抗炎中藥機理教材課件

抗炎免疫中藥的作用機制及相關研究楊偉鵬中藥藥代動力學研究室中國中醫(yī)科學院碩士研究生中藥藥理學主要內(nèi)容炎癥簡介抗炎免疫中藥的作用機制雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮抗炎作用的機理研究炎癥炎癥概念：炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子所發(fā)生的，由多種細胞、多種因子參與的復雜防御反應。是人類疾病的一種最常見的病理過程，大多數(shù)疾病均與此有關，如感染，腫瘤，心腦血管病，老年癡呆等。它是醫(yī)學生物學中最原始、最復雜又最具挑戰(zhàn)的新課題（NewAdventuresofanOldFlame）。它是我們防治人類重大疾病的一個最基本、最重要的共同公路。臨床表現(xiàn)：局部表現(xiàn)：紅、腫、熱、痛及功能障礙。紅、熱：血管擴張、血流加速。腫脹：炎癥性充血、液體和細胞成分滲出。疼痛：滲出物壓迫和炎癥介質(zhì)直接作用于神經(jīng)末梢。功能障礙：在以上病變基礎上基于部位性質(zhì)和嚴重程度不同引起不同的功能障礙。全身反應：發(fā)熱、外周白細胞變化等。發(fā)熱：致炎因子作用于機體，通過各種細胞因子作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，產(chǎn)熱增加，散熱減少，體溫升高。白細胞變化：中性粒細胞增加-細菌感染引起的急性炎癥早期和化膿性炎癥。淋巴細胞增加-慢性炎癥和病毒感染。嗜酸性粒細胞增加-過敏或寄生蟲感染。白細胞減少-病毒、立克次體、傷寒等常見致炎因素：物理因素（高熱低溫、紫外線、放射線等）化學因素（強酸、強堿、松節(jié)油、芥子氣等）機械因素（切割、撞擊、擠壓等）生物因素（細菌、病毒、立克次體、支原體、真菌等）免疫因素（各種變態(tài)反應、自身免疫性疾病等）炎癥基本病理變化：變質(zhì)、滲出、增生變質(zhì)--炎癥局部組織所發(fā)生的變性或壞死滲出--炎癥局部組織血管內(nèi)的液體和白細胞通過血管壁進入間質(zhì)和漿膜腔的過程。以血管反應為中心的滲出病變是炎癥的標志。增生--炎癥局部的巨噬細胞、內(nèi)皮細胞和纖維母細胞的增生。炎癥是損傷（變質(zhì)）、抗損傷（滲出）、修復（增生）三位一體的過程。炎癥過程及參與炎癥反應的組織成分：吞噬細胞（巨噬細胞、中性粒細胞、嗜酸性細胞）、血小板和血管內(nèi)皮細胞，受刺激后活化，產(chǎn)生一系列炎性介質(zhì)，引起炎癥級聯(lián)反應。激活的巨噬細胞和白細胞能殺滅病原體，清除異物，促進損傷組織的修復。炎癥的防御作用及潛在危害：防御作用對機體有利，消除致病因子，液體的滲出可稀釋毒素，吞噬搬運壞死組織以利于再生和修復，使致病因子局限在炎癥部位而不致蔓延全身。危害：嚴重過敏危及生命、喉部嚴重水腫可致窒息、腦膜炎可致顱內(nèi)壓升高壓迫中樞而至死亡，炎癥性瘢痕可致腸梗阻或關節(jié)活動受限等。炎癥的分類急性炎癥慢性炎癥起病起病急驟，持續(xù)時間短持續(xù)時間長特征以滲出病變?yōu)樘卣饕栽錾∽優(yōu)橹餮准毎櫼灾行粤＜毎麨橹饕跃奘杉毎土馨图毎麨橹鞒潭却祟愌装Y反應劇烈，組織和器官在短期內(nèi)發(fā)生嚴重的損害，甚至導致機體死亡致炎因子毒力較弱，但持續(xù)存在并引起異常免疫反應，全身癥狀不明顯，但常有嚴重的繼發(fā)功能障礙抗炎實驗方法非特異性炎癥模型早期炎癥模型毛細血管通透性實驗法：耳腫脹、腹腔染料滲出–毛細血管擴張及通透性亢進急性關節(jié)腫脹實驗：足腫脹—滲出、水腫中期炎癥模型：羧甲基纖維素囊法—血小板黏附、白細胞游走晚期炎癥模型：棉球肉芽腫法–纖維組織增生、肉芽屏障形成特異性炎癥模型大鼠佐劑性關節(jié)炎：常作為類風濕性關節(jié)炎的一種實驗模型。