黃芪預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用

1、黃芪預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用【摘要】目的討論黃芪(AS)對大鼠腦缺血再灌注損傷的預(yù)適應(yīng)樣保護作用。方法采用連續(xù)靜脈推注AS模擬預(yù)適應(yīng)的實驗方法，觀察大鼠雙側(cè)頸總動脈栓塞再灌血清中一氧化氮合酶(NS)活性、及一氧化氮N、丙二醛DA含量以及腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶活性的變化。結(jié)果AS(10，8g/kg)預(yù)處理可明顯降低血清中DA含量，同時增加血清NS、N含量及腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶活性和N含量。結(jié)論黃芪預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注損傷具有缺血預(yù)適應(yīng)樣的保護作用?！娟P(guān)鍵詞】黃芪；預(yù)處理；腦缺血；再灌注損傷；保護Abstrat：bjetiveTs

2、tudytheprtetiveeffetfpharalgialprenditiningfastragalus(AS)againsterebralisheireperfusininjuryinrats.ethdserebralisheiareperfusindelasestablishedbylapingbthnartidarteries.Theativitiesfnitrixidesynthetase(NS)，Na+-k+ATPase，a2+ATPaseandthententsfnitrixide(N),alnaldehyde(DA)ereeasuredafterpharalgialprend

3、itiningfAS.ResultsThepharalgialprenditiningfAS(10g/kg、8g/kg)signifiantlyreduedthententsfDAandsignifiantlyinreasedtheativitiesfNS，Na+-k+ATPase，a2+ATPaseandthententsfN.nlusinThepharalgialprenditiningfAShasaprtetiveatinagainsterebralisheireperfusininjury.Keyrds：Astragalus；Prenditining；Brainishei;Reperf

4、usininjury；Prtetin近代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芪中含有黃酮、多糖、皂苷、生物堿、氨基酸及微量元素等多種活性成分1，2，因其去除自由基、拮抗鈣超載、保護內(nèi)皮、改善心功能等多種作用而被應(yīng)用于心血管疾病并獲得顯著療效。已有文獻報道黃芪對心、腦缺血及再灌注損傷有一定保護作用。也有人發(fā)現(xiàn)黃芪預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷有保護作用3，4，但未見黃芪預(yù)處理對腦缺血再灌注損傷影響的研究報道。本研究就黃芪預(yù)處理對腦缺血再灌注損傷的影響及其機制進展了研究，以期為腦血管疾病的治療和預(yù)防提供新的研究方向。1材料1.1動物istar大鼠，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，雌雄兼用，體重200250g

5、，隨機分組。1.2藥品與試劑黃芪注射液，上海新亞藥業(yè)新高，批號070107；尼莫地平注射液(Ni)：山東方明股份出品，批號0512048。一氧化氮(N)試劑盒(批號20220510)；一氧化氮合成酶(NS)測試盒(批號20220513)；DA試劑盒(批號20220510)；ATP酶試劑盒(批號20220513)均購自南京建成生物工程研究所。1.3儀器1/10萬電子天平(日本島津)；UV-265紫外分光光度計(日本島津)；SK型高速細胞粉碎機(德國AKI)。2方法和結(jié)果2.1動物分組56只istar大鼠，隨機分成7組，每組8只。1組為單純?nèi)毖俟嘧⒔M(IR)、2組為缺血預(yù)處理組(IP)，3，4組

6、為黃芪2個不同劑量組(AS1，2組用藥量分別按10，8g/kg給藥)、5組為尼莫地平組(Ni組)、6組為陰性對照(生理鹽水，NS)組、7組為假手術(shù)組。2.2方法5用10%水合氯醛(3l/kg)腹腔注射，麻醉大鼠后，用75%乙醇頸前皮膚消毒，頸正中切口，別離雙側(cè)頸總動脈，微動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈。單純?nèi)毖俟嘧?IR)組：大鼠雙側(cè)頸總動脈阻斷血流90in，再灌注60in；缺血預(yù)處理(IP)組：大鼠雙側(cè)頸總動脈缺血5in后灌注5in，再缺血5in灌注30in，隨后缺血90in，再灌注60in；3，4組為黃芪2個不同劑量組(10，8g/kg)：持續(xù)5in靜脈推注不同劑量黃芪注射液，停頓給藥5in，再

