Thermo 分支桿菌藥敏檢測操作細(xì)節(jié)

1、ThermoFisher Scientific分支桿菌藥敏檢測細(xì)節(jié)介紹目錄分枝桿菌藥敏MIC板條介紹 -結(jié)核分枝桿菌藥敏板 -速生長分枝桿菌藥敏板 -慢生長分枝桿菌藥敏板板條操作流程與注意細(xì)節(jié)結(jié)果判讀與解釋報告結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌藥敏檢測結(jié)核分枝桿菌MIC藥敏板條快速生長分枝桿菌MIC藥敏板慢生長分枝桿菌MIC藥敏板結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌MIC藥敏檢測名稱藥敏檢測對象特點結(jié)核分枝桿菌MIC藥敏板結(jié)核分枝桿菌4種一線藥，8種二線藥每種藥各有7-8個濃度最快10天就能出結(jié)果慢速生長分枝桿菌MIC藥敏板緩慢生長的非結(jié)核分枝桿菌13種藥每種藥各有7-8個濃度7-14天出結(jié)果快速生長分枝桿菌MIC藥敏板快

2、速生長的分枝桿菌、諾卡氏菌、需氧放線菌15種藥每種藥各有7-8個濃度2-5天出結(jié)果Sensititre結(jié)核分枝桿菌MIC藥敏檢測板（MYCOTBI）包括一線和二線藥物（12種）一線藥物鏈霉素,異煙肼, 乙胺丁醇, 利福平二線藥物氧氟沙星，莫西沙星，阿米卡星，利福布汀，對氨基水楊酸，乙硫異煙胺，環(huán)絲氨酸，卡那霉素真實的MIC檢測Sensititre結(jié)核分枝桿菌MIC藥敏檢測板（MYCOTBI）OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB32816163216644025644032OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB16488168

3、322012822016OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB8244841610641108OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB41224285320.554OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB20.5112142.5160.252.52OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB10.250.50.510.521.280.121.21OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB0.50.120.250.250.50.2510.64

4、0.060.60.5OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHPOSPOS0.250.060.120.120.250.120.50.320.03CONCON抗生素OFL氧氟沙星MXF莫西沙星RIF利福平AMI阿米卡星STR鏈霉素RFB利福布汀PAS對氨基水楊酸ETH乙硫異煙胺CYC環(huán)絲氨酸INH異煙肼KAN卡那霉素POS陽性對照EMB乙胺丁醇快速生長分枝桿菌的MIC藥敏測試 RAPMYCO：適用于偶發(fā)分枝桿菌群（偶發(fā)分枝桿菌、外來分枝桿菌和偶發(fā)分枝桿菌第三生物變種）、龜分枝桿菌、膿腫分支桿菌、產(chǎn)粘液分枝桿菌和恥垢分枝桿菌群（恥垢分枝桿菌、顧德分支桿菌和沃林斯基分枝桿菌）、諾卡

5、氏菌屬和其它有氧放線菌藥敏檢測生長時間7天Amikacin阿米卡星1-64Amoxicillin / clavulanic acid阿莫西林/克拉維酸2/1-64/32Cefepime頭孢吡肟1-32Cefoxitin頭孢西丁4-128Ceftriaxone頭孢曲松4-64Ciprofloxacin環(huán)丙沙星0.12-4Clarithromycin克拉霉素0.03-16Doxycycline強(qiáng)力霉素0.12-16Imipenem亞胺培南2-64Linezolid利奈唑胺1-32Minocycline米諾環(huán)素1-8Moxifloxacin莫西沙星0.25-8Tigecycline替加環(huán)素0.015

6、-4Tobramycin妥布霉素1-16Trimethoprim / sulfamethoxazole甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲惡唑0.25/4.75-8/152快速生長的分枝桿菌MIC藥敏板15種抗生素，適用于快生長分枝桿菌、諾卡氏菌、需氧放線菌，如M. fortuitum group 偶然分枝桿菌群M. chelonae/abscessus group 龜/膿腫分枝桿菌群M. smegmatis group 恥垢分枝桿菌群Amikacin阿米卡星1 - 64Ciprofloxacin環(huán)丙沙星0.12-16Clarithromycin克拉霉素0.06 - 64Doxycycline強(qiáng)力霉素0.12