將福氏完全佐劑（FCA）皮內(nèi)注入大鼠足跖或尾根部致炎，歷經(jīng)急性局部炎癥（第1-4天）、急性炎癥緩解（7-12天）、以多發(fā)性關節(jié)炎為特征的慢性周身炎癥（10-28天）及永久性關節(jié)畸形（第35天以后）等四個階段。本病的發(fā)生與單核細胞的異?；罨鸵种菩訲細胞功能的降低有關。膠原誘導關節(jié)炎：將II型膠原（關節(jié)軟骨的一種主要成分）加入福氏不完全佐劑（FICA）中，皮內(nèi)注入大鼠足跖或尾根部致炎。反應與大鼠佐劑性關節(jié)炎相似?？乖T導關節(jié)炎：將抗原加入FCA中，給家兔皮內(nèi)注射致敏，2-3周后，給已致敏兔的一側關節(jié)內(nèi)注射抗原，其關節(jié)病變的病理組織學和慢性過程，與類風濕關節(jié)炎相似。被動轉移關節(jié)炎：用ConA活化佐劑性關節(jié)炎大鼠的脾淋巴細胞，將其與IgG一起靜脈注射受體鼠，3天后出現(xiàn)多發(fā)性關節(jié)炎，第13-15天，病變最嚴重，可見四肢關節(jié)廣泛性骨質(zhì)疏松、骨膜增厚等，最后引起關節(jié)畸變。一般認為該模型較其它模型更接近人的類風濕性關節(jié)炎。炎性介質(zhì)的分類雖然部分致炎因子可直接引起局部組織發(fā)生急性炎癥反應，但多數(shù)急性炎癥過程是由一系列內(nèi)源性化學因子介導實現(xiàn)的，這類化學因子稱為炎癥介質(zhì)。包含細胞釋放的炎癥介質(zhì)和體液中產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)。細胞釋放的炎癥介質(zhì)：血管活性胺、花生四烯酸代謝產(chǎn)物、白細胞產(chǎn)物、細胞因子、血小板活化因子、神經(jīng)肽、NO體液中產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)：補體系統(tǒng)、激肽系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)。1，血管活性胺（組胺和5-羥色胺）組胺：存在于肥大細胞、嗜堿性粒細胞的顆粒中，也存在于血小板顆粒中?？梢鸺殑用}擴張、細靜脈內(nèi)皮細胞收縮，導致血管通透性升高。對嗜酸性粒細胞有趨化作用。5-羥色胺：由血小板釋放，與血管通透性升高有關。2，花生四烯酸代謝產(chǎn)物：（前列腺素、白三烯）炎癥過程中花生四烯酸的代謝膜磷脂花生四烯酸5-HPETEPGG2血小板活化因子PAFPGH2PGI2PGF2PGE2TXA2白三烯A4（LTA4）LTB4LTC4，

LTD4，

LTE4痛敏感血管擴張，血小板解聚收縮支氣管致痙原血管舒張、痛敏感、致熱血小板聚集、血管收縮趨化作用血管收縮、支氣管收縮、血管通透性增加環(huán)氧酶5-脂氧酶血管舒張、通透性增加、支氣管收縮、趨化作用PGD2磷脂酶A23，白細胞產(chǎn)物：活性氧代謝產(chǎn)物：氧化應激：是1990年美國提出的一種病生理概念，是指機體在內(nèi)外環(huán)境有害刺激的條件下，體內(nèi)產(chǎn)生活性氧自由基（ROS）和活性氮自由基（RNS）所引起的細胞和組織的生理和病理反應。