中藥安全性質(zhì)量控制技術(shù)研究及應(yīng)用實(shí)例

1、第4章 中藥安全性質(zhì)量控制技術(shù)研究及應(yīng)用實(shí)例關(guān)于中藥藥有毒、無毒的的現(xiàn)代認(rèn)認(rèn)識一、毒的的涵義在本草中中是一個個廣義的的概念，有毒無無毒是指指藥物對對人體有有無毒性性而言。周禮謂：“聚聚毒藥以以共醫(yī)事事”，這這里的毒毒藥為中中藥的總總稱。明代張景景岳認(rèn)為為：“藥藥以治病病，因毒毒為能，所謂毒毒者，因因氣味之之偏也”。中藥毒性性的含義義：毒性即為為偏性（藥性）以偏糾偏偏是中藥藥治療疾疾病的基基本原則則用之得當(dāng)當(dāng)即可發(fā)發(fā)揮治療療作用用之不當(dāng)當(dāng)則可毒毒害機(jī)體體 兩種誤解解正確理解解中藥安全全無毒，無不良良反應(yīng)中藥有毒毒，全面面禁用中藥西藥藥都有不不良反應(yīng)應(yīng)利大于弊弊者，應(yīng)應(yīng)用弊大于利利者，禁禁用二、中

2、中藥安全全性的觀觀點(diǎn)國家食品品藥品監(jiān)監(jiān)督管理理局公布布2009年全國不不良反應(yīng)應(yīng)/事件報告告638996例。1、不良反反應(yīng)病例例中：化學(xué)藥占占86.7%，涉及3100多個品種種。中藥占13.3%，涉及2600多個品種種化學(xué)藥不不良反應(yīng)應(yīng)中，注注射劑占占61%。中藥不良良反應(yīng)中中，注射射劑占52%。2、說明：化學(xué)藥（西藥）的不良良反應(yīng)超超過中藥藥。注射劑的的不良反反應(yīng)超過過口服藥藥西藥注射射劑的不不良反應(yīng)應(yīng)超過中中藥注射射劑例1反應(yīng)停不良反應(yīng)應(yīng)近10000例（海豹豹兒）死亡近5000例三、舉例例說明例2 2007年美國FDA對十大藥藥品發(fā)出出最嚴(yán)重重的“黑框警告告”藥 品銷售額(美元)主要不良反

3、應(yīng)處 理抗抑郁藥，包括舍迪林、氟優(yōu)沙明等2006年206億服藥后出現(xiàn)自殺傾向黑框警告紅細(xì)胞生成類藥品2006年66億中風(fēng)、心肌梗塞、死亡黑框警告再普林2006年44億代謝障礙、肥胖2006年賠償7億美元，2007年又賠償5億美元文迪雅2006年34億心臟病發(fā)作及死亡率增高黑框警告，并有兩藥廠吊銷此藥生產(chǎn)艾可拓2006年30.5億增加心力衰竭風(fēng)險黑框警告另有5種暢銷藥被黑框警告，或被召回或停產(chǎn)小柴胡湯湯“肺炎”馬兜鈴酸酸“腎衰”魚腥草注注射劑“過敏性休休克”雙黃連注注射液“中毒死亡亡”活血破血血中藥臟臟器出血血臨床嚴(yán)重重毒性報報道頻頻頻中藥不良良反應(yīng)事事件關(guān)于中藥藥毒性的的熱點(diǎn)問問題“馬兜鈴”的

4、震撼撼“小柴胡湯湯”事件的的反思“魚腥草注注射液”的風(fēng)波波“馬兜鈴”的震撼撼1993年比利時時學(xué)者首首先發(fā)現(xiàn)現(xiàn)2例女性服服中草藥藥減肥治治療后，出現(xiàn)進(jìn)進(jìn)行性腎腎間質(zhì)纖纖維化，經(jīng)調(diào)查查發(fā)現(xiàn)該該減肥藥藥中加入入了防己己，患者者服用后后血肌酐酐于3個月內(nèi)升升高一倍倍，腎活活檢顯示示廣泛間間質(zhì)纖維維化。經(jīng)藥物成成分分析析發(fā)現(xiàn)，減肥膠膠囊中含含有馬兜兜鈴酸。至1998年在比利利時有100人患馬兜兜鈴酸腎腎病?！榜R兜鈴”的震撼撼比利時學(xué)學(xué)者報告告了服用用含有馬馬兜鈴酸酸的中草草藥致急急進(jìn)性腎腎功能衰衰竭，并并稱這種種腎臟損損害為“中草藥藥腎病(ChineseHerb Nephropathy,CHN)”。此

