臨床生化檢驗方法的選擇和評價課件

1、臨床生化檢驗方法的選擇和評價 臨床生化檢驗方法的選擇和評價，是臨床生化檢驗質(zhì)量控制的重要基礎(chǔ)工作。當(dāng)建立一個新的方法，或引進(jìn)新的方法、都應(yīng)對它們的技術(shù)性能作出評價，以便科學(xué)的選擇和應(yīng)用。10/14/20221齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室臨床生化檢驗方法的選擇和評價 臨床生化檢驗方法的選10/14/20222齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/10/20222齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室一 檢驗方法和標(biāo)準(zhǔn)品的分級（一）方法的分級 臨床生化檢驗方法根據(jù)其準(zhǔn)確度與精密度的不同可以分為決定性方法、參考方法、常規(guī)方法等三級。10/14/20223齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室一 檢驗方法和標(biāo)準(zhǔn)品的分級（一）方法的分級 臨床

2、生化檢驗方1決定性方法（definitive method） 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。用于發(fā)展及評價參考方法和一級標(biāo)準(zhǔn)品。 10/14/20224齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室1決定性方法（definitive method） 是指準(zhǔn)2參考方法（reference method） 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。這類方法在條件許可的實(shí)驗室中應(yīng)經(jīng)常使用。用于評價常規(guī)方法和試劑盒，鑒定二級標(biāo)準(zhǔn)品。10/14/20225齊齊哈爾

3、醫(yī)學(xué)院生化教研室2參考方法（reference method） 是指準(zhǔn)確度3常規(guī)方法（routine method） 指性能指標(biāo)符合臨床或其他目的的需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶医?jīng)濟(jì)實(shí)用。這類方法經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后可稱為推薦方法（recommended method），推薦方法應(yīng)具有足夠的實(shí)驗證據(jù)10/14/20226齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室3常規(guī)方法（routine method） 指性能指標(biāo)符 三級方法的相互關(guān)系常規(guī)方法參考方法 決定性方法準(zhǔn)確度增加應(yīng)用范圍增加10/14/20227齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室 三級方法的相互關(guān)系常規(guī)方法準(zhǔn)確度增加應(yīng)用范圍增加10

4、/10（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物）的定義為：一類具有一種或多種成分、且含量均勻確定的物質(zhì)。 ；被用于校正儀器或用于評價一種測定方法的物質(zhì)，并將其分成三級。10/14/20228齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物）的定義為（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級1一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物，primary reference material ） 是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書；用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為二級標(biāo)準(zhǔn)品定值。10/14/20229齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研

5、室（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級1一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物，primary2二級標(biāo)準(zhǔn)品（次級參考物， secondary reference material ） 包括用于常規(guī)分析的標(biāo)準(zhǔn)液。這類標(biāo)準(zhǔn)品可由實(shí)驗室自已配制或為商品，它的示值必須用一級標(biāo)準(zhǔn)品和參考方法并由訓(xùn)練有素的，能熟練掌握參考方法的操作者確定；主要用于常規(guī)方法的評價或為控制物定值和常規(guī)測定的結(jié)果計算。10/14/202210齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2二級標(biāo)準(zhǔn)品（次級參考物， secondary refer3校準(zhǔn)品（calibrator） 用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定得到校準(zhǔn)品，用于常規(guī)測定中的標(biāo)準(zhǔn)4 .控制物（control material）

6、 具有與檢測過程相適應(yīng)的特性，其成分及基質(zhì)與檢測樣本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。用于質(zhì)量控制，控制患者樣本的測定誤差10/14/202211齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室3校準(zhǔn)品（calibrator） 用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測各級實(shí)驗方法與參考物的相互關(guān)系決定性方法用途：評價參考方法及為一級參考物定值一級參考物用途：發(fā)展和評價參考方法， 校正決定性方法和參考方法， 產(chǎn)生二級參考物參考方法用途：為二級參考物及控制物定值，評價常規(guī)方法（標(biāo)準(zhǔn)化、偏差、干擾因素） 二級參考物用途：常規(guī)方法的工作標(biāo)準(zhǔn)及為控制物定值10/14/202212齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室各級實(shí)驗方法與參考物的相互關(guān)系決定性方法用途：評