ROS有超氧陰離子（O2-）、羥自由基（OH-）和過氧化氫（H2O2）等等；RNS有一氧化氮（NO）、二氧化碳（CO2）和過氧亞硝酸鹽（ONOO-）等等。由于它們可以直接或間接氧化或損傷DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，可誘發(fā)基因的突變、蛋白質(zhì)變性和脂質(zhì)過氧化，被認為是人體衰老和各種重要疾病如腫瘤、心腦血管疾病、神經(jīng)退行性疾?。ɡ夏臧V呆）、糖尿病等等最主要的危險因子。除殺傷細菌外，還可釋放到細胞外引起多種細胞因子表達增加，促進炎癥反應1，損傷血管內(nèi)皮細胞導致血管通透性增加，2，滅活抗蛋白酶，導致蛋白酶活性增加，可破壞組織結構成分3，損傷紅細胞和其他實質(zhì)細胞中性粒細胞溶酶體成分：中性粒細胞的死亡、吞噬泡形成過程中的外溢及出胞作用，溶酶體成分可外釋，介導急性炎癥。4，細胞因子：主要由激活的淋巴細胞和單核巨噬細胞產(chǎn)生。見后5，血小板活化因子（PAF）：激活血小板，引起血小板粘附、聚集、釋放組胺、5-HT，還能活化單核巨噬細胞和內(nèi)皮細胞，增加血管通透性、促進白細胞聚焦和粘著以及趨化作用。此外還具有影響全身血流動力學的功能。嗜堿性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞和內(nèi)皮細胞均能釋放PAF，PAF一方面可直接作用于靶細胞，還可刺激細胞合成其他炎癥介質(zhì)，特別是PG和白三烯的合成。6，神經(jīng)肽：例如P物質(zhì)，可直接和間接刺激肥大細胞脫顆粒，通過NF-κB途徑促進淋巴細胞表達IL-6、IL-8以及巨噬細胞蛋白-1β，引起血管擴張和通透性增加；血管活性腸肽（VIP）可抑制肥大細胞脫顆粒和改變其顆粒內(nèi)容物，抑制前炎癥因子IL-6、IL-12、TNF-α和iNOS的產(chǎn)生，促進抗炎因子IL-10的產(chǎn)生，發(fā)揮調(diào)節(jié)炎癥的作用；降鈣素基因相關肽（CGRP）有較強的舒張真皮微血管作用，又能刺激微血管內(nèi)皮細胞和單核細胞活化，使其分泌趨化因子IL-8，誘導內(nèi)皮細胞與單核細胞及中性粒細胞的粘附作用。7，一氧化氮NO：生理狀況下，血管內(nèi)皮細胞有少量NO產(chǎn)生，可松弛血管平滑肌，引起血管擴張。炎癥和損傷，如缺血-再灌注損傷時，血管內(nèi)皮細胞功能障礙，導致NO生成減少；而單核巨噬細胞、血管平滑肌細胞等在LPS、TNF-α、IL-1、IFN作用下，產(chǎn)生大量NO。作用：一方面，NO可通過增加局部血流，促進血漿的滲出和水腫的形成，引起細胞毒作用和組織損傷；另一方面，NO還具有抗炎作用，可減少血小板的聚集和粘附、抑制肥大細胞誘發(fā)的炎癥反應、減少急性炎癥灶內(nèi)的白細胞聚集，而阻斷NO的產(chǎn)生則可促進白細胞的滾動和粘著；NO有個不成對電子，可與白細胞的活性氧代謝產(chǎn)物結合，形成過氧亞硝酸鹽（ONOO-）和NO2等，通過破壞微生物的DNA、蛋白質(zhì)和脂類而殺滅之。體液中產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)：補體系統(tǒng)、激肽系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)補體系統(tǒng)：C3和C5的激活最重要，C3a和C5a是重要的炎癥介質(zhì)，從以下三方面影響炎癥：1，C3a和C5a通過肥大細胞和單核細胞增加血管通透性，引起血管擴張；C5a還能激活花生四烯酸代謝的脂氧酶途徑，使中性粒細胞和單核細胞進一步釋放炎癥介質(zhì)；2，C5a是中性粒細胞和單核細胞的趨化因子，通過激活中性粒細胞增加整合素的表達，引起中性粒細胞粘著于血管內(nèi)皮細胞；3，C3b結合于細菌細胞壁時具有調(diào)理素作用，可增強中性粒細胞和單核細胞的吞噬活性。