微生物培養(yǎng)基配制

1、微生物培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基是指人工配制的、適合于微生物生長繁殖或累積代謝產(chǎn)物所需的各種營養(yǎng)物的混合基質(zhì)。配制培養(yǎng)基是進(jìn)行微生物檢驗(yàn)工作的基礎(chǔ),甚至是任何與微生物有關(guān)工作的基礎(chǔ)。注意事項(xiàng) 滅菌鍋的使用加水蓋過底部鐵板放入東西關(guān)門調(diào)整溫度時(shí)間關(guān)緊泄壓閥滅菌結(jié)束後，等壓力降回零時(shí)才可打開門進(jìn)入滅菌鍋 之物品，蓋子不可關(guān)太緊或太鬆拿滅菌後物品請(qǐng)記得帶耐熱手套培養(yǎng)基中的主要成分及其作用：營養(yǎng)物質(zhì)： N源、C源、無機(jī)鹽、生長因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇類物質(zhì)（單糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖雙糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纖維素、菊糖；醇類：甘露醇、衛(wèi)茅醇、甘油

2、）水：用蒸餾水，不能用自來水 凝固劑：瓊脂、明膠、血清等抑制劑：1、作用：鑒定細(xì)菌、抑制雜菌的生長繁殖，增加待檢菌的檢出率2、種類：鹽類：氯化鈉、氯化鋰、氰化鉀、亞碲酸鉀（鈉）、亞硒酸鈉等染色劑類：煌綠、薔薇酸、結(jié)晶紫、孔雀綠、孟加拉紅、玫瑰紅膽鹽類：豬（牛、羊）膽鹽、混合膽鹽、三號(hào)膽鹽、去氧膽酸鹽、膽石酸鹽抗菌素：青霉素、鏈霉素、桿菌肽、多粘菌素 指示劑1、作用：用于指示鑒別細(xì)菌可否利用分解糖醇類物質(zhì)和含氮化合物，產(chǎn)酸產(chǎn)堿的能力。2、常用的指示劑：酚紅、溴甲酚紫、中性紅、中國藍(lán)、甲基紅、復(fù)紅、伊紅、美藍(lán)、孔雀綠等。培養(yǎng)基的類型：根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分：1、液體培養(yǎng)基 ：主要用于增菌培養(yǎng)、

3、鑒別性培養(yǎng)2、固體培養(yǎng)基：用作微生物的分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、保藏、生物測(cè)定3、半固體培養(yǎng)基：觀察微生物的動(dòng)力，有時(shí)用來保藏菌種4、脫水(商品)培蕎基：脫水培養(yǎng)基也稱為商品培養(yǎng)基、預(yù)制干燥培養(yǎng)基。將各種營養(yǎng)成分按比例配制完全,制成脫水的干粉狀,裝瓶出售;使用時(shí)只需按比例加人定量的水溶化、滅菌便可。根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分：增殖培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基： 在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質(zhì)，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基。 能夠給微生物提供較適當(dāng)?shù)纳L環(huán)境從而使微生物大量繁殖的培養(yǎng)基稱為增菌培養(yǎng)基。增菌、運(yùn)送用培養(yǎng)基2、

4、選擇培養(yǎng)基 ：在培養(yǎng)基中加入抑制劑以殺死或抑制不需要的菌種,分離對(duì)象因?qū)υ撘种苿┯锌剐远ＩL繁殖的培養(yǎng)基,稱之為選擇培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)用的培養(yǎng)基3、鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入指示劑或化學(xué)藥品,目的菌經(jīng)培養(yǎng)后其代謝產(chǎn)物與化學(xué)試劑發(fā)生顯色反應(yīng),因而用肉眼可快速鑒別出目的菌,這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如:伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基用于食品、乳制品、水源和病源標(biāo)本中革蘭氏陰性腸道菌的分離和鑒別鑒別用培養(yǎng)基4、活體培養(yǎng)基：病毒、立克次氏體等專性寄生微生物不能在一般培養(yǎng)基上生長,常用雞胚、活細(xì)胞和動(dòng)物進(jìn)行培養(yǎng)。采用雞胚培養(yǎng)時(shí),將微生物接到絨毛尿囊膜、尿囊、羊

5、膜囊和卵黃囊中進(jìn)行培養(yǎng),即可得培養(yǎng)物。 細(xì)胞培養(yǎng)指將病毒接種到體外培養(yǎng)的活細(xì)胞上使其增殖。（三）培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng) 培養(yǎng)基的制備記錄 培養(yǎng)基成分的稱取 培養(yǎng)基各成份的混合和溶化 培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正 培養(yǎng)基的過濾澄清 培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試 培養(yǎng)基的保存 1、培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等。記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。2、培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷。

6、可將配方置于傍側(cè)，每稱完一種成分即在配方上面做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。3、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化指示劑應(yīng)在調(diào)節(jié)好pH值后再加入； 煮溶后要補(bǔ)加足水份；不能把培養(yǎng)基煮焦，焦化的不能使用。4、培養(yǎng)基pH的校正滅菌后pH值會(huì)下降0.10.2，在做培養(yǎng)基校正pH值時(shí)，應(yīng)比實(shí)際值高0.10.2；pH調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸。5、培養(yǎng)基的過濾澄清液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法 瓊脂培養(yǎng)基,可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾、培養(yǎng)基的分裝斜面： 1/管 半固體培養(yǎng)基：1/3管高層斜面：1/41/3管 平板：1315ml7、培養(yǎng)基的滅菌（1）含糖類或明膠的培養(yǎng)基： 113滅菌15分鐘或115滅菌10分鐘。（2）無糖培養(yǎng)基： 121滅菌1520分鐘。（3）血液、體液和抗生素等以無菌操作技術(shù)抽取后再加入冷卻至約50左右的培養(yǎng)基中。（4）瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后冷至55-60時(shí)取出，再擺置成適當(dāng)斜面。8、培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試（）如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。（）將全部培養(yǎng)基放入361C恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。（）用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種12管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)2448小時(shí)，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追