腎氣丸劑量配比變課件

1、 腎氣丸劑量配比變化對腎損傷大鼠腎功能影響的研究 研究生姓名 鄭興剛 指 導 教 師 陶漢華 教授 論文框架理論探討 一 腎氣丸方藥相關問題探討 二 腎氣丸組方思想探討 三 腎氣丸的組方特點 四 腎氣丸成方的現(xiàn)代藥理研究 五 歷史上腎氣丸劑量配比變化的文獻考證 六 腎氣丸抗慶大霉素腎毒性的作用實驗研究 一 實驗目的 二 實驗材料 三 實驗方法 四 實驗結(jié)果 一 腎氣丸方藥相關問題探討（一） 方名 腎氣丸因首見于金匱要略，故又有“金匱腎氣丸”之稱，在原著中該方主治五種病癥有三種稱謂，治腳氣入腹者名為崔氏八味丸；治虛勞腰痛者名為八味腎氣丸；治痰飲、消渴、女子轉(zhuǎn)胞者名為腎氣丸，方名雖異，實為一方。（

2、現(xiàn)在市場上銷售的金匱腎氣丸并非仲景原方，而與南宋嚴用和的濟生腎氣丸比較接近。兩者的不同在于嚴氏的濟生腎氣丸中用酒浸的川牛膝、酒蒸的車前子及炒山藥，而金匱腎氣丸在現(xiàn)行國家標準中所用牛膝不用炮制、車前子用鹽炙且山藥也不炒用?，F(xiàn)在市場上銷售的與仲景腎氣丸原方比較接近一點的還有桂附地黃丸，但桂附地黃丸所用地黃為熟地黃，肉桂及附子的量也與仲景原方不同。）腎氣丸方藥相關問題探討（二）藥物組成 在金匱要略中腎氣丸組成見于二處，先見于中風歷節(jié)病脈證并治第五，后見于婦人雜病脈證并治第二十二，其藥味組成、用量及制法完全相同。對于方中干地黃是后世的生地黃還是熟地黃有不同的認識。據(jù)神農(nóng)本草經(jīng)、別錄、本草綱目和全國中藥

3、炮制規(guī)范、實用中藥炮制學等的相關記載，可以看出名醫(yī)別錄所載生地黃與徐大椿所說的生地黃一致，乃新掘的地黃鮮根莖即當前所用的鮮地黃不是生地黃；（仲景腎氣丸中所用干地黃與本經(jīng)、本草綱目及徐大椿所說的干地黃一致，相當于當前所用之生地黃不是熟地黃。） 對仲景方中所用“桂枝”一藥，歷代醫(yī)家的認識頗不一致。醫(yī)圣制方用藥多以本經(jīng)之藥物學知識為基礎。整部傷寒雜病論共用本經(jīng)所載藥物達136種，占該書用藥總數(shù)的80%以上，其中不載于本經(jīng)的30余種藥物均被名醫(yī)別錄一一收載。仲景方中用桂枝者達74首之多，但本經(jīng)、名醫(yī)別錄甚或唐以前的本草著作中卻查無此名，出現(xiàn)鮮見的方劑用藥與本草記載相脫離的情況。眾所周知，方藥之間的源流

4、發(fā)展關系，方劑是由單味藥到多味藥的反復運用中形成的，為中醫(yī)用藥治病的一大飛躍。仲景絕不可能在前人對桂枝一藥毫無認識的情況下，即能對此運用變化得心應手，同時，也不可能于仲景廣泛使用此藥后的幾百年間，諸多的本草著作連起碼的記載也沒有。（三）服用方法 在金匱要略中腎氣丸服用方法有兩種：一為“酒下十五丸，日再服”，一是“酒下十五丸，加至二十五丸，日再服”，這體現(xiàn)了根據(jù)體質(zhì)的個體差異、病情輕重和服藥反應而用量不同。 服藥用酒送服者在傷寒雜病論中除腎氣丸外還有薯蕷丸、九痛丸、赤丸、大黃蜇蟲丸、天雄散、侯氏黑散、土瓜根散、當歸芍藥散、當歸散及白術(shù)散。酒在經(jīng)方中是頗為常用的一味藥物，歸納仲景用酒之法可主要分為

