口腔唾液淀粉酶。3.實(shí)驗(yàn)步驟1 .配制溶液A：配制0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液200ml，稱取143256g磷酸氫二鈉標(biāo)準(zhǔn) 試劑于300ml錐形瓶中，加入200ml蒸餾水充分溶解；B：配制0.1mol/L的檸檬酸溶液100

3、ml；稱取21g檸檬酸于200ml錐形瓶中， 加入100ml水充分溶解；C：配制0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液，稱取03g氯化鈉于200ml燒杯中，充 分溶解后，取出約20ml到100ml燒杯中，剩余的溶液放到電磁加熱爐上 加熱至沸，然后稱取05g淀粉加入到有20ml左右的少量氯化鈉溶液中， 用玻璃棒攪成糊狀后，加入到已煮沸的大量氯化鈉溶液中，充分?jǐn)嚢?，?淀粉完全溶解；D：配制唾液淀粉酶液，漱口后在嘴里含100ml蒸餾水30s1min后，倒于 200ml燒杯中，并置于冰水浴中保藏；E：用0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和0.1mol/L檸檬酸溶液配制PH為5.4,6.0， 6.4，6.8，7.

4、2，7.6，8.0的緩沖液，分別置于錐形瓶中并貼上標(biāo)簽：表一配制不同pH緩沖液所加試劑量表PH值5.46.06.46.87.27.68.00.2mNa PO 2411.1512.6313.8561.817.3918.7319.450.1m檸檬酸8.857.376.1518.22.611.270.55總體積/ml20202080202020測定保溫時間取一支試管，加入0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液2毫升，加入pH6.8磷酸氫二鈉 一檸檬酸鈉緩沖液3毫升，放入37C水浴鍋中保溫5min，隨后加入稀釋 100-300倍的唾液2毫升，并開始計(jì)時。充分搖勻后，放入37度水浴中保溫，每隔1分鐘用滴管取1滴

5、混合液，至于 點(diǎn)滴板上，加1滴碘液，檢驗(yàn)淀粉水解程度，待呈橙黃色時，為進(jìn)一步確定保 溫時間，應(yīng)加1滴碘液至試管中，若為橙黃色表示反應(yīng)完全，記錄所需保溫時 間。若2-3分鐘內(nèi)，取出的保溫液與碘液作用呈橙黃色，則說明酶活力太高，應(yīng) 再稀釋唾液淀粉酶，記錄稀釋倍數(shù)，若保溫時間超過15分鐘，說明酶活力太 低，要提高酶的濃度。最佳保溫時間8-15分鐘以內(nèi)，因此要掌握好唾液淀粉 酶的稀釋倍數(shù)，確定準(zhǔn)確的保溫時間才能進(jìn)行下步實(shí)驗(yàn)。最適pH的測定根據(jù)第二步中的保溫時間，取7支試管編號并加入0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶 液2毫升，再分別加入pH5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0磷酸氫二鈉一檸

6、 檬酸鈉緩沖液3毫升，放入37C水浴鍋中保溫5min；保溫后向1號試管內(nèi)加入有適宜保溫時間的唾液酶稀釋液2ml，充分搖勻后， 放入37度水浴中保溫，隨后每隔一分鐘向后一只試管加入唾液酶稀釋液2ml， 進(jìn)行同樣的操作。到保溫時間后(根據(jù)步驟2里的所測的保溫時間)，依次取出試管加入一滴碘 液檢測淀粉水解情況，從各管呈現(xiàn)的顏色，判斷不同PH對淀粉水解和淀粉酶 活性的影響,并確定其最適PH值。表二測定最適pH步驟表試劑(毫升)1234567PH值5.46.06.66.87.27.68.00.3%氯化鈉0.5%淀粉2222222相應(yīng)PH緩沖溶液3333333每隔1分鐘加入唾液淀粉酶液2222222充分搖

7、勻,37度水浴保溫，到達(dá)保溫時間后，每隔1分鐘依次取出立即加入碘液1滴，搖勻1111111記錄結(jié)果顏色深藍(lán)淡紫微紫偏黃淡黃微紫偏黃淡黃偏紫紫色實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋100倍后的酶在pH6.8條件下的保溫時間：12min17號試管的顏色分別為：深藍(lán)、淡紫、微紫偏黃淡黃、微紫偏黃、淡黃偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最適黃偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最適pH為68左右。2.實(shí)驗(yàn)圖片：六.實(shí)驗(yàn)分析及注意事項(xiàng)配制0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液時要注意不要把淀粉一下子全部加到氯化鈉溶 液中，而是先在少量氯化鈉溶液中變成糊狀后，加入到煮沸的大量氯化鈉溶液 中，否則不能溶解完全，影響時間結(jié)果。保溫時間指從加入酶液開始到從水浴中取出試管加入碘液的一段時間。摸準(zhǔn)保 溫時間是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟之一，保溫時間一定要控制好，盡量控制在812分 鐘，原始酶液不能棄掉，