7、 - 16Ethambutol乙胺丁醇0.5-16Ethionamide乙硫異煙胺0.3 - 20Isoniazid異煙井0.25-8Linezolid利奈唑胺1 - 64Moxifloxacin莫西沙星0.12 - 8Rifampin利福布汀0.12 - 8Rifabutin 利福平0.25 - 8Streptomycin鏈霉素0.5 - 64Trimethoprim / sulfamethoxazole甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲惡唑0.12/2.38 - 8/152緩慢生長分枝桿菌MIC藥敏板13種抗生素，適用于慢生長分枝桿菌，如M. marinum 海洋分枝桿菌M. kansasii 堪薩斯分

8、枝桿菌M. avium complex (MAC) 鳥分枝桿菌復(fù)合群Sensititre分枝桿菌藥敏分析系統(tǒng)樣品制備菌液比濁菌液接種結(jié)果判讀Viewer手工判讀系統(tǒng)Vizion自動微生物藥敏分析系統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌藥敏MIC測試帶玻璃珠的吐溫鹽水 1、配置菌懸液（固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌株）：0.5 McFarland 2、漩渦震蕩器混懸1-2分鐘 3、取100 uL 到肉湯中。肉湯(Middlebrook 7H9 with OADC) 1、混勻1-2分鐘 2、藥敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、 35-37 0C 孵育10天，觀察結(jié)果；如有必要再次孵育11天。注意事項選取的結(jié)核分枝桿菌落

9、菌齡不能超過5周。菌懸液要充分靜置后才能進(jìn)行濁度測試?？蛇x取兩支鹽水管，一只配制較高濃度菌懸液后，充分靜置后取上部懸液于另一鹽水管配制菌懸液。為保證板卡封膜效果，可在板卡四周使用透明膠帶加固封膜效果接種剩余的菌懸液需接種到血平板上進(jìn)行培養(yǎng)，以排除污染存在。定期應(yīng)進(jìn)行陽性對照孔中接種物菌液濃度檢查板卡堆疊不能超過2塊?？旆种IC藥敏測試操作無菌去離子水 1、配置菌懸液（固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌株）：0.5 McFarland 2、充分漩渦震蕩 3、取50 uL 到肉湯中。肉湯(Mueller Hinton with TES) 1、混勻1-2分鐘 2、藥敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、

10、培養(yǎng)： 快速生長型分枝桿菌-在非 CO2 培養(yǎng)箱 -30- 72 小時(如生長不佳，則繼續(xù)培養(yǎng)48h后看結(jié)果) 諾卡氏菌,有氧放線菌-在非 CO2 培養(yǎng)箱 -35C - 23 天 無菌去離子水 1、配置菌懸液（固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌株）：0.5 McFarland 2、充分漩渦震蕩 3、取50 uL 到肉湯中。肉湯(Mueller Hinton with 5% v/v OADC) 1、混勻1-2分鐘 2、藥敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、非CO2 孵箱，35下培養(yǎng)7天后開始讀取結(jié)果，如果陽性對照生長情況良好，讀取結(jié)果。否則，重新培養(yǎng)最多14 天。 慢分枝MIC藥敏檢測注意事項放線菌

11、通常為具有堅硬外殼的菌落?？赡苡斜匾c玻璃珠一起進(jìn)行渦旋振蕩，以獲取均一懸液。如果渦旋震蕩后依然殘存大的團(tuán)塊，應(yīng)當(dāng)使其沉降，并取上清配制懸液。如使用含有吐溫的水可能會對 MIC 造成影響。含有 32g/ml多西環(huán)素或米諾環(huán)素的藥敏板孔位可能會在培養(yǎng)后出現(xiàn)沉淀?？梢栽谔砑尤鉁凹尤?5l 無菌蒸餾水進(jìn)行復(fù)溶，避免沉淀出現(xiàn)。CLSI 建議將無色素、快速生長型分枝桿菌培養(yǎng) 14 天，確?？梢詸z測出誘導(dǎo)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥性，除非在較早階段已表現(xiàn)出此種耐藥性。定期應(yīng)進(jìn)行陽性對照孔中接種物菌液濃度檢查板卡堆疊不能超過3塊注意事項延長培養(yǎng)時間可能需要采取相應(yīng)措施以避免每個微孔內(nèi)容物因揮發(fā)而造成損失。將平