5、水酒同煮、以酒代水、以酒洗藥、以酒浸藥、以酒煮丸和以酒下丸（散）六種情況。酒在經(jīng)方中主要發(fā)揮了活血通脈、溫通陽氣、驅(qū)除寒邪、醒脾除濕及助行藥力的作用。 （腎氣丸用酒送服，首先從藥物化學來看，因中藥的有效成分主要分為水溶性、脂溶性和醇溶性三種，很多脂溶性和醇溶性成分只有在含醇溶劑中才能較好地溶出，所以腎氣丸用酒送服能促進有效成分的溶出和利用。其次從現(xiàn)代藥理學來看，因酒可以擴張血管，促進血液循環(huán)，增加腎臟濾過量，使小便排泄量明顯增加，所以腎氣丸用酒送服既可以促進其有效成分的吸收、轉(zhuǎn)運及代謝又可以利小便，對腎氣丸所治病證的小便不利之癥有治療作用。）腎氣丸方藥相關問題探討 分析腎氣丸在原書中治療的五種

6、病證，癥狀表現(xiàn)中均出現(xiàn)了小便的改變，其中四處小便不利，一處 (男子消渴)小便反多，其病機均系腎氣虛弱致使“腎主水液”功能異常而不能化氣行水或化氣攝水。素問上古天真論曰：“氣脈常通而腎氣有余”，反之腎氣虛弱也多會伴有血脈失暢的病理改變。金匱要略水氣病篇云:“經(jīng)為血,血不利則為水”, 所以金匱要略中腎氣丸證可因腎氣虛弱，血脈失暢而水氣不利，這也即血證論所云“瘀血化水”之意，當然水氣不利也會反過來加重血脈的失暢，而使兩者互為因果，即如金匱要略心典所說的“水分者，因水而病及血也”。牡丹皮在腎氣丸中的作用 本經(jīng)載牡丹皮曰: “除徵堅瘀血”，所以可以用牡丹皮活血以利水，也能減輕水氣不利引起的血行不暢，現(xiàn)代

7、藥理研究也證實牡丹皮的有效成分牡丹皮酚有利尿作用，且在腎臟中的作用部位可能與氫氯噻嗪不同。近代醫(yī)家張錫純謂：“腎氣丸為補腎之藥，實兼為開瘀血之藥”也指出了腎氣丸蘊含的活血化瘀利水的意味。宋國維在臨床上以活血化瘀行水法治療小兒腎病綜合征，能取得消除水腫的目的，并且有較好的降低蛋白尿的作用。（所以腎氣丸中牡丹皮之作用作活血利水理解，既有理論依據(jù)，又有臨床意義，實乃仲景制方之本義。）（六）腎氣丸化裁方 （六）腎氣丸化裁方 牡丹皮在腎氣丸中的作用二、腎氣丸組方思想探討 腎氣丸一直以來是被大多數(shù)醫(yī)家公認的一首補腎名方，但對于仲景創(chuàng)制腎氣丸的組方思想一直存有不同認識，加之現(xiàn)在對腎臟精氣陰陽的認識上也存在一

8、些分歧，這就造成了很多醫(yī)家學者對腎氣丸認識上的模糊及應用上的不恰當。為了能較正確地理解仲景腎氣丸的原創(chuàng)思想以便更好地應用之，首先對腎陰虛、腎陽虛和腎氣虛的概念含義簡要分析如下。腎氣丸組方思想探討（二）從中醫(yī)的“氣分陰陽”觀談腎陰虛、腎陽虛、腎氣虛 春秋戰(zhàn)國至秦漢時期，古代哲學家為了揭示宇宙萬物發(fā)生發(fā)展變化的規(guī)律和終極原因，隨著陰陽概念的產(chǎn)生，便引入陰陽的概念并把其與氣的概念相結(jié)合，這樣哲學上“氣分陰陽”的觀念便逐漸形成，繼而以陰陽二氣的升降聚散運動來闡釋宇宙萬物生成發(fā)展變化的規(guī)律和終極原因。 在醫(yī)學領域，古代醫(yī)家在醫(yī)學實踐的基礎上，為了更好的認識人體，解釋生命現(xiàn)象，從而進行更有成效的醫(yī)療實踐，