5、后，有有關(guān)馬兜兜鈴酸引引起腎臟臟損害的的問題，引起了了國內(nèi)外外學(xué)者的的廣泛關(guān)關(guān)注并陸陸續(xù)發(fā)表表有關(guān)研研究報告告?！榜R兜鈴”的震撼撼國內(nèi)學(xué)者者認(rèn)為，不宜籠籠統(tǒng)地將將馬兜鈴鈴類植物物引起的的腎臟損損害稱作作“中草草藥腎病病”。馬兜鈴酸酸(aristolochicacid，AA)是引起CHN的一類藥藥物的主主要毒性性成分之之一，故故稱為“馬兜鈴鈴酸腎病病”(AAN)較為合適適，目前國外外學(xué)者也也應(yīng)用了了這一病病名?！榜R兜鈴”的連鎖鎖反應(yīng)中藥馬兜兜鈴是馬馬兜鈴科科多年生生植物馬馬兜鈴的的成熟果果實(shí)?？唷⑽⑿列?，寒，歸肺、大腸經(jīng)經(jīng)。清肺化痰痰，止咳咳平喘。用量不宜宜過大，以免引引起嘔吐吐。中藥馬兜兜鈴“

6、馬兜鈴”的連鎖鎖反應(yīng)AA是馬兜鈴鈴科馬兜兜鈴屬植植物中所所含的共共同成分分，含有有或可能能含有馬馬兜鈴酸酸的常用用中藥品品種為馬兜鈴、天仙藤藤、青木木香、廣廣防己、關(guān)木通通、尋骨骨風(fēng)、朱朱砂蓮、細(xì)辛等?！榜R兜鈴”的連鎖鎖反應(yīng)含馬兜鈴鈴酸的常常見中成成藥有：龍膽瀉肝肝丸、耳耳聾丸、八正丸丸、純陽陽正氣丸丸、大黃黃清胃丸丸、當(dāng)歸歸四逆丸丸、導(dǎo)赤赤散、甘甘露消毒毒丹、排排石顆粒粒、跌打打丸、婦婦科分清清丸、冠冠心蘇合合丸、蘇蘇合丸、辛荑丸丸、十香香返生丸丸、濟(jì)生生桔核丸丸、止嗽嗽化痰丸丸等?！榜R兜鈴”的連鎖鎖反應(yīng)我國發(fā)生生了龍膽膽瀉肝丸丸的“馬馬兜鈴酸酸事件”原因是用用關(guān)木通通替代木木通2003年2

7、月28日國家藥藥品監(jiān)管管局發(fā)出出關(guān)于加強(qiáng)強(qiáng)對龍膽膽瀉肝丸丸監(jiān)督管管理的通通知木通為木通科科植物三三葉木通通Akebiatrifoliata(Thunb.)Koidz.的木質(zhì)莖莖藤。功效：瀉瀉火行水水通血脈。關(guān)木通為馬兜鈴鈴科植物物東北馬馬兜鈴AristolochiamandshuriensisKom.的莖藤。功效：清清心火，利小便便，通經(jīng)經(jīng)下乳?！榜R兜鈴”的連鎖鎖反應(yīng)2002年6月，美國國食品藥藥品管理理局宣布布禁售70多種含馬馬兜鈴酸酸的中成成藥。香港衛(wèi)生生署發(fā)言言人宣布布：將從從2004年6月1日起，停停止進(jìn)口口和銷售售含有馬馬兜鈴酸酸的中藥藥材及其其制劑。歐盟、澳澳洲等國國也禁止止含馬兜

8、兜鈴的中中藥材及及中成藥藥進(jìn)口?！靶〔窈鷾珳笔录靶〔窈鷾珳笔录〔窈鷾珳鲎詮垙堉倬皞摻M方：柴柴胡、人人參、黃黃芩、大大棗、半半夏、生姜姜、甘草草，共七七味藥功效：疏疏暢氣機(jī)機(jī)、調(diào)和和胃腸、和解表表里主治：傷傷寒少陽陽證。往往來寒熱熱、胸脅脅苦滿，苔苔白，脈脈弦“小柴胡湯湯”事件件常用于感感冒、慢慢性肝炎炎、肝硬硬化、急急慢慢性膽膽囊炎、膽結(jié)石石、急性性胰腺炎炎、胸膜膜炎、淋淋巴腺炎炎、胃炎炎、胃潰潰瘍等國內(nèi)外研研究證明明，小柴柴胡湯對對肝癌、肺癌、結(jié)腸癌癌等腫瘤瘤，預(yù)防防其惡性性轉(zhuǎn)化具具有一定定作用“小柴胡湯湯”曾風(fēng)風(fēng)靡日本本20世紀(jì)70年代初期期，日本本的津村村順天堂堂制成了