12、板置于頂部半開的塑料容器中，以促進(jìn)氣體交換。結(jié)果判讀判讀時應(yīng)首先讀取陽性生長對照孔。如果在陽性生長對照孔中未出現(xiàn)生長，則結(jié)果無效。在判讀結(jié)核分枝桿菌異煙肼，利福平，莫西沙星，氧氟沙星，環(huán)絲氨酸，阿米卡星和卡那霉素藥敏結(jié)果時，其MIC值時為該抗生素生長明顯抑制，完全無生長跡象的最低抗生素濃度。而在判讀鏈霉素，乙硫異煙胺，對氨基水楊酸，利福布汀和乙胺丁醇時，其MIC值為該抗生素生長受到約80%抑制的最低抗生素濃度。在判讀非結(jié)核分枝桿菌藥敏結(jié)果時，除磺胺類藥物之外，MIC值是指完全抑制生長的最小濃度，而磺胺類藥物MIC值是能夠抑制80%生長的最低濃度。利奈唑胺可能會出現(xiàn)拖尾生長，其最低抑菌濃度為開始

13、拖尾的第一個濃度。結(jié)果的判讀陽性對照孔至少是2+才能開始記錄MIC值疑問如果檢測菌株陽性對照孔超過最大孵育天數(shù)（快分枝5天，結(jié)核，慢分枝21天）而不能生長，該如何處理？如果無法生長，應(yīng)報告不能在可接受的時間內(nèi)生長和/或重復(fù)測試或采用其他方法。個別膿腫分枝桿菌復(fù)合群分離株在肉湯中生長非常緩慢，對于這些分離培養(yǎng)株培養(yǎng)長達(dá)14天是必須的，但是，由于抗菌藥物的不穩(wěn)定性，這種情況只有克拉霉素和阿米卡星可以報告結(jié)果，且需要添加相應(yīng)的注釋。（來源于行業(yè)領(lǐng)域內(nèi)專家的說明） 快分枝和奴卡復(fù)方新諾明應(yīng)讀取80%抑制利奈唑胺的拖尾生長結(jié)核分枝桿菌圖中的1、2、3列為100%抑制圖示，5,6,7列為80%抑制圖示跳孔

14、造成跳孔可能的原因：菌液不均勻，檢測板疊放過多導(dǎo)致的溫度不均勻，一些難生長菌生長不良容易導(dǎo)致跳孔（耐藥菌）結(jié)果解釋-快速生長NTM藥敏板抗生素速生型分枝桿菌復(fù)合群判讀標(biāo)準(zhǔn)（ug/mL）（參考CLSI M24 Table 7）諾卡菌和其他需氧放線菌判讀標(biāo)準(zhǔn)（ug/mL）（參考CLSI M24 Table 9）名稱縮寫SIRSIR莫西沙星MXF124124阿米卡星AMI1632648-16阿莫西林/克拉維酸AUG2待定8/416/832/16頭孢吡肟FEP待定81632頭孢西丁FOX1632-64128待定頭孢曲松AXO待定816-3264環(huán)丙沙星CIP124124克拉霉素CLA248248強(qiáng)力霉

15、素（多西環(huán)素）DOX12-4812-48亞胺培南IMI48-16324816利奈唑胺LZD816328-米諾環(huán)素MIN待定12-48替加環(huán)素TGC待定待定妥布霉素TOB2484816甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲惡唑SXT2/384/762/38-4/76結(jié)果解釋-M.kansasii結(jié)果解釋-MAC結(jié)果解釋-除MAC和M.kansasii之外的慢分枝結(jié)果解釋-慢生長NTM藥敏板抗生素鳥分枝桿菌復(fù)合群判讀標(biāo)準(zhǔn)（ug/mL）（參考CLSI M62 Table 3）堪薩斯分枝桿菌判讀標(biāo)準(zhǔn)（ug/mL）（參考CLSI M62 Table 4）其余的慢生長分枝桿菌判讀標(biāo)準(zhǔn)（ug/mL）（參考CLSI M62 T

16、able 5）抗生素縮寫SIRSIR提示海分枝桿菌耐藥MIC（ug/mL）利福平RIF待定1212異煙肼INH待定待定待定鏈霉素STR待定待定待定乙胺丁醇EMB待定待定待定莫西沙星MXF124124124利福布汀RFB待定2-42-4阿米卡星(IV)AMI163264163264163264阿米卡星(liposomal,inhaled)AMI64128163264163264乙硫異酰胺ETH待定待定待定環(huán)丙沙星CIP待定124124克拉霉素CLA816328163281632強(qiáng)力霉素（多西環(huán)素）DOX待定12-4812-48甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲惡唑SXT待定2/38-4/762/38-4/76利奈唑