9、就把哲學上的“氣分陰陽”觀引入醫(yī)學方面，這樣便形成了中醫(yī)學上的氣分陰陽觀。如內(nèi)經(jīng)載“陰陽者，天地之道也，萬物之綱紀，變化之父母，生殺之本始?！薄?“人生有形，不離陰陽?！钡取埦霸姥?“天地之道，以陰陽二氣而造化萬物;人生之理，以陰陽二氣而長養(yǎng)百骸”。目前從現(xiàn)代醫(yī)學的認識來看，無論從各系統(tǒng)的實體還是功能來看無疑“氣分陰陽”觀都是非常正確的，如存在凝血因子也存在抗凝血因子、存在利尿激素也存在抗利尿激素，凝血系統(tǒng)功能異?？砂l(fā)生出血性疾病也可發(fā)生凝血性疾病等等都體現(xiàn)了陰陽的對立統(tǒng)一性。 在中醫(yī)學氣分陰陽觀的影響下，內(nèi)經(jīng)已明確指出了氣具有陰陽兩個方面的功能。靈樞決氣曰:“上焦開發(fā),宣五谷味,熏膚,充身

10、,澤毛,若霧露之溉,是謂氣”。其中的“熏膚”就是“氣”中之“陽”的溫煦作用；“澤毛”、 “若霧露之溉”就是“氣”中之“陰”的濡潤滋養(yǎng)作用。靈樞終始云:“少氣則陰陽俱不足,補陽則陰竭,瀉陰則陽脫。如是者,可將以甘藥”。對氣虛表現(xiàn)出陰陽俱虛者,提出了陰陽雙調(diào)的治療原則。難經(jīng)三十七難也提出:“人氣內(nèi)溫于藏腑,外濡于腠理”。其中“溫”與“濡”也是指氣具有的陰陽雙重功能。可見內(nèi)經(jīng)、難經(jīng)都有對 “氣分陰陽”觀的深刻體現(xiàn)。后世很多醫(yī)家對“氣分陰陽”論點也有發(fā)揮,如王肯堂指出:“陰陽各因其對待而言之。形與氣對,則以形為陰,氣為陽;寒與熱對,則以寒為陰,熱為陽;升與降對,則以降為陰,升為陽;動與靜對,則以靜為陰

11、,動為陽一氣之中而有陰陽,寒熱升降動靜備于其間?！?；清石壽棠亦說:“陰陽互根,本是一氣,特因升降而為二耳?！?；明汪機亦有“陰中有陽,陽中有陰,陰陽同一氣也”之論?？梢姟皻夥株庩枴庇^是中醫(yī)學氣學理論的本意。因此,作為五臟之氣亦應包括陰陽兩個方面。從中醫(yī)的“氣分陰陽”觀談腎陰虛、腎陽虛、腎氣虛（三）歷代醫(yī)家對腎氣丸組方思想的不同認識 歷代醫(yī)家對腎氣丸組方思想有著不同的認識，歸納其主要觀點，可歸為三類。1補腎陽說 2.補腎氣說 3.其它學說（四）腎氣丸組方思想淺釋 雖然對仲景創(chuàng)制腎氣丸之組方思想有上述多種觀點，且其中補腎陽之說已成思維定勢，被大多數(shù)醫(yī)家學者所接受，但這些觀點均十分值得商榷。 1.溫補

12、腎陽，于理不符 第一，腎氣丸溫補腎陽說的理論基礎是“陰中求陽”理論，“陰中求陽”乃明代醫(yī)家張景岳根據(jù)陰陽互根、腎命水火等理論，效素問陰陽應象大論“從陰引陽，從陽引陰”之法，用來治療陽虛的著名辨證補益理論?！瓣幹星箨枴敝委熕枷胧顷庩柣ジP系在中醫(yī)治療上的運用和體現(xiàn)，即在治療陽偏衰時，在扶陽劑中佐用滋陰藥，即張景岳：“故善補陽者，必于陰中求陽，則陽得陰助而生化無窮”，“此陰陽相濟之妙也”?！瓣幹星箨枴狈ㄊ菗?jù)陰陽互根提出的補虛變法，亦是有效的藥物配伍規(guī)律。 體現(xiàn)“陰中求陽”思想的方劑乃張景岳之右歸丸，但仔細探究右歸丸，不難發(fā)現(xiàn)，右歸丸中乃使用大量補陽藥，少量補陰藥來達到“陰中求陽”的目的，而腎氣丸的