9、了小柴胡胡湯顆粒粒制劑。1976年，日本本京畿大大學(xué)東洋洋醫(yī)學(xué)研研究所主主任有地地滋教授授通過年研究究，在和和漢藥研研討會上上發(fā)表了了“津村村小柴胡胡湯顆粒粒對慢性性肝炎有有治療效效果”的的報告，在日本本引起不不同凡響響?！靶〔窈鷾珳痹L(fēng)風(fēng)靡日本本此后有21家漢方廠廠家加入入生產(chǎn)開開發(fā)小柴柴胡湯行行列，對對小柴胡胡湯進(jìn)行行多方面面的研究究，呈現(xiàn)現(xiàn)了空前前的小柴柴胡湯熱熱。20世紀(jì)70-90年代小柴胡湯湯在日本本是使用用最多的的藥物，廣泛地地應(yīng)用于于治療慢慢性肝炎炎。估計計每年服服用小柴柴胡湯者者有100萬人，消消費(fèi)金額額約90億130億日元?！靶〔窈鷾珳笔录?989年12月日本胸部部疾患

10、學(xué)學(xué)會雜志志首次報道道了小柴柴胡湯引引起藥物物性肺炎炎例，之后其其他報刊刊也陸續(xù)續(xù)刊登了了小柴胡胡湯引起起肝功損損傷之類類的報道道，對間間質(zhì)性肺肺炎尤為為重視。至1999年底，因因服小柴柴胡湯造造成間質(zhì)質(zhì)性肺炎炎已升為為188例，死亡亡22例?！靶〔窈鷾珳笔录?996年3月，日本本厚生省省在“緊緊急安全全情報”中發(fā)出出了“關(guān)關(guān)于小柴柴胡湯嚴(yán)嚴(yán)重的副副作用間質(zhì)性肺肺炎的警警告”。日本厚生生省2000年1月14日發(fā)出“醫(yī)藥品品醫(yī)療用用具等安安全性情情報”通通令：全全面禁止止肝炎、肝硬化化、肝癌癌患者使使用小柴柴胡湯。“小柴胡湯湯”事件件的反思思藥方無錯錯辨辨證有誤誤。濫用小柴柴胡湯是是造成悲悲

11、劇的主主因。中醫(yī)治病病強(qiáng)調(diào)辨辨證論治治。不根據(jù)癥癥狀反應(yīng)應(yīng)使用小小柴胡湯湯，又長長期服用用一個方方藥，脫脫離了中中醫(yī)辨證證論治理理論?！靶〔窈鷾珳笔录姆此妓贾兴幈仨氻氃谥嗅t(yī)醫(yī)理論指指導(dǎo)下應(yīng)應(yīng)用。日本的“小柴胡胡湯副作作用死亡亡事件”實(shí)質(zhì)，是違反反了中醫(yī)醫(yī)辨證論論治的原原則，違違反了中中醫(yī)治病病必辨方方證的原原則。“魚腥草注注射液”風(fēng)波目前上市市的含魚魚腥草的的注射劑劑魚腥草注注射液新魚腥草草素鈉氯氯化鈉注注射液新魚腥草草素鈉注注射液注射用新新魚腥草草素鈉復(fù)方蒲公公英注射射液炎毒清注注射液魚金注射射液目前在我我國有100多家生產(chǎn)企業(yè)業(yè)生產(chǎn)這這類產(chǎn)品品臨床使用用主要是是抗感染染治療魚腥草注注

12、射液不不良反應(yīng)應(yīng)魚腥草注注射液等等7個注射劑劑在臨床床應(yīng)用中中出現(xiàn)了了過敏性性休克、全身過過敏反應(yīng)應(yīng)、胸悶悶、心急急、呼吸吸困難和和重癥藥藥疹等嚴(yán)嚴(yán)重不良良反應(yīng)，甚至有有引起死死亡病例例報告。魚腥草注注射液不不良反應(yīng)應(yīng)從目前收收到的病病例報告告和文獻(xiàn)獻(xiàn)資料分分析表表明，含含魚腥草草的注射射劑與其其所引起起的過敏敏性不良良反應(yīng)，存在較較明確的的關(guān)聯(lián)性性。過敏性休休克的病病例報告告來源和和涉及企企業(yè)、批批號無明明顯集中中現(xiàn)象，說明過過敏反應(yīng)應(yīng)可能是是該類品品種的共共性問題題。2006年6月6日，國家家食品藥藥品監(jiān)管管局發(fā)出出的關(guān)于暫停停使用和和審批魚魚腥草注注射液等等7個注射劑劑的通告告2006年