激肽系統(tǒng)：血漿中的激肽原在激肽釋放酶作用下裂解生成具有活性的緩激肽，緩激肽可引起細動脈擴張、內(nèi)皮細胞收縮、細靜脈通透性增加，還可使血管以外的平滑肌收縮以及在炎癥局部產(chǎn)生疼痛。緩激肽作用十分短暫，很快被血漿和組織中的激肽酶滅活，其作用主要局限在血管通透性增加的早期。激肽釋放酶本身也具有趨化性，能直接使C5轉化為C5a。凝血系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)：凝血酶在使纖維蛋白原轉化為纖維蛋白的過程中釋放纖維蛋白多肽，凝血酶可促使白細胞粘著和成纖維細胞增生，纖維蛋白多肽可使血管通透性增高，同時具有白細胞趨化作用。纖維蛋白溶解系統(tǒng)可通過激肽系統(tǒng)引起炎癥的血管變化。由內(nèi)皮細胞、白細胞和其他組織產(chǎn)生的纖維蛋白溶解原激活因子，能使纖維蛋白溶酶原轉變成纖維蛋白溶酶，表現(xiàn)出炎癥活性：啟動緩激肽的生成過程、裂解C3生成C3a、降解纖維蛋白產(chǎn)生裂解產(chǎn)物，使血管通透性增加。炎癥介質(zhì)的特點特點：炎性介質(zhì)來自白細胞和血漿，前者以顆粒形式儲存于細胞內(nèi)，需要時或在致炎因子作用下合成并釋放；后者以前體形式存在于血漿中，經(jīng)蛋白水解酶裂解才能被激活。多數(shù)炎性介質(zhì)通過與靶細胞表面的特異性受體結合發(fā)揮生物活性，少數(shù)本身具有酶活性。炎性介質(zhì)可使靶細胞產(chǎn)生第二級炎性介質(zhì)，后者的作用可以與原介質(zhì)相同或相似，也可以截然相反。一種炎性介質(zhì)可作用于一種或多種靶細胞，其產(chǎn)生的效果取決于細胞和組織的類型。炎性介質(zhì)一旦被激活或由細胞釋放，存在的時間很短。大多數(shù)炎性介質(zhì)具有潛在的致?lián)p傷能力。主要炎癥介質(zhì)的作用功能主要炎癥介質(zhì)種類血管擴張組胺、緩激肽、前列腺素、NO血管通透性增高組胺、緩激肽、C3a、C5a、LTC4、LTD4、LTE4、PAF、活性氧代謝產(chǎn)物、P物質(zhì)趨化作用LTB4、C5a、細菌產(chǎn)物、中性粒細胞陽離子蛋白、IL-8、TNF發(fā)熱IL-1、IL-6、TNF、PG疼痛PGE2、緩激肽組織損傷氧代謝產(chǎn)物、溶酶體酶、NO抗炎免疫中藥的作用機制

興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)軸，促進腎上腺皮質(zhì)激素的釋放作用于細胞因子調(diào)節(jié)一氧化氮水平調(diào)節(jié)氧化應激/抗氧化平衡調(diào)控細胞內(nèi)信號傳導通路對基因轉錄環(huán)節(jié)的調(diào)控作用1，興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)軸，促進腎上腺皮質(zhì)激素的釋放