13、方劑組成是用大量補陰藥配以少量補陽藥，因此若將腎氣丸也作為“陰中求陽”的方劑，如此則讓人難以理解究竟是用大量補陰藥配少量補陽藥是謂 “陰中求陽”，還是用大量補陽藥配少量補陰藥才謂“陰中求陽”。分析張景岳之“陰中求陽”理論，既為“求陽”，當然針對的是陽虛病證，既然陽虛，當然就當重用補陽藥以補陽，而不該重用補陰藥以補陰，因為若為陽虛，則易生內(nèi)寒，陽虛內(nèi)寒再重用寒涼滋膩之補陰藥，則易壅遇陽氣，加重病情。而以補陽為主，佐以補陰，方才能體現(xiàn)“冶病求本”、“陰陽互根”的思想。因此“陰中求陽”是指針對陽虛病證，以大量的補陽藥為主，佐以少量補陰藥進行治療的一種治法，正如景岳所言：“善補陽者，必于陰中求陽，陽得

14、陰助則化生無窮”， 必是張景岳在使用仲景之腎氣丸治療腎陽虛的病證難奏良效，才另制右歸丸主用補陽藥補陽，又根據(jù)內(nèi)經(jīng)“陰陽互根陰生陽長”的理論指導，佐加少量補陰藥達到“陰中求陽”的目的，且又可避免純陽辛燥傷陰之弊以達到補腎陽的目的，因此可說張景岳 “陰中求陽”學術(shù)思想是受到了仲景的啟發(fā)，但真正體現(xiàn)“陰中求陽”思想的方劑是右歸丸而非腎氣丸 ，所以說腎氣丸并非“陰中求陽”之劑。 體現(xiàn)“陰中求陽”思想的方劑乃張景岳之右歸丸，但仔細探究右歸丸，不難發(fā)現(xiàn)，右歸丸中乃使用大量補陽藥，少量補陰藥來達到“陰中求陽”的目的，而腎氣丸的方劑組成是用大量補陰藥配以少量補陽藥，因此若將腎氣丸也作為“陰中求陽”的方劑，如此

15、則讓人難以理解究竟是用大量補陰藥配少量補陽藥是謂 “陰中求陽”，還是用大量補陽藥配少量補陰藥才謂“陰中求陽”。分析張景岳之“陰中求陽”理論，既為“求陽”，當然針對的是陽虛病證，既然陽虛，當然就當重用補陽藥以補陽，而不該重用補陰藥以補陰，因為若為陽虛，則易生內(nèi)寒，陽虛內(nèi)寒再重用寒涼滋膩之補陰藥，則易壅遇陽氣，加重病情。而以補陽為主，佐以補陰，方才能體現(xiàn)“冶病求本”、“陰陽互根”的思想。因此“陰中求陽”是指針對陽虛病證，以大量的補陽藥為主，佐以少量補陰藥進行治療的一種治法，正如景岳所言：“善補陽者，必于陰中求陽，陽得陰助則化生無窮”， 必是張景岳在使用仲景之腎氣丸治療腎陽虛的病證難奏良效，才另制右

16、歸丸主用補陽藥補陽，又根據(jù)內(nèi)經(jīng)“陰陽互根陰生陽長”的理論指導，佐加少量補陰藥達到“陰中求陽”的目的，且又可避免純陽辛燥傷陰之弊以達到補腎陽的目的，因此可說張景岳 “陰中求陽”學術(shù)思想是受到了仲景的啟發(fā)，但真正體現(xiàn)“陰中求陽”思想的方劑是右歸丸而非腎氣丸 ，所以說腎氣丸并非“陰中求陽”之劑。 第二，觀前文所列腎氣丸在金匱要略中所治病癥的所有條文，均未提出典型的虛寒癥狀，何來仲景制方專為補腎陽之說呢？ 第三，從腎氣丸藥量而言，溫熱之性的桂枝、附子僅占總量的227，以此溫補腎陽，顯然力有不足。正因為腎氣丸不具有明顯的溫補腎陽功效，故很多醫(yī)家凡以補腎陽為目的而使用該方時，故常不同程度的增大桂附用量，例