7、價參考方法及二 常規(guī)方法選擇的原則（一）適用性 微量快速方法簡便安全可靠成本低廉（二）可靠性較高精密度、準(zhǔn)確度較好檢測范圍10/14/202213齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室二 常規(guī)方法選擇的原則（一）適用性 10/10/2022（二）方法選擇的步驟（一）提出要求（二）獲取資料（三）選定候選方法（四）候選方法的初步試驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍和重復(fù)性；重復(fù)試驗精密度；對比試驗準(zhǔn)確度；10/14/202214齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（二）方法選擇的步驟（一）提出要求10/10/202214齊第二節(jié) 臨床生化檢驗方法學(xué)評價方法學(xué)評價（evaluation of methodology）通過實(shí)驗途徑測定分析方

8、法的技術(shù)性能，并評價其是否能接受。評價實(shí)驗的過程就是對誤差的測定。 一、方法學(xué)評價的意義和內(nèi)容10/14/202215齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室第二節(jié) 臨床生化檢驗方法學(xué)評價方法學(xué)評價（evaluatio主要的方法技術(shù)性能指標(biāo)：準(zhǔn)確度(accuracy) 靈敏度(sensitivity) 特異度(specificity)分析測量范圍(analytical measure range, AMR)評價實(shí)驗的過程就是對誤差的測定。 10/14/202216齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室主要的方法技術(shù)性能指標(biāo)：準(zhǔn)確度(accuracy) 靈敏確定方法的質(zhì)量目標(biāo)選定及進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕沂痉治稣`差類型的實(shí)驗收集試驗數(shù)據(jù)

9、，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析判斷方法 的可接受性二、方法學(xué)評價的基本步驟10/14/202217齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室確定方法的質(zhì)量目標(biāo)二、方法學(xué)評價的基本步驟10/10/202三、誤差的分類和表示1.系統(tǒng)誤差（SE）定義： 指測定值與真值存在的同一傾向的偏差。系統(tǒng)誤差或正或負(fù)，即具有單向性，一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測定中重復(fù)出現(xiàn)。10/14/202218齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室三、誤差的分類和表示1.系統(tǒng)誤差（SE）10/10/2022三、誤差的分類和表示2.系統(tǒng)誤差分類 恒定系統(tǒng)誤差（CE） 指測定值與真值之間存在恒定的誤差，其大小與干擾物濃度相關(guān)，而與被測物濃度無關(guān)。 比例系統(tǒng)誤差

10、（PE） 誤差大小與被測物濃度成正比。10/14/202219齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室三、誤差的分類和表示2.系統(tǒng)誤差分類10/10/202219三、誤差的分類和表示3.隨機(jī)誤差（RE）定義： 多次重復(fù)測定某一物質(zhì)時出現(xiàn)的誤差，誤差無一定的大小和方向，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。10/14/202220齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室三、誤差的分類和表示3.隨機(jī)誤差（RE）10/10/2022 誤差類型示意圖比較方法結(jié)果試驗方法結(jié)果比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差隨機(jī)誤差10/14/202221齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室 誤差類型示意圖比較方法結(jié)果比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差隨機(jī)誤揭示誤差類型的實(shí)驗 誤差類別 實(shí)驗隨機(jī)誤差（R

11、E） 重復(fù)性 比例誤差（PE） 回收 恒定誤差（CE） 干擾 系統(tǒng)誤差（SE） 方法對比總誤差 （TE） 重復(fù)性和方法對比10/14/202222齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室揭示誤差類型的實(shí)驗 10/10/202222齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院一、方法評價方案（一）精密度評價1目的要求 反映精密度好壞的指標(biāo)是變異系數(shù)CV，CV越小精密度越好，反之則差，故有人稱其為不精密度。變異系數(shù)CV包括：批內(nèi)、批間、日間和總CV，其中總CV最重要，它代表整個分析體系的可重復(fù)程度。10/14/202223齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室一、方法評價方案（一）精密度評價1目的要求 10/10/2評價前的準(zhǔn)備 對于評價對象和評價方案均應(yīng)