下丘腦-垂體-腎上腺軸促腎上腺皮質(zhì)激素分泌激素促腎上腺皮質(zhì)激素GC人參皂苷大鼠腹腔注射后，血漿內(nèi)皮質(zhì)酮和促腎上腺皮質(zhì)激素水平的升高相平行，提示其促進腎上腺皮質(zhì)激素分泌的始初部位可能在垂體前葉。人參皂苷在使血漿皮質(zhì)酮升高時腎上腺內(nèi)cAMP含量也相應升高，但于去垂體大鼠，人參皂苷則失去了升高腎上腺cAMP的作用，表明人參皂苷興奮腎上腺皮質(zhì)功能的作用必須通過垂體前葉，即首先釋放垂體前葉ACTH才能得以實現(xiàn)。柴胡皂苷能使腎上腺增重，胸腺萎縮，柴胡皂苷a，d能興奮垂體前葉分泌促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）促進腎上腺合成和分泌腎上腺皮質(zhì)激素；還能提高糖皮質(zhì)激素與其受體的親和力，進而增加糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。白芍總苷對正常大鼠的下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPAA）呈現(xiàn)小劑量興奮（血漿皮質(zhì)醇CS含量升高），大劑量抑制（血漿皮質(zhì)醇CS含量降低）的劑量依賴性調(diào)節(jié)作用。白芍總苷在降低束縛應激大鼠血漿CS、ACTH水平的同時，上調(diào)受抑制的大鼠脾淋巴細胞ConA增殖反應，提示白芍總苷的免疫調(diào)節(jié)作用可能與其調(diào)節(jié)HPAA的功能有關。青藤堿降低大鼠腎上腺維生素C的含量，切除大鼠腎上腺或垂體后，青藤堿的抗炎作用消失。黃褐毛忍冬總皂苷能使幼年大鼠胸腺萎縮，摘除雙側腎上腺后對大鼠角叉菜膠性足腫脹的抑制作用消失，也不能延長切除腎上腺幼年大鼠的生存時間，表明抗炎作用有賴于腎上腺的完整存在。云南白藥總苷給大鼠皮下注射15mg/kg，連續(xù)7天，可顯著降低腎上腺內(nèi)抗壞血酸含量，抑制幼年小鼠胸腺生長，提示其抗炎作用部分可能通過腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)產(chǎn)生。娑羅子皂苷5mg/kg腹腔注射一次給藥，可顯著降低清醒大鼠及戊巴比妥鈉麻醉大鼠腎上腺內(nèi)維生素C含量，表明本品通過刺激腎上腺皮質(zhì)發(fā)揮作用；給大鼠腹腔注射B-七葉皂苷5mg/kg可使血漿中的皮質(zhì)甾酮明顯升高，引起ACTH分泌增加，促進腎上腺皮質(zhì)甾酮的合成。雪蓮黃酮5mg/kg腹腔注射對去腎上腺大鼠蛋清性足腫脹無明顯抑制作用，致炎后4h后才表現(xiàn)出顯著性差異，提示抗炎途徑主要是通過腎上腺皮質(zhì)發(fā)揮作用。大鼠腹腔注射雪蓮黃酮可使大鼠腎上腺維生素C含量明顯減少，進一步證實該藥主要通過促進腎上腺皮質(zhì)功能而發(fā)揮抗炎作用。2，作用于細胞因子細胞因子是由多種細胞所分泌的能調(diào)節(jié)細胞生長分化、調(diào)節(jié)免疫功能，參與炎癥發(fā)生和創(chuàng)傷愈合等小分子多肽的通稱，包含白介素、干擾素、腫瘤壞死因子、轉化生長因子-β家族（TGF-β）等。它們由淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、上皮細胞等產(chǎn)生?，F(xiàn)已證實細胞因子在局部炎癥反應和免疫反應中起重要作用，IL-1,IL-6,IL-8和TNF等是公認的促炎癥細胞因子。機體在致炎因子的作用下，可引起多種細胞產(chǎn)生和釋放細胞因子，如IL-1、TNF-α、PGE2等，誘導iNOS生成，促進NO合成和釋放，這些因子互相影響，促進炎癥發(fā)展。當機體在重度感染時，腹腔巨噬細胞受到大量脂多糖刺激，產(chǎn)生大量的IL-1、IL-6、TNF等，它們相互誘生，相互協(xié)同。