13、9月：國家家藥監(jiān)局局發(fā)出關(guān)于肌注注用魚腥腥草注射射液等注注射劑恢恢復(fù)使用用申報資資料和程程序的通通知（急急件）（國食藥藥監(jiān)辦2006461號）常見中藥藥中毒原原因1.劑量過大大或長期期持續(xù)服服用。2.用法不當(dāng)當(dāng)，沒有有按中藥藥的正確確用法使使用。3.炮制不充充分，有有毒成分分含量過過高。4.患者不遵遵醫(yī)囑，自行服服藥。5.中藥品種種混亂、有毒藥藥物管理理不善。四、中藥藥中的有有害物質(zhì)質(zhì)（一）外外源性污污染：包包括重金金屬和農(nóng)農(nóng)藥殘留留；（二）內(nèi)內(nèi)源性毒毒性物質(zhì)質(zhì)：一般般是指中中藥自身身的一些些毒性次次生代謝謝產(chǎn)物。（一）中中藥材中中重金屬屬元素含含量測定定技術(shù)中國藥典典2010年版（一一部）要

14、要求，在在中藥中中通常監(jiān)監(jiān)控的有有害重金金屬主要要包括鉛鉛、鎘、汞、銅銅、砷等等。1.前處理方方法1.1濕法消解解所謂濕法法，是指指借助化化學(xué)反應(yīng)應(yīng)使固體體試樣轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化為溶溶液的分分解方法法。通常常是采用用單一或或混合強(qiáng)強(qiáng)酸，在在適當(dāng)?shù)牡臏囟认孪?，將樣樣品中的的有機(jī)成成分氧化化破壞，使金屬屬化合物物轉(zhuǎn)變?yōu)闉殡x子狀狀態(tài)。1.2干法消解解（灰化化法）該法是通通過高溫溫方法將將試樣中中的重金金屬元素素游離。一般是是將樣品品先于小小火炭化化至無煙煙，再移移入馬弗弗爐中高高溫灰化化完全，冷卻，用稀酸酸溶解灰灰分，定定量轉(zhuǎn)移移至量瓶瓶中。1.3壓力消解解罐消解解法（高高壓密封封溶樣法法）樣品仍采采用強(qiáng)酸酸消

15、解，與濕法法消解不不同的是是樣品要要置于聚四氟乙乙烯罐內(nèi)密封封，置于于烘箱內(nèi)內(nèi)在一定定溫度下下保持一一定時間間。1.4微波消解解法將樣品和和相應(yīng)的的試劑放放置于高高溫，高高壓密閉閉樣品罐罐或敞口口容器中中。利用用微波加加熱容器器中的消消解液，使各樣樣品快速速溶解的的濕法消消化。2.測定方法法2.1原子吸收收光譜法法（AAS）該法已被被中國藥典典2010年版收載載為測定定中藥材材中重金金屬的法法定方法法之一。根據(jù)各各種元素素的性質(zhì)質(zhì)及原子子化的方方法不同同，該法法又可分分為火焰焰原子化化法、非非火焰原原子化法法和低溫溫原子化化法。（1）火焰原原子化法法：該法是利利用化學(xué)學(xué)火焰使使物質(zhì)分分解并原原

16、子化的的方法?？捎糜谟阢~、鐵鐵、鋅、錳、鈣鈣等常量量元素的的檢測，缺點(diǎn)是是原子化化效率不不高，火火焰中中自由原原子濃度度很低，靈敏度度低。（2）非火焰焰原子化化法該法是利利用石墨管高溫下使使樣品原原子化通通過爐內(nèi)內(nèi)光路產(chǎn)產(chǎn)生吸收收 的原原理來測測定的。與火焰原原子化法法相比，石墨爐爐原子化化法樣品品消耗少少，特別別適用于于分析非非常少量量的試樣樣，靈敏敏度高；缺點(diǎn)是是石墨管管昂貴，不能同同時測定定多個元元素。該該法可用用于除汞以外外的重金屬屬元素測測定。（3）低溫原原子化法法該法是利利用化學(xué)學(xué)反應(yīng)方方法預(yù)處處理試樣樣，在室室溫至攝攝氏幾百百度的條條件下使使其原子子化，因因此又稱稱為化學(xué)學(xué)原子化

