鵝沙門氏菌的分離與鑒定沙門氏菌的分離和鑒定

1、鵝沙門氏菌的分離與鑒定沙門氏菌的分離和鑒定沙門氏菌病是一種重要的人畜共患病。目前,已發(fā)現(xiàn)的沙門氏菌的血清型有2000多種1、2。沙門氏菌屬中的許多類型細菌對人、畜以及其他動物均有致病性。各種年齡的動物均可感染，但幼年者較成年易感。近年來，沙門氏菌食物中毒和動物感染沙門氏菌十分嚴重。由腸炎沙門氏菌引起人的急性胃腸炎在世界各國有增加的趨勢，已成為國際公共衛(wèi)生的一個重要課題。沙門氏菌作為致病菌檢測的一項重要指標，在公共衛(wèi)生、食品衛(wèi)生、畜牧獸醫(yī)和出入境檢驗檢疫中均有重要意義。近年來，隨著抗菌藥物的濫用和不當使用，沙門氏菌病的耐藥性日趨嚴重,加強對該菌耐藥性的監(jiān)測力度和耐藥機制的研究迫在眉睫。2009年

2、3月，鳳陽某養(yǎng)殖戶飼喂的800多只10日齡鵝出現(xiàn)死亡，34d后死亡100多只，發(fā)病鵝主要癥狀有精神沉郁，臥地不起，眼瞼浮腫，食欲減退，飲水正常，排出綠色稀糊狀糞便并污染肛門周圍的絨毛、腿軟，有的病鵝出現(xiàn)呼吸道癥狀。剖檢可見：肝臟瘀血腫大，表面有彌漫性針尖至粟粒大的灰白色壞死灶。膽囊充盈，心肌、胰臟上有壞死灶，脾臟瘀血腫大，氣囊混濁有黃色干酪樣分泌物，心包膜增厚與心臟粘連，直腸內充滿綠色稀糞。為查明病因，控制該病，特進行病原的分離與鑒定。一、材料和方法.材料病料鳳陽某養(yǎng)殖戶送檢來的10只病死鵝。設備與器材隔水式恒溫培養(yǎng)箱、手提式壓力蒸汽、電爐、托盤天平、FA004型電子分析天平、搪瓷量杯、顯微鏡

3、、漏斗、記號筆、稱量紙、藥匙、鑷子、棉線、精密pH試紙及各種玻璃器皿等，以上儀器設備及器材均由安徽科技學院動物醫(yī)學實驗室提供。藥品與試劑各種培養(yǎng)基、革蘭氏染液、生化試劑、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、藥敏紙片等均由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。藥敏紙片（美滿霉素、阿米霉素、慶大霉素、卡那霉素、先鋒必素、氯霉素、菌必治、奧復星、麥迪霉素、四環(huán)素、新霉素、強力霉素、氨芐西林鈉、丁胺卡那霉素、恩諾沙星、）等均由安徽科技學院動物醫(yī)學實驗室提供。.方法細菌分離培養(yǎng)和形態(tài)學觀察細菌分離培養(yǎng)無菌取病死雞的肝臟組織分別劃線接種于麥康凱平板和SS瓊脂平板上，37培養(yǎng)24小時，分別取上述菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，

4、在油鏡下觀察細菌的形態(tài)及染色特性。觀察是否存在雜菌。對于已經(jīng)純化的細菌進行冷凍保存，未純化的重復劃平板、鏡檢，直至純化為止。培養(yǎng)特性觀察分別接種普通肉湯培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基，于37c恒溫箱內培養(yǎng)24h,觀察該菌的培養(yǎng)特性。生化試驗自制各種糖發(fā)酵管，取純培養(yǎng)物分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等生化管中，置于37恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1824h,觀察發(fā)酪管的反應情況。按要求自制各種生化試劑，取純培養(yǎng)物分別做糖發(fā)酵試驗、吲哚試驗、甲基紅試驗、尿素酶利用實驗、檸檬酸鹽利用試驗、半固體瓊脂試驗。藥敏試驗參照文獻進行。對分離到的菌株進行了藥敏試

5、驗，共檢測15種藥物，包括美滿霉素、阿米霉素、慶大霉素、卡那霉素、先鋒必素、氯霉素、菌必治、奧復星、麥迪霉素、四環(huán)素、新霉素、強力霉素、氨芐西林鈉、丁胺卡那霉素、恩諾沙星。結果判斷標準：抑菌圈直徑大于20mm為高度敏感，抑菌圈直徑在1020mm為中度敏感，抑菌圈直徑小于10mm為耐藥。二、結果.細菌分離培養(yǎng)麥康凱瓊脂平板上呈淡黃色透明,圓形微凸起,表面光滑濕潤，小菌落；SS瓊脂平板上半透明灰白色的菌落。.形態(tài)觀察結果在上述試驗中得到一株革蘭氏陰性單獨散在的小桿菌。.培養(yǎng)特性觀察結果該菌在麥康凱瓊脂呈淡黃色透明，光滑，邊緣整齊小菌落；在SS瓊脂上呈半透明灰白色的菌落；在伊紅美藍瓊脂上呈半透明、無

6、色的微隆起的表面光滑無金屬光澤的菌落；在普通肉湯培養(yǎng)基呈均勻一致渾濁，而且有沉淀；普通瓊脂培養(yǎng)基呈圓形、無色、半透明表面光滑小菌落。.生化試驗結果糖發(fā)酵試驗該菌可發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖、蔗糖，發(fā)酵麥芽糖僅產(chǎn)酸。三糖鐵底層呈黃色，斜面呈紅色呷噪試驗陰性，M-R試驗陽性，VP試驗陰性，能利用檸檬酸鹽，不能利用尿素酶，半固體瓊脂試驗表明該菌有鞭毛能運動。.藥敏試驗結果（見表1）三、討論近些年來,為了控制和預防某些細菌感染,在飼料添加劑及治療中常盲目使用一些抗菌藥物,導致產(chǎn)生許多耐藥菌株，像沙門氏菌就屬于此類細菌。迄今為止,沙門氏菌共有2000種以上的血清型，而且不同地區(qū)差別比較大，不相同的

7、菌株交叉之后不具有保護作用，極易產(chǎn)生耐藥性。由由試驗可知，該群鵝死亡的主要原因是由于感染了沙門氏菌，通過現(xiàn)場調查發(fā)病的主要原因可能是由該養(yǎng)殖戶為養(yǎng)鵝老戶，鵝舍為塑料大棚，棚內濕度大，衛(wèi)生條件差，鵝群密度大，糞便堆積通風不良，加之發(fā)病前溫度忽高忽低，飼料和飲水供應不良，在一定程度上誘發(fā)該病。表1藥敏試驗結果注：其他抗菌藥物如：美滿霉素、四環(huán)素、先鋒必素、氯霉素、菌必治、奧復星、麥迪霉素均為耐藥，故未列入。藥敏試驗結果表明，本次分離的沙門氏菌對新霉素、丁胺卡那霉素、氨芐西林鈉、恩諾沙星、阿米卡星高度敏感，強力霉素、卡那霉素中度敏感，而對美滿霉素、四環(huán)素、先鋒必素、氯霉素、菌必治、奧復星、麥迪霉素均耐藥。對余下的鵝進行選用丁胺卡那霉素飲水2d后，該群鵝疫情得到控制。目前，隨著耐藥菌株的產(chǎn)生,沙門氏菌對抗菌藥物的敏感性也越來越低,所以在治療本病時，臨床上應嚴格掌握抗菌藥物的適當使用，防止錯用，濫用抗菌藥，最好先進行