12、熟悉。實(shí)驗試劑應(yīng)是同批次配制，或同一批號的商品試劑盒和參考物，儀器也應(yīng)處于良好的工作狀態(tài)實(shí)驗用標(biāo)本一般選擇2個（亦可更多），一個在正常范圍或在醫(yī)學(xué)決定水平附近，另一個為異常值，實(shí)驗標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與臨床標(biāo)本一致。先作一個初步的批內(nèi)精密度測定，即一個標(biāo)本重復(fù)測定20次，計算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)10/14/202224齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2評價前的準(zhǔn)備 10/10/202224齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化3評價步驟 用2個標(biāo)本每天測定2次（2次測定間隔不得少于2小時），每次測定均作雙份，共測定20天。每次測定至少做一個質(zhì)控。 10/14/202225齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室3評價步驟 用2個標(biāo)本每天測定

13、2次（2次測定間隔不得少于2（二）準(zhǔn)確度評價1方法比較試驗 將試驗方法（待評價或待驗證的方法）與比較方法（參考方法或準(zhǔn)確度已知的方法）進(jìn)行比較，用于評價試驗方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差。10/14/202226齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（二）準(zhǔn)確度評價1方法比較試驗 10/10/202226齊（二）準(zhǔn)確度評價1方法比較試驗 (1)要求 比較方法應(yīng)是參考方法或推薦方法，如該測定沒有參考方法或推薦方法亦可用公認(rèn)的常規(guī)方法。但須具備：比較試驗方法有更好的精密度。干擾影響已知。與試驗方法使用相同的計算單位。10/14/202227齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（二）準(zhǔn)確度評價1方法比較試驗 10/10/20222

14、7齊(2)比較前準(zhǔn)備 實(shí)驗者應(yīng)熟悉所用的儀器、試驗方法、比較方法和評價方案。實(shí)驗標(biāo)本應(yīng)收集新鮮的正常和異常的臨床標(biāo)本，應(yīng)有足夠?qū)挼臐舛确秶?，各濃度?yīng)有合適的比例。如不能及時測定，標(biāo)本應(yīng)妥善保存并應(yīng)在分析物的穩(wěn)定期內(nèi)測定。10/14/202228齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室(2)比較前準(zhǔn)備 10/10/202228齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化(3)方法比較步驟 樣本數(shù)至少為40個標(biāo)本，每個標(biāo)本用2種方法分別作雙份測定，如臨床標(biāo)本的量太少可將2份含量相近的標(biāo)本混合。每天測定8個標(biāo)本，雙份測定時第一次按順序1，27，8，第二次8，72，1，共測試5天。10/14/202229齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室(3)方法比較

15、步驟 10/10/202229齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生結(jié)果分析 (1)作圖分析 1)差異分析 2)對比分析 差異圖: Y軸:試驗方法與比較方法之差 X軸:比較方法的測定值 對比圖: Y軸:試驗方法測定值 X軸:比較方法的測定值10/14/202230齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室結(jié)果分析 10/10/202230齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室差異分析圖對比分析圖比較方法結(jié)果零線差異（試驗比較）比較方法結(jié)果測定方法結(jié)果10/14/202231齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室差異分析圖對比分析圖比較方法結(jié)果零線差異（試驗比較）比較方2回收試驗 所謂回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。目的是測定比例系統(tǒng)誤

16、差，以衡量候選方法的準(zhǔn)確度。（1）方法：將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，成為分析樣品，原樣品加入同量的無分析物的溶液作基礎(chǔ)樣品，然后用實(shí)驗方法分析，兩者測定結(jié)果的差值為回收量。10/14/202232齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2回收試驗 所謂回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的（2）回收率計算：理想的回收率為100%，如某法測血鈣的回收率為95.7%，有4.3%的比例誤差，表明一個含鈣真值為2.5mmol/l的標(biāo)本,若用該方法測定,約為2.39mmol/l(2.595.79% )，誤差為0.11mmol/L(2.54.3%)。10/14/202233齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（2）回收率計算