17、化法。冷原子子化法：該法專專用于汞元素的測定。將樣品消消解后還還原生成成汞，在在汞蒸氣氣發(fā)生器器中，用用載氣將將汞蒸氣氣吹出，通過石石英吸收收池的汞汞蒸氣對對汞空心心陰極燈燈的輻射射產(chǎn)生吸吸收，從從而進(jìn)行行定量分分析。氫化物物原子化化法：一一般用于于鉛、砷砷、汞等等元素的的測定。將氣態(tài)分分析物引引入石英英爐內(nèi)在在較低溫溫度下實(shí)實(shí)現(xiàn)原子子化的一一種方法法。它主主要是與與蒸氣發(fā)發(fā)生法配配合使用用。2.2原子熒光光光譜法法（AFS）原子熒光光光譜是介介于原子發(fā)射射光譜和原子吸收收光譜之間的光光譜分析析技術(shù)。它的基基本原理理是基態(tài)原子子（一般蒸蒸汽狀態(tài)態(tài)）吸收收合適的的特定頻頻率的輻射而被激發(fā)發(fā)至高能

18、能態(tài)，而而后激發(fā)發(fā)過程中中以光輻射的形式發(fā)發(fā)射出特特征波長的熒光，通過測測定原子子熒光的的強(qiáng)度即即可求得得樣品中中該待測測元素的的含量。2.3電感耦合合等離子子體原子子發(fā)射光光譜法（ICP-AES）本法為中國藥典典2010年版附錄錄新收載載的方法法。基本原理理是樣品品由載氣氣引入霧霧化系統(tǒng)統(tǒng)進(jìn)行霧霧化后，以氣溶溶膠形式式進(jìn)入等等離子體體的中心心通道，在高溫溫和惰性性氣氛中中被充分分蒸發(fā)、原子化化、電離離和激發(fā)發(fā)，使所所含元素素發(fā)射各各自的特特征譜線線。根據(jù)據(jù)各元素素特征譜譜線的存存在與否否，鑒別別樣品中中是否含含有某種種元素（定性分析析）；由特特征譜線線的強(qiáng)度度測定樣樣品中相相應(yīng)元素素的含量量

19、（定量分析析）。2.4電感耦合合等離子子體質(zhì)譜譜法（ICP-MS）與ICP-AES相比，該該法最大大的優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)是檢出出限極低低，達(dá)到到了pg.ml-1級的水平平。其次次分析精精密度高高、分析析速度快快、可同同時測定定含量差差別較大大的各組組分，可可用于絕絕大多數(shù)數(shù)重金屬屬元素的的定性分分析和定定量分析析，同時時進(jìn)行多種元素素及同位位素的測定，是目前前痕量元元素分析析領(lǐng)域中中最先進(jìn)進(jìn)的方法法。2.5其他方法法（1）比色法法：主要要用于重金屬總總量和總總砷的測定。（2）紫外分分光光度度法：該該法是利利用重金金屬元素素與試劑劑反應(yīng)后后顯色，在紫外外光下有有吸收的的原理來來測定重重金屬的的含量。多用于于

20、鉛、汞汞的測定定。（3）高效液液相色譜譜法（4）極譜法法（5）免疫學(xué)學(xué)方法（6）激光誘誘導(dǎo)擊穿穿光譜法法第二節(jié)中中藥藥中農(nóng)藥藥殘留測測定技術(shù)術(shù)一.前處理技技術(shù)中藥材的的提取與與凈化：目的是是將中藥藥材中殘殘留的微微量農(nóng)藥藥殘留物物提取出出來，又又不能引引入新的的溶劑污污染。實(shí)實(shí)際上是是分離與與凈化技技術(shù)的綜綜合應(yīng)用用。1.超臨界流流體萃取取技術(shù)（SFE）超臨界流流體，是是指溫度度和壓力力處于臨臨界溫度度和臨界界壓力之之上的流流體。常常用的萃萃取劑是是二氧化化碳，適適宜非極性和和極性較較小的物物質(zhì)的提取。若要提提取極性性大的成成分，可可以加入入適宜的的夾帶劑（如甲醇醇、乙醇醇和水等等）。2.固相