這些細胞因子的過量存在，進一步激活多形核白細胞和內(nèi)皮細胞等效應細胞，并釋放氧自由基、蛋白酶等，加速花生四烯酸代謝，釋放血栓素、前列腺素、白三烯等炎癥介質(zhì)，形成瀑布效應，導致過度炎癥反應。IL-1是由多種細胞合成和分泌的細胞因子，按其結構主要分為IL-1α和IL-1β兩種，后者為其主要分泌形式。IL-1與炎癥關系極為密切，它可使中性粒細胞聚集和發(fā)生急性反應，還可引起其他炎性因子的產(chǎn)生，可以通過誘導COX-2基因的表達，使前列腺素的分泌增加而參與介導炎癥和免疫反應。IL-1β不僅能夠協(xié)同其他細胞因子促進B、T細胞活化，而且能夠誘導其他炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，加強白細胞與內(nèi)皮細胞的粘附，調(diào)節(jié)TNF-α、IL-6的產(chǎn)生，屬于一種前炎性細胞因子。TNF是一種主要由單核細胞和巨噬細胞分泌產(chǎn)生的蛋白，可分為TNF-α和TNF-β兩大類。其中TNF-α可由感染、缺血和損傷誘導，屬于前炎癥細胞因子，具有廣泛的生物學功能。發(fā)生炎癥時，單核巨噬細胞能產(chǎn)生大量TNF-α和IL-1β，這兩種細胞因子具有許多相同的生物活性：如致熱作用、促進細胞分解代謝、產(chǎn)生急性反應期蛋白以及使內(nèi)皮細胞分泌NO、PGI2、PGE2和血小板活化因子等，這將導致炎癥面積的擴大以及炎癥介質(zhì)、破壞性酶類、自由基分泌的增加。IL-1β還可通過自分泌或旁分泌刺激其他炎癥介質(zhì)如IL-6,IL-8和TNF-α的產(chǎn)生。TNF-α則可使中性粒細胞聚集、內(nèi)皮細胞粘附分子上調(diào)以及增加上皮緊密連接的通透性和抑制上皮細胞的生長等。IL-1和TNF在炎癥中的主要作用細菌產(chǎn)物、免疫復合素、毒素、物理損傷、細胞因子巨噬細胞（其他細胞）激活內(nèi)皮細胞效應：促進白細胞粘著PG合成增多PAF合成增多凝血活性增高抗凝血活性下降IL-1分泌增多急性反應期：發(fā)熱、嗜睡、食欲不振急性期蛋白升高血液流變學改變中性粒細胞增多纖維母細胞作用：促進纖維母細胞增殖膠原合成增加膠原酶分泌增加蛋白酶分泌增加PGE合成增加IL-1/TNFA，對白細胞介素的影響：商陸皂苷甲對人外周血單核細胞產(chǎn)生的TNF有明顯的抑制作用，且能抑制LPS誘導的兔滑膜細胞產(chǎn)生的IL-1、和TNF，認為抑制IL-1、和TNF的產(chǎn)生可能是商陸皂苷甲強大抗炎作用的機制之一。青藤堿可抑制IL-2R的表達，從而阻斷IL-2信號傳導系統(tǒng)并改善類風濕性關節(jié)炎癥狀和體征，這可能是其治療該病的機制之一。雷公藤總苷可有效降低AA大鼠血清中細胞因子IL-1、IL-6，降低AA大鼠關節(jié)液中IL-1、IL-6、IL-8、TNF的含量，抑制AA大鼠腹腔巨噬細胞分泌的IL-1、IL-6、IL-8、TNF和脾淋巴細胞誘生的IL-6、IL-8的能力。B，促進干擾素生成：人參三醇型皂苷促進人頸部淋巴細胞-干擾素誘生，促進-干擾素基因表達伴有活性增強。黃芪多糖、人參多糖、柴胡多糖、刺五加多糖當歸多糖等均能誘生干擾素。C，對TNF的影響：白芍總苷對LPS誘導的大鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生的TNF具有雙向調(diào)節(jié)作用。另外白芍總苷可抑制原代培養(yǎng)的AA大鼠滑膜細胞過度分泌IL-1、TNF和PGE2等炎性細胞因子的能力，并使異?