17、：理想的回收率為100%，如某法測血鈣的回（3）注意事項： 準(zhǔn)確吸量,因為被分析物的理論值是根據(jù)加入標(biāo)準(zhǔn)液體積及原樣品的體積計算所得，吸量稍有不準(zhǔn)，就會影響結(jié)果； 樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液后,總的濃度必須在方法的分析范圍內(nèi)，一般須加入高、中、低不同濃度做回收試驗，計算平均回收率； 加入標(biāo)準(zhǔn)液后，最好使實(shí)驗樣品的被測濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定濃度； 加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%以內(nèi)。若稀釋過大，誤差將發(fā)生改變，甚至消失。10/14/202234齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（3）注意事項： 準(zhǔn)確吸量,因為被分析物的理論值是根據(jù)加入（三）線性評價1目的要求 線性范圍是分析方法的一個重要技術(shù)指標(biāo)，它能判斷對某一分析方法測得

18、的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般應(yīng)覆蓋臨床可能出現(xiàn)的高值。10/14/202235齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（三）線性評價1目的要求 線性范圍是分析方法的一個重要技術(shù)2評價前準(zhǔn)備 熟悉儀器、評價方案和試劑。評價標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與實(shí)際測定的標(biāo)本相一致，理想的標(biāo)本是病人的低值或高值標(biāo)本，這往往不易收集到，亦可用病人的混合標(biāo)本加入分析物作為高值標(biāo)本，用正常人標(biāo)本作為低值標(biāo)本。濃度范圍應(yīng)以分析項目的線性要求為準(zhǔn)。10/14/202236齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2評價前準(zhǔn)備 10/10/202236齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教線性評價應(yīng)有5個不同濃度，可選擇低

19、值和高值標(biāo)本各一個，低值標(biāo)本為1號，高值標(biāo)本為5號，二者3：1混勻為2號，等份混勻為3號，1：3混勻為4號，2-4號標(biāo)本的濃度按下式計算：標(biāo)本濃度 = （C1V1 + C5V5）/（V1 + V5）C ：濃度，V ：體積。10/14/202237齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室線性評價應(yīng)有5個不同濃度，可選擇低值和高值標(biāo)本各一個，低值標(biāo)（四）干擾試驗1目的要求 判斷評價方法給出的結(jié)果是否受非分析物影響及影響程度。干擾是指在測定某分析物的濃度或活性時，受另一非分析物影響而導(dǎo)致測定結(jié)果增高（正干擾）或降低（負(fù)干擾）。干擾物質(zhì)可分為內(nèi)源性（標(biāo)本中存在的）和外源性（外界污染的）兩類。10/14/202238齊

20、齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室（四）干擾試驗1目的要求 10/10/202238齊齊哈爾干擾的機(jī)理，可有物理作用、化學(xué)作用以及非特異反應(yīng)等。干擾可能是造成誤差的一個重要原因，如果干擾物是恒定的將引起恒定誤差，如干擾物隨病理生理因素影響，將引起隨機(jī)誤差。因此，實(shí)驗室應(yīng)了解各種測定方法的干擾情況 10/14/202239齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室干擾的機(jī)理，可有物理作用、化學(xué)作用以及非特異反應(yīng)等。10/2試驗前準(zhǔn)備 應(yīng)做的主要干擾物為病人標(biāo)本中常常出現(xiàn)的黃疸，脂血和溶血；某些藥物如維生素C等；實(shí)驗常用的抗凝劑，防腐劑和穩(wěn)定劑。質(zhì)量保證，不存在系統(tǒng)誤差；批內(nèi)精密度在可接受范圍內(nèi)；應(yīng)不存在前后結(jié)果的交叉污染；實(shí)