7、次持續(xù)靜脈給藥5，30in后阻斷雙側(cè)頸總動脈血流90in，再灌注60in；尼莫地平(Ni)組(2g/kg)：給藥及實驗程序同黃芪組；陰性對照(NS)組：靜脈推注生理鹽水，其余同黃芪組；假手術(shù)組只手術(shù)，但不阻斷血流。2.3黃芪對血清NS活性及N，DA含量的影響實驗完畢后立即留取血清，放入冰箱中冷藏保存，以備血清NS活性及N、DA含量的測定。測定方法按試劑盒操作說明操作。結(jié)果見表1。表1黃芪對腦缺血大鼠血清中NS、N以及DA含量的影響略與假手術(shù)組比擬，P0.01；與對照(NS)組比擬，*P0.05，*P0.01；n=8表1可見，黃芪(10，8g/kg)預(yù)處理可明顯升高血清中NS活性和N含量，而降低

8、DA含量，尤其AS1(10g/kg)組與IP組和Ni預(yù)處理組相似。2.4黃芪對腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶含量的影響末次缺血再灌注20in后迅速斷頭取腦，用潮濕濾紙除去血液，在冰盤中取雙側(cè)腦皮層組織，在冰浴上按19(V/V)參加4勻漿介質(zhì)(生理鹽水)，轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中，高速細胞粉碎機勻漿(14000r/in，30s)，3500r/in離心10in。取上清液備用。按試劑盒操作說明于UV-265紫外分光光度計660n波長處比色測定腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶活性。結(jié)果見表2。由表2可見，黃芪可增加腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶含量，尤其AS1(1

9、0g/kg)組與IP組、Ni預(yù)處理組相似。2.5統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用s表示，結(jié)果進展組間比擬，用t檢驗。表2黃芪對腦缺血大鼠腦Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶含量的影響略與假手術(shù)組比擬，P0.01；與對照(NS)組比擬，*P0.05，*P0.01；n=83討論腦缺血及再灌注損傷可導(dǎo)致腦細胞膜脂質(zhì)過氧化反響，產(chǎn)生過多的氧自由基，損傷腦細胞膜6。腦缺血時由于組織氧和能量代謝的物質(zhì)供給缺乏，ATP生成減少，離子泵失效，Na+-K+-ATP酶活性降低，使大量Na+內(nèi)流、K+外流，l-和H2被動進入細胞內(nèi)，引起神經(jīng)細胞急性浸透性腫脹死亡。Na+內(nèi)流和K+外流導(dǎo)致細胞膜電位下降產(chǎn)生去極化，電壓依賴性a

10、2+通道開放，a2+大量內(nèi)流；同時由于K+、蛋白激酶及遞質(zhì)的釋放等作用，受體依賴性a2+通道開放，a2+大量內(nèi)流。細胞內(nèi)鈣超載可導(dǎo)致氧自由基產(chǎn)生增加、花生四烯酸代謝增強、興奮性氨基酸遞質(zhì)釋放增加等，形成惡性循環(huán)而導(dǎo)致神經(jīng)元壞死。其中氧自由基增加是缺血再灌注損傷的一個重要因素7。N是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，具有擴張血管、抑制血小板聚集和黏附、改善組織器官的血液循環(huán)，具有細胞保護作用。NS是N合成最關(guān)鍵的限速酶。本研究說明與IP一樣,黃芪預(yù)處理可顯著升高血清中NS和N含量,提示黃芪的保護作用可能與促進N合成有關(guān)。而眾多的研究說明腦缺血預(yù)處理即一次或?qū)掖味虝喝毖?可進步腦組織對隨后較長時間缺血及再灌注

11、的耐受力,是機體的一種內(nèi)源性保護機制。本研究發(fā)現(xiàn)大鼠缺血再灌注后自由基代謝產(chǎn)物DA的生成明顯增多,而N、NS、Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶的含量降低。而缺血預(yù)處理可顯著降低DA的含量，而增加N、NS、Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶的含量。同時也發(fā)現(xiàn)黃芪有類似的作用。結(jié)果說明黃芪可以模擬IP的作用。本研究說明,黃芪預(yù)處理可明顯升高腦缺血再灌注大鼠腦組織Na+-K+-ATP酶、a2+-ATP酶、NS活性增加N含量,顯著降低腦組織DA含量。提示黃芪預(yù)處理對缺血再灌注腦損傷的保護機制與保護ATP酶活性、促進N生成及抑制脂質(zhì)過氧化和減輕自由基損傷有關(guān)?！緟⒖嘉墨I】1陳德昌.現(xiàn)代實用本草，上冊.北京:人民衛(wèi)生出版社,1996：681.2吳怡谷，宋立人.中華本草.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1996：814.3趙淑敏，韓莉，馬立輝，等.黃芪預(yù)處理對缺血再灌注大鼠心肌細胞凋亡及相關(guān)基因的影響J.中國臨床康復(fù)，2022，9(23)：226.4程桂榮，易勝中.黃芪預(yù)處理大鼠心肌保護效應(yīng)的實驗研