21、萃取?。⊿PE）和固相相微萃取取技術(shù)（SPME）固相萃取?。菏抢糜霉腆w吸吸附劑將將液體樣樣品中的的目標(biāo)化化合物吸吸附，使使其與樣樣品的基基體和干干擾化合合物分離離，然后后再用洗洗脫液洗洗脫或加加熱解吸吸附，達(dá)達(dá)到分離離和富集集目標(biāo)化化合物的的目的。固相微萃萃取法：根據(jù)吸吸附-解吸原理理，在進(jìn)進(jìn)樣器的的針頭部部分涂一一層固定定液或鍵鍵合一層層固定相相，直接接將其插插入液體體樣品或或樣品的的頂空，萃取、濃縮有有機(jī)化合合物后，將進(jìn)樣樣器直接接插入GC進(jìn)樣口加加熱，使使被測物物質(zhì)進(jìn)入入分析器器進(jìn)行測測定。主主要和氣氣相色譜譜以及液液相色譜譜聯(lián)用。3.加速溶劑劑萃?。ˋSE）加速溶劑劑萃取是是在較高高

22、的溫度度（50200）和壓力力（10003000psi或10.320.6MPa）下用溶劑萃取取固體或半半固體樣樣品的新新穎樣品品前處理理方法。優(yōu)點(diǎn)：有機(jī)溶溶劑用量量少，10g樣品一般般僅需15ml溶劑；快快速，完完成一次次萃取全全過程的的時間一一般僅需需15min；基體影影響?。惠腿⌒矢?，選擇性性好，已已進(jìn)入美美國EPA標(biāo)準(zhǔn)方法法；且使使用方便便、安全全性好，自動化化程度高高。4.凝膠滲透透色譜（GPC）凝膠滲透透色譜基基于體積積排阻的的分離機(jī)機(jī)制，是是利用有有機(jī)溶劑劑和疏水水凝膠大大分子從從樣品中中提取分分離不同同分子量量干擾物物的一種種常用有有效分離離技術(shù)。被測量的的高聚物物溶液通通過

23、一根根內(nèi)裝不不同孔徑徑的色譜譜柱，柱柱中可供供分子通通行的路路徑有粒粒子間的的間隙（較大）和粒子子內(nèi)的通通孔（較較小）。當(dāng)聚合合物溶液液流經(jīng)色譜柱時，較大大的分子子被排除除在粒子的小孔之之外，只只能從粒粒子間的的間隙通通過，速速率較快快；而較較小的分分子可以以進(jìn)入粒粒子中的的小孔，通過的的速率要要慢得多多。經(jīng)過過一定長長度的色色譜柱，分子根根據(jù)相對分子子質(zhì)量被分開，相對分分子質(zhì)量量大的在在前面（即淋洗洗時間短短），相相對分子子質(zhì)量小小的在后后面（即即淋洗時時間長）。二、定量量技術(shù)氣相色譜譜法定義：以惰性氣體體為流動相相，以固固定液或或固體吸吸附劑作作為固定定相的色色譜法稱稱為氣相相色譜法法。以

24、固定液液作為固固定相的的色譜稱稱為氣液色譜譜，以固體體吸附劑劑作為固固定相的的色譜稱稱為氣固色譜譜。原理：使混合物物中各組組分在兩兩相間進(jìn)進(jìn)行分配配,其中一相相是不動動的(固定相),另一相(流動相)攜帶混合合物流過過此固定定相,與固定相相發(fā)生作作用,在同一推推動力下下,不同組分分在固定定相中滯滯留的時時間不同同,依次從固固定相中中流出。通常采用用的檢測測器有：熱導(dǎo)檢測測器，火焰離離子化檢檢測器，氦離子子化檢測測器，超超聲波檢檢測器，光離子化化檢測器器，電子捕捕獲檢測測器，火焰光度度檢測器器，電化學(xué)學(xué)檢測器器，質(zhì)譜檢測器等等。 中國藥典典2010年版一部部附錄收收載氣相相色譜法法用來測測定農(nóng)藥藥

25、殘留量量，包含含了3中有機(jī)氯氯類、12種有機(jī)磷磷類和3種擬除蟲蟲菊酯類類農(nóng)藥。定量分析析與方法法學(xué)驗(yàn)證證生藥中化化學(xué)成分分的定量量分析是是評價生生藥質(zhì)量量的重要要手段。常用：分光光度法和色色譜法。用于生藥藥定量分分析的方方法必須須進(jìn)行驗(yàn)驗(yàn)證，以以證明采采用的含含量測定定符合相相應(yīng)的分分析要求求。驗(yàn)證證內(nèi)容：準(zhǔn)確度度、精密密度、專專屬性、檢測限限、定量量限、線線性、范范圍和耐耐用性。（一）準(zhǔn)準(zhǔn)確度指用該方方法測定定的結(jié)果果與真實(shí)實(shí)值或參參考值接接近的程程度，一般用回回收率表表示。應(yīng)應(yīng)在規(guī)定定的范圍圍內(nèi)測試試。測定方法法的準(zhǔn)確度度用已知純純度的對對照品做做加樣回回收率測測定，加入對照照品的量量要適