21、驗過程有質(zhì)控監(jiān)督。10/14/202240齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2試驗前準(zhǔn)備10/10/202240齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研3干擾試驗方法 (1)配對差異試驗:即將不同濃度的干擾物加入到實(shí)驗標(biāo)本中，然后分別測定加與不加干擾物的標(biāo)本，比較二者有無偏差，并了解干擾物濃度與偏差程度的關(guān)系。(2) 用病人標(biāo)本作偏差分析:10/14/202241齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室3干擾試驗方法 (1)配對差異試驗:即將不同濃度的干第三節(jié) 方法學(xué)評價實(shí)驗（舉例）一、批內(nèi)重復(fù)性實(shí)驗重復(fù)性試驗依據(jù)時間間隔可分為批內(nèi)、天內(nèi)、天間三種重復(fù)性試驗。方法學(xué)評價重復(fù)性試驗應(yīng)由實(shí)驗者作批內(nèi)(或天內(nèi)) 及天間重復(fù)性試驗。10/14/

22、202242齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室第三節(jié) 方法學(xué)評價實(shí)驗（舉例）一、批內(nèi)重復(fù)性實(shí)驗10/10/【目的與要求】掌握方法學(xué)重復(fù)性實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉重復(fù)性實(shí)驗的注意事項和評價標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評價GOD-POD法測血糖隨機(jī)誤差的大小。10/14/202243齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【目的與要求】掌握方法學(xué)重復(fù)性實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計【原理】批內(nèi)重復(fù)性試驗是指在相同條件下對同一標(biāo)本在盡可能短的時間內(nèi)進(jìn)行m輪，每輪n次重復(fù)測定，以獲得批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)的試驗方法。其結(jié)果能反映各次測定結(jié)果相互接近的程度，用于客觀評價GOD-POD法測血糖隨機(jī)誤差的大小。【操作步驟】 將血清標(biāo)本用GOD

23、-POD法作5輪，每輪4次血糖測定，即可獲得20個測定數(shù)據(jù)。 10/14/202244齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【原理】批內(nèi)重復(fù)性試驗是指在相同條件下對同一標(biāo)本在盡可能短的【結(jié)果計算】1檢驗20次測定數(shù)據(jù)中的離群值（用Grubbs檢驗準(zhǔn)則，檢驗離群值 ）2按照批內(nèi)精密度的計算公式計算5輪每輪4次測定值的平均數(shù)( )、標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(CV%)。 10/14/202245齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果計算】1檢驗20次測定數(shù)據(jù)中的離群值（用Grubbs10/14/202246齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/10/202246齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/14/202247齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研

24、室10/10/202247齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【評價標(biāo)準(zhǔn)】 如試驗求得的血清葡萄糖GOD-POD測定法的CV值WHO對中等實(shí)驗室提出的OCV(3%)標(biāo)準(zhǔn)，即表明實(shí)驗條件的控制達(dá)到最佳條件，試驗結(jié)果可按OCV%報告。作為方法探討實(shí)驗，其變異系數(shù)應(yīng)該OCV標(biāo)準(zhǔn)。10/14/202248齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【評價標(biāo)準(zhǔn)】 如試驗求得的血清葡萄糖GOD-POD測定法的【注意事項】1. 血糖的醫(yī)學(xué)決定水平值為2.8、6.7、8.9mmol/L。分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平值才更具價值。2.為了縮小測定值的離散程度，操作中必須準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本量，并嚴(yán)格控制反應(yīng)時間，準(zhǔn)確讀數(shù)。3計算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(S

25、w)時不可誤用連續(xù)測定精密度的統(tǒng)計學(xué)公式。否則會使Sw的估計值明顯偏低。10/14/202249齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】1. 血糖的醫(yī)學(xué)決定水平值為2.8、6.7、8.【思考題】1. 重復(fù)性試驗依據(jù)時間間隔可分為幾種？哪種最符合臨床實(shí)際？2. 重復(fù)性試驗結(jié)果反映了什么誤差？3. 方法評價的批內(nèi)重復(fù)性試驗在標(biāo)本濃度、樣本數(shù)、測試方法及統(tǒng)計方法方面有什么要求？ 10/14/202250齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【思考題】1. 重復(fù)性試驗依據(jù)時間間隔可分為幾種？哪種最符二、 回收試驗回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。用于測定實(shí)驗方法的比例系統(tǒng)誤差。這種誤差常隨分析物

