《分離特定的微生物并測定其數(shù)量》導(dǎo)學(xué)案

1、PAGE9第二節(jié)分離特定的微生物并測定其數(shù)量【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1掌握涂布平板法和混合平板法。2掌握利用選擇培養(yǎng)基分離微生物的方法。3學(xué)習(xí)觀察各種微生物形成的菌落【重點(diǎn)提醒】1用稀釋平板法進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)。2學(xué)會從土壤中分離僅以尿素為氮源的土壤微生物和能分解纖維素的微生物的方法?！咀灾黝A(yù)習(xí)】一、基礎(chǔ)知識1平板分離法能將單個微生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面，每個孤立的活微生物體經(jīng)過生長、繁殖均可形成單個菌落。平板分離法有種，如涂布平板法和混合平板法就是實(shí)驗(yàn)室中最常用的兩種方法。分離培養(yǎng)微生物最常用的是瓊脂固體培養(yǎng)基。2選擇培養(yǎng)分離：通過選擇培養(yǎng)進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分離的技術(shù)。3菌落：指單個微生物在適宜

2、的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度，形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體。二、土壤微生物的分離和計(jì)數(shù)1準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器材。2采集土壤，制備懸液（1）制備懸液稱取0.5 g土壤樣品，倒入盛有50mL無菌水的錐形瓶，_20min，使土樣充分打散，即成為102g（2）等比稀釋用_吸取土壤懸液注入盛有的1號試管，配成_g/mL的土壤懸液。取另一支無菌移液管吹吸1號試管3次，使懸液_，再吸取注入盛有無菌水的2號試管，配成104 g/mL的土壤懸液。以此類推，依次配制成105、106、107、108，待_后制成_。4接種采用3支無菌移液管分別吸取108、107、106g/mL的土壤懸液各15培

3、養(yǎng)與觀察將培養(yǎng)皿倒置于_中培養(yǎng)12d，觀察細(xì)菌菌落。6計(jì)數(shù)菌落培養(yǎng)_后取出平板計(jì)數(shù)，選取菌落數(shù)為_的一組為代表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。每克土壤樣品的細(xì)菌數(shù)某一稀釋度幾次重復(fù)培養(yǎng)后的_。7微生物數(shù)量的測定方法（1）涂抹平板法（常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的稀釋方法）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，_。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有_。但統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_，這是因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時，平板上觀察到的只是_。稀釋倍數(shù)的確定：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在_之間、適于計(jì)

4、數(shù)的平板。當(dāng)?shù)谝淮巫鲞@個實(shí)驗(yàn)的時候，可以將稀釋液的范圍放寬一點(diǎn)，如可以將103107倍的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)。每克樣品的細(xì)菌數(shù)某一稀釋度幾次重復(fù)培養(yǎng)后的菌落平均數(shù)_。提醒培養(yǎng)過程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度下應(yīng)涂抹至少3個平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。（2）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量，但_細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積1 mm2和高0.1 mm的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個（或16個）中格，每個中格進(jìn)一步劃分成16個（或25個）小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個小格組成。操作：將稀

5、釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)_個中方格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按下面公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計(jì)算公式：每mL原液所含細(xì)菌數(shù)_400104稀釋倍數(shù)。三、分離土壤中能分解纖維素的微生物1實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）從土壤微生物中篩選出能分解纖維素的微生物。（2）研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。（3）探討能分解纖維素的微生物的應(yīng)用價值。2實(shí)驗(yàn)原理土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以分泌_，分解和利用_。因此在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能很好地生長，其他微生物則不能生長。3方法步驟（1）制備_培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中提供碳源的

6、物質(zhì)只有_。（2）_。（3）制備_：依次制備稀釋度為101、102、103、104、105的土壤稀釋液。（4）_：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液1mL，轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基中，每個稀釋度重復(fù)34次，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（5）觀察_的生成情況。4篩選菌株（1）剛果染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。在培養(yǎng)長出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋1mg/mL的剛果紅溶液1015min，倒去剛果紅溶液，加入1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)透明圈。方法二：倒平板時就加入剛果紅。配制10mg/mL的剛果紅溶液，滅菌后，按照200mL培養(yǎng)基加入1mL的比例加入剛果紅溶液，混勻后倒平板。培養(yǎng)基上長出菌落后，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)透明圈。（2）挑選菌落在產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落中，挑取并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在3037下培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。5分解纖維素的微生物的應(yīng)用土壤中分解纖維素的微生物種類很多，有細(xì)菌、真菌等。它們能分泌纖維素酶，將纖維素分解成小分子糖類物質(zhì)以滿足自身生命活動的需要，同時也能改善土壤的結(jié)構(gòu)，提高土壤的肥力。利用纖維素分解菌或其產(chǎn)生的酶來分解纖維素，將農(nóng)作物秸稈、甘蔗渣等轉(zhuǎn)化成乙醇等清潔能源，正受到人們的高度重視。參考答案二、2（1）振蕩（2）無菌移液管無菌水103均勻3牛肉膏蛋白胨固體熔化凝固平板標(biāo)記