；罨幕ぜ毎毎蜃咏抵琳?。3，調(diào)節(jié)一氧化氮水平NO由NOS催化L-精氨酸與氧分子經(jīng)多步氧化還原反應而生成，具有活躍的生化性質(zhì)。NO在炎癥及其免疫機制中發(fā)揮雙重作用：它能顯著抑制細胞內(nèi)外微生物和腫瘤細胞的活性；同時它又介導細胞毒性。一般地說，組織中誘生型NO合酶（iNOS）在炎癥中被誘導生成，產(chǎn)生大量NO，促進炎癥反應，包括使血管舒張，形成水腫和局部紅斑，增加炎性滲出，細胞毒性以及細胞因子依賴過程的介導作用，促進敗血癥的發(fā)展，激活PG合成酶以及參與類風濕的發(fā)展等。相反的，由內(nèi)皮細胞中原生型NO合酶（cNOS）所產(chǎn)生的NO，則通過激活微血管中的中性粒細胞，抑制白細胞和血小板在內(nèi)皮細胞上的粘附，抑制淋巴細胞增殖，抑制巨噬細胞的氧化產(chǎn)物，而發(fā)揮其保護作用及抑制炎癥反應的作用。受到抗原、LPS以及某些細胞因子刺激時多種免疫活性細胞表達iNOS并產(chǎn)生大量NO，抑制特異性免疫反應，觸發(fā)免疫病理過程而造成組織損傷，調(diào)整NO水平有助于許多自身免疫疾病的治療。

雷公藤總苷對LPS激活的小鼠腹腔巨噬細胞的NO生成具有明顯的抑制作用，呈時間和劑量依賴關系，提示雷公藤總苷的抗炎及免疫抑制作用可能與其抑制巨噬細胞一氧化氮生成有關。白芍總苷50mg/kg治療7天上調(diào)佐劑性關節(jié)炎大鼠細胞低下ConA反應是其下調(diào)腹腔巨噬細胞NO等抑制介質(zhì)的結果；使佐劑性關節(jié)炎大鼠腹腔巨噬細胞NO、TNF產(chǎn)生降低或恢復，白芍總苷能使AA大鼠14、21、28d低下脾細胞增殖反應恢復正常，同時還使其過低的SOD活性增高或恢復正常。4，調(diào)節(jié)氧化應激和抗氧化平衡ROS和氧化應激：是一把“雙刃劍”，產(chǎn)生過多，作用不當?shù)拇_可以引起細胞凋亡和組織損傷，誘發(fā)多種疾病。但體內(nèi)還有強大的抗氧化系統(tǒng)，如超氧化歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PrX）等等，可以及時快速清除體內(nèi)過剩的ROS。在正常生理條件下，體內(nèi)氧化和抗氧化系統(tǒng)保持動態(tài)平衡，既保證正常氧化應激反應，又防止ROS對人體的危害。只有在ROS生成過盛，抗氧化酶表達不足，氧化和抗氧化平衡失調(diào)，ROS不能及時清除和體內(nèi)大量積蓄，才會引起細胞和組織的損傷，危害人體的健康。氧化和抗氧化的平衡和諧是健康的基礎。氧化應激和抗氧化不單純是一種生化反應，它更有著極其復雜的細胞和分子機制，包括膜氧化、線粒體代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、核的重構、DNA損傷修復、基因轉錄表達、泛素和泛素化、自吞和溶酶體、細胞外基質(zhì)、信號傳遞、蛋白折疊等多重的細胞和分子改變。它們還是體內(nèi)多種代謝和信號通路的啟動者和調(diào)節(jié)者，如JNK/SAPK、P38MAPK、IKK/NF-κB等；激活和調(diào)控各種轉錄因子，如AP-1、Nrf2、NF-κB、p53等，影響體內(nèi)各種基因的轉錄和表達，參與體內(nèi)炎癥、免疫、生殖、發(fā)育、代謝、細胞生長、增殖、細胞再生、修復等各種重要生命過程的調(diào)節(jié)。