26、的濃度增加而增加，常因樣品中其它物質(zhì)與分析物競爭分析試劑并與之發(fā)生反應(yīng)而引起。10/14/202251齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室二、 回收試驗回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分【目的與要求】掌握方法學(xué)回收實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉回收實(shí)驗的注意事項和評價標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評價GOD-POD法測血糖比例系統(tǒng)誤差的大小。10/14/202252齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【目的與要求】掌握方法學(xué)回收實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分【原理】 回收試驗是發(fā)現(xiàn)分析方法比例系統(tǒng)誤差的有效評價方法。通過測定GOD-POD法測血糖的回收率，能較確切地判斷該分析方法比例系統(tǒng)誤差的有無或大小，可以對方

27、法的準(zhǔn)確性作出可靠評價。10/14/202253齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【原理】 回收試驗是發(fā)現(xiàn)分析方法比例系統(tǒng)誤差的有效評價方法?！静僮鞑襟E】1樣品制備基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml + 0.1ml生理鹽水?；厥諛悠罚貉?.9ml0.01ml 80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 0.09ml生理鹽水?；厥諛悠罚貉?.9ml0.06ml 80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 0.04ml生理鹽水?；厥諛悠罚貉?.9ml0.09ml 80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 0.01生理鹽水。2血糖濃度測定 按GOD-POD法測定各制備樣品的血糖濃度，每份樣品作雙份檢測，結(jié)果取平均值。10/14/202254齊齊哈爾醫(yī)學(xué)

28、院生化教研室【操作步驟】1樣品制備基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml + 0.【結(jié)果計算】10/14/202255齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果計算】10/10/202255齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/14/202256齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/10/202256齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】1分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平，血糖測定的醫(yī)學(xué)決定水為平2.8、6.7、8.9mmol/L。2純標(biāo)準(zhǔn)品溶液的加入體積不得超過血清樣品的10%，避免將血清稀釋過度，引起誤差的改變或消失。3準(zhǔn)確加量是最主要的技術(shù)關(guān)鍵。10/14/202257齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】1分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平

29、，血糖測定的醫(yī)學(xué)【結(jié)果判斷】 一般檢驗方法要求回收率在95%-105%之間，最為理想的回收率應(yīng)是100%?！舅伎碱}】1. 什么叫回收試驗？在回收試驗的樣品制備中應(yīng)注意哪些事項？2. 回收試驗反映的是方法的哪種誤差？3. 回收率怎樣計算？10/14/202258齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果判斷】 一般檢驗方法要求回收率在95%-105%之間，三、 干擾試驗干擾試驗用于測定某物質(zhì)加到樣品中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差，干擾物濃度一定時，產(chǎn)生的誤差是恒定系統(tǒng)誤差，誤差的實(shí)際大小隨干擾物的濃度而異。干擾試驗既用于檢測某方法的特異性，也用于檢測干擾物質(zhì)對方法的干擾作用，以評價分析方法的準(zhǔn)確性。10/14/20225

30、9齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室三、 干擾試驗干擾試驗用于測定某物質(zhì)加到樣品中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差【目的與要求】掌握方法學(xué)干擾實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉干擾實(shí)驗的注意事項和評價標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評價GOD-POD法測血糖恒定系統(tǒng)誤差的大小。10/14/202260齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【目的與要求】掌握方法學(xué)干擾實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分【原理】干擾試驗是測定特異性和干擾二者引起的誤差。在具體方法學(xué)評價實(shí)驗中，首先要確定被試可疑物質(zhì)是否引起誤差；若能引起誤差，再進(jìn)一步探討其誤差的來源是因方法特異性差還是干擾，若加入的物質(zhì)本身和分析試劑反應(yīng)并產(chǎn)生讀數(shù)，這是特異性差，若加入物質(zhì)并不與分析試劑反應(yīng)

