毒性酶類試驗

1、毒性酶類試驗（一） 溶血試驗1、原理: 某些細菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動物的紅細胞發(fā)生溶解，不同的細菌有不同的溶血反應，借此可鑒別細菌。2 試驗方法: 平板法 試管法（1）平板法:將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，361 培養(yǎng)24 48h，觀察結(jié)果。溶血試驗的溶血類型及現(xiàn)象:（1） （甲型）溶血: 菌落周圍出現(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)。（2） （乙型）溶血: 菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)。（3）（-丙型）溶血: 菌落周圍無溶血環(huán)。（2）試管法: 將待檢菌培養(yǎng)液與等量的2%羊血球混合，在361 培養(yǎng)16 18h，觀察結(jié)果。如溶血，培養(yǎng)液可出現(xiàn)透明狀。3、結(jié)果觀察與記錄:有溶血現(xiàn)象，為陽

2、性，記+；無溶血現(xiàn)象，為陰性，記 -(二) 鏈激酶試驗1、原理： A群鏈球菌群能產(chǎn)生鏈激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，而后溶解纖維蛋白，使血凝塊溶解 ,為陽性反應。此試驗用于測定鏈球菌的致病性。陽性反應具有致病性。2、試驗方法：吸取草酸鉀血漿0.2 mL(0.01 g草酸鉀加5 mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液)，加入0.8 mL生理鹽水，混勻后，再加入待檢菌36下培養(yǎng)18-24h肉湯培養(yǎng)物0.5 mL和0.25氯化鈣0.25 mL，混勻，放37水浴中，2 min觀察一次。待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時間。如2 h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24 h后觀察。同時用肉浸液肉湯做陰

3、性對照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。3、結(jié)果觀察與記錄；如凝塊全部溶化,為陽性+凝塊24 h仍不溶化,為陰性-（三）卵磷脂酶試驗1、原理：某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細菌。2、試驗方法：（1）卵黃平板法 A法：將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或點種于卵黃瓊脂平板上，361 培養(yǎng)3 6h，觀察結(jié)果。B 法：先用卵黃磷脂酶抗血清將平板涂一半，置于36 待干后，將待檢菌接種于未涂抗血清的一半卵黃瓊脂平板上，再轉(zhuǎn)劃已涂過抗血清的一半，361 厭氧培養(yǎng)24

4、 48h，觀察結(jié)果。在未涂抗血清的一半平板上，菌落周圍形成較大的不透明乳白色混濁區(qū)，在涂抗血清的一半平板上，菌落周圍無不透明混濁區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。乳糖卵黃瓊脂平板,借以確定該菌可否產(chǎn)生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相應抗血清所抑制，（2）卵黃鹽水法：將庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物經(jīng)除菌過濾，收集濾液。在兩支滅菌試管內(nèi)，每管加入1%卵黃鹽水0.4mL,在一管中加入濾液0.2mL，另一管加入生理鹽水0.2mL作對照。在36 水浴中，經(jīng)2h、 4h、 8h、 24h觀察結(jié)果。管底發(fā)生混濁沉淀，對照管無沉淀者，為陽性。3、結(jié)果觀察與記錄：菌落周圍形成較大的不透明區(qū)，為陽性。兩邊均無不透

5、明區(qū)，為陰性。管底發(fā)生混濁沉淀，對照管無沉淀者，為陽性。兩管無沉淀者，為陰性。（四） 血漿凝固酶試驗1、原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象,為陽性。2、試驗方法（1）玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔（人）血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5 min內(nèi),如血漿內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，則為陽性;如兩者呈均勻混濁，無凝固則為陰性。（2）試管法：取滅菌小試管3支，各加入血漿無菌水(1:1)0.5ml，1支加入被檢菌株的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液（或濃菌懸液）0.5ml；其余2支作對照管，1支加入金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌懸液0.5ml作陽性對照;另1支加入營養(yǎng)肉湯或0.9氯化鈉溶0.5ml作空白對照。將3管同時放37溫箱或水浴中培養(yǎng)，每0.5 h觀