17、如千金方、局方、奇效良方等。并常把生地黃易為熟地黃并常添置巴戟天、鹿茸等補陽藥物。綜上所述認為腎氣丸的組方思想為溫補腎陽，即難以解釋其組方意義，更不符合臨床實際。 2.補腎氣及其它學說，以偏概全 補腎氣及其它學說均突出了腎氣丸的“補”字,均只是在不同方面揭示了腎氣丸的組方思想，不能全面表達仲景制腎氣丸之本意，也容易讓人產(chǎn)生誤解。很顯然在腎氣丸方中占很大比例發(fā)揮重要作用的澤瀉、茯苓、牡丹皮三味藥物并不具有明顯的補益之功。 3.腎氣丸組方思想乃調(diào)復腎氣 如上文所述腎氣丸在金匱要略原著條文中共出現(xiàn)五次，分別治療五種病證。分析腎氣丸治療的這五種病證，病證雖異,但其病機相同,即均屬腎氣虛弱, 在癥狀表現(xiàn)

18、中均出現(xiàn)了小便的改變,其中四處小便不利系“腎主水液”功能異常不能化氣行水所致;一處 (男子消渴)小便反多系“腎主水液”功能異常不能化氣攝水所致。腎主水液,是指腎具有蒸化和調(diào)節(jié)津液輸布和排泄,以維持體內(nèi)水液正常代謝的功能。體內(nèi)的水液,來源于胃的受納,經(jīng)脾的轉(zhuǎn)運,肺的通調(diào),腎的蒸化,以三焦為通道,輸布全身，代謝后的津液,則化為汗液、尿液等排出體外。這個過程,必須通過腎的蒸騰氣化作用才能完成。如果腎的氣化功能受到影響,水液代謝的調(diào)節(jié)發(fā)生障礙,可引起尿少、尿閉而致水腫;也可因腎不能固攝水液,出現(xiàn)小便清長、夜間多尿等病理改變。三、腎氣丸的組方特點 （一）陰陽并補，注重比例 中醫(yī)有“腎無實證”說，強調(diào)了腎

19、臟疾病大都是以腎精不足引起的功能異常。如上文所述腎陽精相對不足引起腎陽虛、腎陰精相對不足引起腎陰虛、腎精陰陽俱不足而又相對平衡引起腎氣虛。如上文所述仲景原書中腎氣丸所治五種病證，病雖異但證相同,均為腎氣虛證，所以仲景用生地黃、山藥、山茱萸補腎陰精，肉桂、附子補腎陽精，以使腎精充足，氣化有源。仲景在補益腎臟不足之腎精時，妙處在于補陰精藥多而重，補陽精藥少而輕，用大量補陰精藥配以少量補陽精藥而不是等量用藥，以順應腎臟的生理特性。腎臟五行屬水，主藏精，喜潤惡燥，若用大劑量桂枝、附子補陽精，其燥熱之性必耗及腎陰精，或火熱擾及精室迫精外泄，或燥化太過，使心火偏亢，心腎不濟，亦即內(nèi)經(jīng)的“壯火食氣”之理。

20、這一點被后世醫(yī)家十分強調(diào)，并多用“微微生火”來解釋，如柯琴云：“腎氣丸納桂、附于滋陰劑中十倍之一，意不在補火，而在微微生火”。 （二）補瀉結(jié)合，標本兼 腎氣丸在金匱要略中所致病癥均是由于腎精不足，精不化氣，引起腎主水功能異常，而出現(xiàn)小便異常之癥，所以仲景用生地黃、山萸肉、山藥補腎陰精，用肉桂、附子補腎陽精以治本，而使腎精酒利水以治標而解決小便異常之癥，所以腎氣丸實屬補瀉結(jié)合，標本兼治之劑。（四）用藥精當，多向調(diào)節(jié) 本方組方嚴謹，用藥精當，配伍巧妙，體現(xiàn)出組方從補瀉、寒熱、氣血、陰陽及多臟并調(diào)等多方面著手的特點，可多系統(tǒng)、多環(huán)節(jié)、多向調(diào)節(jié)人體功能，如方中山茱萸配澤瀉補瀉兼施；山藥配茯苓固利相合；

21、附子配丹皮寒熱并調(diào)；附子配生地黃陰陽相合；桂枝配丹皮氣血并治；桂枝配茯苓氣水并調(diào)；丹皮配茯苓血水兼治等。方中以生地黃滋補腎陰，山茱萸補益肝陰，山藥補益脾肺之陰，以澤瀉瀉腎水而不傷腎氣，丹皮活血以利水，茯苓健脾而滲濕，利水而不傷正。諸藥相和，可共湊調(diào)腎肝肺脾四臟功能，有開有合，寓瀉于補，使補不助火，補而不膩，瀉水而不傷正。四、腎氣丸成方的現(xiàn)代藥理研究 五、歷史上腎氣丸劑量配比變化的文獻考證 歷史上有些醫(yī)家根據(jù)自己對腎氣丸的不同理解和臨床需要對其劑量配比進行了一定的調(diào)整，對后世影響比較大的主要為以下幾部著作。 東晉葛洪的肘后備急方在治虛損贏瘦不堪勞動方第三十三提到張仲景八味腎氣丸方療虛勞不足大傷飲