31、，但它改變了分析物和分析試劑間的反應(yīng)，這是干擾。本實(shí)驗選用尿酸做GOD-POD法測血糖的干擾試驗，尿酸可以和GOD反應(yīng)生成的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使部分H2O2不能參與第二步POD的偶聯(lián)反應(yīng)，從而降低顯色強(qiáng)度，產(chǎn)生負(fù)的測定誤差。因此，尿酸對該反應(yīng)有干擾，但不是尿酸被測定。10/14/202261齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【原理】干擾試驗是測定特異性和干擾二者引起的誤差。在具體方法【操作步驟】1樣品制備基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml蒸餾水0.1ml。干擾樣品：血清0.9ml9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.05ml+蒸餾水0.05ml。干擾樣品：血清0.9ml9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。尿酸樣品：

32、蒸餾水0.9ml9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。2血糖值測定 取各樣品按GOD-POD法操作。10/14/202262齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【操作步驟】1樣品制備基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml蒸餾水0【結(jié)果計算】10/14/202263齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果計算】10/10/202263齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/14/202264齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室10/10/202264齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】 1可疑干擾物濃度 加入可疑干擾物的濃度應(yīng)明顯高于通常所見濃度的上限，有可能時應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本的最高值，尿酸升高的變動范圍在0.42-0.9mmol/L之間。2凡可疑干擾

33、物都應(yīng)做，這里僅是舉例示范。3無論是方法特異性差或是受干擾，都影響到測定結(jié)果的正確性，影響的程度與分析物的濃度無關(guān)，但與非分析物的量有關(guān)，所以產(chǎn)生的誤差都是恒定系統(tǒng)誤差，常以偏差Bias作為統(tǒng)計量。Bias指所有測定值系統(tǒng)性的偏離真值，表示系統(tǒng)誤差的大小。在干擾試驗中，偏差等于干擾樣品測定值與基礎(chǔ)樣品測定值之差。其它注意事項與回收試驗相同。10/14/202265齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】 1可疑干擾物濃度 加入可疑干擾物的濃度應(yīng)【結(jié)果判斷】 Bias允許誤差(EA)的臨界值，表明由干擾物引起的偏差對臨床診斷和治療不產(chǎn)生不良影響，可被接受。血糖2.8、6.7、8.9mmol/L時的E

34、A為0.56mmol/L。10/14/202266齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果判斷】 Bias允許誤差(EA)的臨界值，表明由干擾【思考題】1. 請闡述干擾和特異的概念，怎樣用實(shí)驗來加以區(qū)分？2. 干擾試驗的樣品制備與回收試驗的樣品制備有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？3. 干擾試驗反映的是何種誤差？干擾率怎樣計算？ 10/14/202267齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【思考題】1. 請闡述干擾和特異的概念，怎樣用實(shí)驗來加以區(qū)分四、 方法比較試驗方法比較試驗是用兩種方法同時測定一批標(biāo)本計算出兩種方法間測定結(jié)果的差值，以此來估計被評價方法在實(shí)際測定病人標(biāo)本時可能引入的總系統(tǒng)誤差的水平。10/14/202268齊

35、齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室四、 方法比較試驗方法比較試驗是用兩種方法同時測定一批標(biāo)本計【目的與要求】掌握方法比較實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉方法比較實(shí)驗的注意事項和評價標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評價GOD-POD法測血糖系統(tǒng)誤差的大小。10/14/202269齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【目的與要求】掌握方法比較實(shí)驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析【原理】 方法比較試驗是將候選方法與準(zhǔn)確度已知的方法(如參考方法)作對比分析，以評價候選方法的準(zhǔn)確度，是考核候選方法是否可被采用的重要試驗。方法比較試驗是用于檢測候選方法系統(tǒng)誤差的大小包括恒定誤差和比例誤差，如對適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)進(jìn)行分析，也可以提供誤差的性質(zhì)。本實(shí)驗以H

36、K法測血糖的參考方法作對比來評價GOD-POD法測定血糖的總系統(tǒng)誤差。10/14/202270齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【原理】 方法比較試驗是將候選方法與準(zhǔn)確度已知的方法(如參考【數(shù)據(jù)處理】1將對比試驗數(shù)據(jù)作散點(diǎn)圖，圖中以x軸代表對比方法的測定值，y軸代表被評價方法的測定數(shù)據(jù)，在方格紙上作圖應(yīng)散布于整個測定范圍之內(nèi)。 散點(diǎn)圖能夠提供初步的印象。如果所有測定值的對應(yīng)點(diǎn)在直角坐標(biāo)圖中大致呈45角的直線分布，提示被評價方法與對比方法的測定結(jié)果之間存在密切的相關(guān)關(guān)系；若呈明顯的曲線分布，雖然在統(tǒng)計學(xué)上可按照非線性資料處理，但在這種情況下，候選方法被采用的可能性極小。10/14/202271齊齊哈爾醫(yī)學(xué)