26、當(dāng)當(dāng)對照品的的加入量量與供試試品中已已知含有有量之和和必須在在標(biāo)準(zhǔn)曲曲線線性性范圍之之內(nèi)。數(shù)據(jù)要求求同一濃度度供試品溶溶液，6個測定結(jié)結(jié)果或3不同濃度度分別制制備3份不同溶溶液。一般中間間濃度為為所取供供試品含含量的100%水平，80%120%（二）精精密度一般用偏偏差、標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差差或相對對標(biāo)準(zhǔn)偏偏差表示示。重復(fù)性（批內(nèi)精精密度）系指同一一分析人人員在同同一條件件下對同同一批樣樣品至少少制備6份以上或或3個不同濃濃度分別別制備3粉供試品品溶液（9份），進(jìn)進(jìn)行測定定，計算算相對標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差差（RSD），RSD值一般要要求不大大于5。中間精密密度系指在同同一個實(shí)實(shí)驗(yàn)室，在不同同時間由由不同分分析人員

27、員用不同同設(shè)備測測定結(jié)果果之間的的精密度度。考察察隨機(jī)變變動因素素對精密密度的影影響。3.重現(xiàn)性系指在不不同實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室由不不同分析析人員測測定結(jié)果果之間的的精密度度。（三）專專屬性又稱為選選擇性性。通常以不不含被測測成分的的供試品品作為空空白樣品品進(jìn)行試試驗(yàn)來說說明。（四）檢檢測限供試品中中被測成成分能被被檢出的的最低濃濃度或最最小量，無需準(zhǔn)準(zhǔn)備定量量。（五）定定量限指供試品品中被測測成分能能被定量量測定的的最低量量，反應(yīng)分析析方法是是否具備備靈敏的的定量檢檢測能力力。（六）線線性范圍（八）耐耐用性系指在測測定條件件有小的的變動時時，測定定結(jié)果不不受影響響的承受受程度。二、定量量技術(shù)2.高效液相

28、相色譜法法（HPLC）定義：高效液液相色譜譜是以液體為流動相，采用高高壓輸液液系統(tǒng)，將具有有不同極性的單一溶劑或不同比比例的混合溶劑劑、緩沖液液等流動動相泵入入裝有固固定相的的色譜柱，在柱內(nèi)內(nèi)各成分分被分離離后，進(jìn)進(jìn)入檢測測器進(jìn)行行檢測，從而實(shí)實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。特點(diǎn)：高壓、高高效、高高速。尤其適合合于高沸沸點(diǎn)、受受熱不穩(wěn)穩(wěn)定易分分解的農(nóng)農(nóng)藥殘留留檢測，如取代代脲、氨氨基甲酸酸酯、黃黃酰脲類類農(nóng)藥。 2020-01-17根據(jù)流動相相和固定定相的相相對極性性的不同同可以將將HPLC分為2種種類型，即正相和反相色譜。在在正相液液相色譜譜中，流流動相的的極性小小，通常常為非極極性的烷烷烴，固固定相的的

29、極性大大，通常常為硅膠膠、纖維維素等；在反相相液相色色譜中，流動相相的極性性大，通通常為水水一甲醇醇溶液、水一乙乙氰溶液液等，固固定相通通常為鍵鍵合的C18、C4等,極性性較弱。反相液相相色譜的的應(yīng)用相相對廣泛泛。2020-01-17液相色譜譜的定性依據(jù)據(jù)是保留時時間的相相對性，通常相相對誤差差不能大大于5。定量量參數(shù)常常常采用用峰高、峰面積積、相對對峰高、相對峰峰面積等等。定量方法法通常采用用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法法和面積積歸一化化法。外標(biāo)法可可分為外外標(biāo)一點(diǎn)點(diǎn)法、標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線線法等。2020-01-17l、外標(biāo)一點(diǎn)點(diǎn)法(直直接比較較法)用與樣品品類似的的濃度的的標(biāo)準(zhǔn)溶溶液，等等量進(jìn)樣樣，比較較它們的