22、水腰痛小腹急，小便不利，在其論述中干地黃為四兩，附子澤瀉各一兩，其余藥物各為二兩。 唐代王燾的外臺秘要卷十一中運用八味腎氣丸治療消渴，并稱之為“神方。其八味腎氣丸劑量不同于仲景原方，其中山茱萸用到五兩，澤瀉四兩，桂附各三兩，其余同原方不變。 千金要方、太平惠民和劑局方和奇效良方中腎氣丸用桂附各二兩，其余藥物劑量同原方。 清代，在醫(yī)學從眾錄中腎氣丸用附桂各五兩，其余六味各減半。在醫(yī)方集解中桂枝三兩，附子四兩。血證論中為附子三兩、桂枝二兩、茯苓、澤瀉各四兩、丹皮五兩、其余同原方。 皇漢醫(yī)學中腎氣丸附、桂各0.9克，干地黃3.5克，山藥，山茱萸各1.5克，丹皮、茯苓各1.3克；近代方劑書，亦有將附子

23、增大到原方四倍，桂枝增大到原方三倍，而其他藥之劑量不變者. 綜上所述歷代很多醫(yī)家早已注意到了腎氣丸的劑量配比與藥效關系問題，所以本論文通過試驗方法探討腎氣丸在抗實驗性腎損傷方面的劑量配比與藥效關系問題，具有較客觀的參考價值。 六、腎氣丸抗慶大霉素腎毒性的作用實驗研究 一、實驗目的 研究腎氣丸劑量配比變化對慶大霉素腎損傷大鼠血清肌酐(Cr)、血清尿素氮(BUN)及腎組織病理學的影響，進一步探討腎氣丸劑量配比變化對藥效的影響，以探求腎氣丸最佳劑量配比。 二、實驗材料 （一）實驗動物 成年雄性健康Wistar大鼠48只，體重18020g，合格證號：SCXK（魯）20050015（山東中醫(yī)藥大學實驗動

24、物中心提供）。動物飼料用普通飼料, 合格證號：SCXK(魯)20090014（山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供）。實驗研究 （二）主要儀器設備 半自動生化分析儀（型號：Microlab300;廠商：荷蘭威圖科學公司）Leica QWinV3圖像分析系統(tǒng)，雙目顯微鏡，載玻片，電子天平，灌胃器，注射器，50ml量杯，1000ml燒杯，恒溫水浴鍋，玻璃棒，大鼠解剖臺，手術(shù)器械等。均由山東中醫(yī)藥大學實驗中心提供。實驗研究 （三）實驗試劑 肌酐、尿素氮試劑盒，均購自南京建成生物有限公司；慶大霉素批準文號：國藥準字H37021973，產(chǎn)品批號： 090727301，規(guī)格：2ml：8萬u支，生產(chǎn)單位：山東魯抗

25、辰欣藥業(yè)股份有限公司；04臺盼蘭液；苦味酸；美藍染料；生理鹽水；蒸餾水等。 （四）中藥制劑 腎氣丸：生地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮、肉桂、附子。以上中藥均購自山東中醫(yī)藥大學中魯醫(yī)院。 三、實驗方法 （一）實驗設計 將腎氣丸設為4個因素，每個因素為一組，A組：生地黃、山茱萸；B組：山藥、茯苓；C組：澤瀉、牡丹皮；D組：肉桂、附子，每個因素設2個水平進行比較試驗（見表1） 由于要觀察A、B兩因素交互作用，選擇正交表為 L8（27）（見表2）。 以上設計把腎氣丸分為ABCD四個因素，ABCD四個因素分別分成A1A2B1B2C1C2D1D2八個水平組。即A1水平組為生地黃8份、山茱萸4份；A