37、院生化教研室【數(shù)據(jù)處理】1將對比試驗數(shù)據(jù)作散點(diǎn)圖，圖中以x軸代表對比方2如果x、y之間呈直線關(guān)系,即可用經(jīng)典的直線回歸分析法作統(tǒng)計處理，其結(jié)果可以顯示候選方法的測定結(jié)果有無系統(tǒng)誤差存在，這種誤差可分為三類，即恒定系統(tǒng)誤差、比例系統(tǒng)誤差和(或)兼有兩種誤差。10/14/202272齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室2如果x、y之間呈直線關(guān)系,即可用經(jīng)典的直線回歸分析法作統(tǒng)在評價一個候選方法時，最理想的情況是回歸直線通過零點(diǎn)，呈45角分布，這時 a 0，b (x/y比值) 1.0，表明既無恒定誤差，又無比例誤差存在。但x和y都會有隨機(jī)誤差，a和b只是估計值，是會有所波動的。如果a0，b的數(shù)值稍偏離1.0，但

38、只要這種偏離程度比較小(可以忽略不計)，據(jù)經(jīng)驗判斷這一候選方法可以被接受，就能適用于臨床檢驗的常規(guī)分析。假如要對回歸系數(shù)b作出較嚴(yán)密的統(tǒng)計判斷， 就需要進(jìn)一步作回歸系數(shù)的顯著性檢驗。10/14/202273齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室在評價一個候選方法時，最理想的情況是回歸直線通過零點(diǎn)，呈453根據(jù)計算出的回歸方程的a、b值，可以計算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，并與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對被評價方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。10/14/202274齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室3根據(jù)計算出的回歸方程的a、b值，可以計算出候選方法系統(tǒng)誤4作相關(guān)分析 在方法比較試驗中，

39、相關(guān)系數(shù)(r)可作為被評價方法可否被接受的一項統(tǒng)計學(xué)指標(biāo)。相關(guān)系數(shù)(r)按下列公式計算：10/14/202275齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室4作相關(guān)分析 在方法比較試驗中，相關(guān)系數(shù)(r)可作為被評價【結(jié)果判斷】1. 回歸方程計算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對被評價方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。SE的可接受性判斷指標(biāo)為：2. 試驗方法（Y）與比較方法（X）相關(guān)性， r0.975或r20.95說明二法的相關(guān)良好。10/14/202276齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【結(jié)果判斷】1. 回歸方程計算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大【注意事項】1選擇試驗

40、樣品 一般作40-100例，包括常規(guī)工作中可能遇到的整個分析范圍，選擇合適的樣品分析范圍比增加樣品的數(shù)目更為重要。2試驗方法 一般每個樣品用兩種方法各測一次，最好每個樣品用兩種方法各測定兩次，不是平行測定，而是分兩批進(jìn)行，最好在4h內(nèi)進(jìn)行。3對比方法 對比方法的選擇十分重要，一般應(yīng)選參考方法或決定性方法，這樣方法間的任何分析誤差均可歸于被評價的候選方法。10/14/202277齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【注意事項】1選擇試驗樣品 一般作40-100例，包括常規(guī)【思考題】1. 方法比較試驗反映的是何種誤差？比較方法為何要用參考方法？ 2. 方法比較試驗的樣本有何具體要求？3.方法比較試驗后尚需做哪些統(tǒng)計分析？這些統(tǒng)計結(jié)果分別說明方法的哪些性能？4. 做方法比較試驗應(yīng)注意哪些事項？10/14/202278齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院生化教研室【思考題】1. 方法比較試驗反映的是何種誤差？比較方法為何 分離純化小麥胚芽中