30、的峰高或或峰面積積。Cx一未知樣樣濃度Cd標(biāo)樣濃度度Ax未知樣峰峰面積A標(biāo)樣峰面面積 2020-01-172、外標(biāo)標(biāo)法(工工作曲線線法)Cx一未知樣樣濃度Ax未知樣峰峰面積Kx一直接斜斜率（1）柱切換換高效液液相色譜譜技術(shù)柱切換技技術(shù)是指指用閥來來改變流流動相走走向和流流動相系系統(tǒng)，從從而使洗洗脫液在在一特定定時間內(nèi)內(nèi)從預(yù)處處理柱進(jìn)進(jìn)入到分分析柱的的在線線固相分分離技術(shù)術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：提高色色譜系統(tǒng)統(tǒng)的分辨辨率和選選擇性；使待測測組分富富集，提提高靈敏敏度；在一個個網(wǎng)絡(luò)系系統(tǒng)中實(shí)實(shí)現(xiàn)多個個分離目目標(biāo)；在線衍衍生化，提高靈靈敏度和和重現(xiàn)性性；在線凈凈化樣品品，樣本本不需預(yù)預(yù)處理或或預(yù)處理理大大簡簡化，

31、可可直接進(jìn)進(jìn)樣分析析。（2）高效液液相色譜譜柱后衍衍生熒光光法該方法主主要是針針對氨基基甲酸酯酯類農(nóng)藥藥。衍生化是是藥物分分析中常常用的一一種分析析手段。其原理理是待測測樣品與與衍生化化試劑定定量快速速反應(yīng)，并加入入特定的的功能的的基團(tuán)生生成符合合檢測要要求的衍衍生化物物，通過過檢測生生成衍生生化物的的量間接接測定待待測樣品品的量。通過合適適的化學(xué)學(xué)反應(yīng),生成特殊殊衍生化化物，1.改變待測測物的色色譜保留留特性以以改善分分離度；2.改變待測測物的檢檢測特性性，以增增加其對對檢測器器的響應(yīng)（例：紫外標(biāo)標(biāo)記、熒熒光標(biāo)記記、電化化學(xué)標(biāo)記記）；3.生成穩(wěn)定定的衍生生化物，改善待待測物的的不穩(wěn)定定性（例

32、：-SH基團(tuán)易氧氧化的問問題可通通過?；瘉斫鉀Q決）。化學(xué)衍生生化的目目的:HPLC化學(xué)衍生生化分類類在線化學(xué)學(xué)衍生化化是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機(jī)機(jī)離線化學(xué)學(xué)衍生化化柱前衍生生化發(fā)生衍生生化發(fā)應(yīng)應(yīng)的先后后柱后衍生生化柱前衍生生化在色譜分分離前，預(yù)先將將樣品制制成適當(dāng)當(dāng)?shù)难苌铮蝗缓笤龠M(jìn)進(jìn)入色譜譜柱進(jìn)行行分離檢檢測。優(yōu)點(diǎn)：（1）對用作作流動相相的溶劑劑體系沒沒有限制制；（2）反應(yīng)條條件，反反應(yīng)速率率不受限限制；（3）通過選選擇合適適的試劑劑以及萃萃取方法法，可以以消除許多多干擾；（4）過量溶溶劑、試試劑容易易除去；（5）轉(zhuǎn)變成成合適的的衍生物物，可使使分離度度改進(jìn)。缺點(diǎn):（1）操作過過程繁瑣瑣，

33、容易易影響定定量準(zhǔn)確確性。（2）當(dāng)一個個復(fù)雜組組分樣品品經(jīng)過衍衍生化反反應(yīng)后，有可可能產(chǎn)生生多種衍衍生化產(chǎn)產(chǎn)物給色色譜分離帶帶來困難難。柱后衍生生化將樣品先先注入色色譜柱，按選定定的色譜譜條件使使樣品組組分得以以分離，當(dāng)各個個組分從從色譜柱柱流出后后，分別別與衍生生化試劑劑相遇，在一定定的反應(yīng)應(yīng)條件下下，生成成具有某某種檢測測特性的的衍生化化產(chǎn)物再再進(jìn)入檢檢測器。要求：（1）對流動動相的選選擇更嚴(yán)嚴(yán)格，必必須考慮慮衍生化化試劑、反反應(yīng)產(chǎn)物物的溶解解度，以以及它們們與流動相可能能發(fā)生的的副反應(yīng)應(yīng)；（2）由于在在高效液液相色譜譜中采用用高流速速，因此此反應(yīng)速率率必須很很快（小小于30s）；（3）檢測器器對衍生生化試劑劑不能有有響應(yīng)。柱后衍生生流程圖圖如下：泵進(jìn)樣閥色譜柱衍生化試試劑泵反應(yīng)器檢測器記錄儀紫外衍生生化熒光衍生生化電化學(xué)衍衍生化手性衍生生化固定化酶酶反應(yīng)器器（IMER）衍生化反反應(yīng)類別別：熒光衍生生反應(yīng)在液相色色譜法中中，熒光光檢測器器是一種種高靈敏敏度、高高選擇性性的檢