26、2水平組為生地黃4份、山茱萸4份；B1水平組為山藥4份、茯苓3份；B2水平組為山藥3份、茯苓3份；C1水平組為澤瀉3份、牡丹皮3份；C2水平組為澤瀉3份、牡丹皮2份；D1水平組為肉桂1份、附子1份；D2水平組為桂枝2份，附子2份。動物實驗所用藥材按人體常用劑量折算為每份為3 g，據(jù)正常標準體重60公斤用生地黃24g計算，200g左右實驗大鼠用量按正常人用量7.5倍換算（見表3）。表3 腎氣丸處方及劑量換算表 1處方：干地黃8兩 山茱萸4兩 山藥4兩 茯苓3兩 澤瀉3兩 丹皮3兩 桂枝1兩 附子1兩 2處方 8 4 4 3 3 2 2 2 3處方 8 4 3 3 3 3 2 2 4處方 8 4

27、3 3 3 2 1 1 5處方 4 4 4 3 3 3 2 2 6處方 4 4 4 3 3 2 1 1 7處方 4 4 3 3 3 3 1 1 8處方 4 4 3 3 3 2 2 2分組 干地黃 山茱萸 山藥 茯苓 澤瀉 丹皮 桂枝 附子 1 8（75.6） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 1（9.45） 1（9.45） 2 8（75.6） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 2（18.9） 3 8（75.6） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35）

28、 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 4 8（75.6） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 1（9.45） 1（9.45） 5 4（37.8） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 6 4（37.8） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 1（9.45） 1（9.45） 7 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 1（9.45） 1（9.45）

29、8 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 2（18.9）（二）實驗分組方法 將48只雄性Wistar大鼠同步化喂養(yǎng)1周后，隨機分為8組，每組6只。其組別即為上述正交試驗設計表中的8行，其序號與之相應，藥物用量在常規(guī)用量基礎上，其比例按正交設計每組的藥物比例。（三）實驗大鼠造模方法 1.實驗用雄鼠的準備： 48只Wistar雄性大鼠同步化常規(guī)喂養(yǎng)1周。 2.造模方法：各組大鼠均腹腔注射慶大霉素每只0.8 ml/d，共7 d。 3.給藥方法：各組大鼠造模同時分別灌胃相應腎氣丸處方水煎劑，每只2 ml/d，共21 d。（四

30、）標本采集 麻醉狀態(tài)下腹主動脈取血及剝離腎臟1.麻醉 10%水合氯醛(100mgkg)腹腔注射，使雄鼠知覺消失。2.術(shù)區(qū)備皮。3.麻醉成功后，令大鼠仰臥于手術(shù)臺上。常規(guī)消毒，范圍以切口為中心5cm，鋪單。4. 取無菌手術(shù)包，左手用鑷子提起皮膚，右手持剪刀逐層分開皮膚、皮下組織、肌層、腹膜。保護重要臟器。5. 在腹主動脈取血后，迅速剖取雙腎，用4%多聚甲醛固定右腎，石蠟包埋，切片。（五）觀測指標 1一般狀況：記錄體重、體態(tài)、精神狀態(tài)、自主活動情況、反應靈敏度，皮毛情況、飲食、大小便情況等。 2生化指標：肌酐、尿素氮。 3.病理觀察：用甲醛固定右腎，做病理切片。（六）統(tǒng)計方法統(tǒng)計處理采用PEMS

31、3.1軟件中的正交試驗分析方法進行統(tǒng)計。 四、實驗結(jié)果 （一）一般狀況 在造模過程中，實驗大鼠逐漸出現(xiàn)反應遲鈍，自主活動減少，倦怠，精神萎靡，時扎堆，皮毛光澤度差，豎毛，飲食減少，小便增多，大便質(zhì)稀等癥狀。在造模過程中大鼠共死亡10只。 造模完成，在用不同劑量配比的腎氣丸治療過程中，各組大鼠以上癥狀逐漸好轉(zhuǎn)。 （二）對大鼠血清尿素氮(BUN)的影響 見表4表4 血清尿素氮(BUN)方差分析表 因素 SS df MS F P A 0.3062 1 0.3062 0.0308 0.8626 B 1.5550 1 1.5550 0.1565 0.6971 AB 13.6549 1 13.6549 1

32、.3740 0.2564 C 46.3843 1 46.3843 4.6673 0.0445 D 24.2627 1 24.2627 2.4414 0.1356 從以上統(tǒng)計結(jié)果分析，對實驗性腎損傷大鼠BUN水平的影響，A、B、D三個因素的兩個水平之間無明顯差異，P0.05。C因素兩個水平之間存在差異，P0.05。但從均數(shù)統(tǒng)計結(jié)果來看，Cr水平A因素的1水平低于2水平；B因素的1水平低于2水平；C因素的2水平低于1水平；D因素的2水平低于1水平,故整體分析得出，降低腎損傷大鼠Cr水平的腎氣丸最佳劑量配比為A1B1C2D2，即干地黃8份、山茱萸4份、山藥4份、茯苓3份、澤瀉3份、牡丹皮2份、肉桂2

33、份、附子2份。（四）對大鼠腎臟病理的影響 病理切片示A組：A1-1和A1-2部分腎小管變性（嗜酸性變），個別腎小管上皮壞死、A1-3腎小管變性壞死面積較大、 A1-4灶性變性壞死、A1-5腎皮質(zhì)內(nèi)部分腎小管擴張上皮變性、A1-6部分腎小管變性；A2組中A2-1小灶性水腫炎細胞浸潤、 A2-2灶性壞死并纖維細胞增生、A2-3灶性壞死并纖維細胞增生，間質(zhì)細胞增生、A2-4部分腎小管上皮輕度增生、A2-5灶性間質(zhì)增生、A2-6灶性間質(zhì)增生，并鈣鹽形成。(見附錄圖A1、A2) B組：B1-1 和B1-2均表現(xiàn)為間質(zhì)增生炎細胞浸潤部分腎小管擴張顯著，后者較輕、B1-3 和B1-4均現(xiàn)灶性間質(zhì)增生部分腎小

34、管擴張，后者較重、B1-5部分腎小管輕度變性、B1-6部分腎小管輕度變性，個別腎小管擴張及腎小管萎縮；B2-1部分腎小管間質(zhì)增生腎小管擴張、B2-2和B2-3部分腎小管間質(zhì)增生腎小管擴張，并部分泡空變性、B2-4部分腎小管上皮玻璃樣變性、B2-5和B2-6部分腎小管顯著擴張。(見附錄圖B1、B2)C組：C1-1個別腎小管玻璃樣變性、C1-2間質(zhì)增生慢性炎細胞浸潤、C1-3間質(zhì)增生慢性炎細胞浸潤，部分腎小管擴張顯著、C1-4和C1-5部分腎小管玻璃樣變性；C2-1間質(zhì)增生慢性炎細胞浸潤部分上皮壞死脫落、C2-2 間質(zhì)增生慢性炎細胞浸潤部分上皮壞死脫落、 C2-3部分腎小管變性擴張、 C2-4部分

35、腎小管變性，個別腎小球充血增生。(見附錄圖C1、C2)D組：D1-1間質(zhì)增生慢性炎細胞浸潤，部分腎小管擴張顯著、D1-2同上，并個別腎小管壞死、D1-3部分腎小管輕度變性、D1-4和D1-5部分間質(zhì)變性壞死，慢性炎細胞浸潤，間質(zhì)增生；D2-1部分腎小管輕度增生、D2-2部分腎小管輕度增生，個別腎小管擴張、D2-3灶性間質(zhì)增生并慢性炎細胞浸潤。(見附錄圖D1、D2)從上述實驗大鼠的腎臟病理結(jié)果來看，慶大霉素主要造成了大鼠腎臟腎小管的損害，由于腎氣丸四個因素兩個水平組中的各個大鼠的腎損害程度大都輕重不一，所以組間比較的意義較小。討 論一、慶大霉素腎損傷模型與腎虛證模型的關系問題 本實驗中實驗大鼠在被制造成慶大霉素腎損模型后，出現(xiàn)了反應遲鈍，自主活動減少，倦怠，精神萎靡，時扎堆，皮毛光澤度差，豎毛，飲食減少，小便增多，大便質(zhì)稀等癥狀，雖然沒有對其進行舌象和脈象的觀測，但這些癥狀比較符合腎虛證表現(xiàn)，所以本實驗中的腎損傷大鼠模型與實驗大鼠腎虛證模型的相關性較高，提示下一步在研究防治、減小慶大霉素等藥物的腎毒性時可從中醫(yī)的腎虛證入手。 二、實驗設計未設空白組和模型組問題 由于本人導師在長期主持的腎氣丸相關實驗研究課題中，對腎氣丸抗實驗性慶