Nrf2（nuclearfactor-erythroid2-relatedfactor2）是調(diào)節(jié)機體氧化應激反應的關鍵轉錄因子，為鋅指蛋白轉錄因子家族的成員之一，在細胞調(diào)節(jié)轉錄反應、調(diào)控細胞對抗外來異物和氧化損傷中發(fā)揮重要作用。正常情況下，Nrf2定位于細胞質(zhì)中并與肌動蛋白結合蛋白Keap1相互作用，可被泛素蛋白酶體途徑迅速降解。當受到來源于活性氧的信號攻擊后，Nrf2從Keap1中解離，然后穩(wěn)定狀態(tài)的Nrf2轉位進入細胞核，與其它的bZIP蛋白結合成異二聚體，異二聚體通過與抗氧化反應元件（ARE）相互作用調(diào)控靶基因Ⅱ相酶的轉錄和蛋白表達，這些酶能夠保護機體免受毒性物質(zhì)（如致癌物、藥物代謝活化產(chǎn)物等）及一些活性氧的侵害。受到氧化沖擊時，Nrf2的激活和隨后的細胞保護基因的誘導可以恢復體內(nèi)氧化和抗氧化系統(tǒng)的平衡，其在細胞的防御保護中發(fā)揮重要作用。內(nèi)源性Nrf2參與炎癥反應與創(chuàng)傷修復，創(chuàng)傷后上皮細胞Nrf2有高表達，Nrf2缺失則炎性因子IL-1β、TNFα持續(xù)增高，創(chuàng)傷上皮修復期延長。Nrf2-Keap1系統(tǒng)在細胞抵御外源性或內(nèi)源性氧化應激的機制中有重要地位。目前認同的Nrf2激活機制包括Nrf2與Keap1的解偶連、蛋白酶對Nrf2的降解減弱、Nrf2磷酸化等。Nrf2缺失或激活障礙，會引起細胞對應激源的敏感性增高，與化學促癌的發(fā)生、炎癥修復進程延長、細胞功能障礙、細胞調(diào)亡等病變過程密切相關。Nrf2-ARE通路在氧化應激中的調(diào)控作用

5，調(diào)控細胞內(nèi)信號傳導通路

A，NF-κB信號傳導途徑1）NF-κB的功能

NF-κB是一種分布和作用均十分廣泛的真核細胞轉錄因子，功能性NF-κB結合序列存在于許多基因的啟動子和增強子中，故NF-κB可與許多基因上的啟動子區(qū)域的固定核苷酸序列結合而啟動基因轉錄，控制著細胞因子、粘附因子、生長因子、酶（COX-2、iNOS）、神經(jīng)肽等多種靶基因的表達，在機體的免疫應答、炎癥反應及細胞生長調(diào)控等方面發(fā)揮重要作用。靜止細胞中的NF-κB與IκB結合以非活性異寡聚體的形式存在于胞漿中。細胞受刺激后，由信號誘導激活的IκB激酶（IKK）引起IκBα蛋白第32位絲氨酸的磷酸化，磷酸化的IκB則由泛素蛋白在多個位點形成泛素化，泛素化后的IκBα被26S蛋白酶小體降解，暴露出Rel蛋白上的核定位信號NLS，NF-κB遂從三聚體上釋放出來，迅速移位入細胞核與靶基因上啟動子區(qū)特定的κB位點DNA序列發(fā)生特異性結合，從而啟動基因轉錄，蛋白質(zhì)合成。NF-κB在核內(nèi)與新合成的IκB結合后出核，進入胞漿，從而失活。NF-κB為氧化應激反應性轉錄因子，可被多種能引起胞漿IκB磷酸化或被體內(nèi)泛素/蛋白酶體系識別而降解的因素所激活，如過氧化氫、活性氧（ROS）、促炎性細胞因子TNF-α與IL-1β、氧自由基、細胞內(nèi)鈣增加、促T細胞和B細胞分裂劑、細菌、病毒及內(nèi)毒素等。其中ROS可能是激活IKK的共同第二信使，NF-κB的各誘導因素可能通過產(chǎn)生ROS激活IKK，使IκB快速磷酸化，此激活過程可在細胞受刺激后數(shù)分鐘內(nèi)完成。不同抗氧化劑均能抑制NF-κB活化，抑制粘附分子表達。2）.NF-κB活化調(diào)節(jié)與炎癥性疾病

NF-κB是前炎癥因子基因表達調(diào)節(jié)的關鍵成分之一，它誘導前炎癥細胞因子、趨化因子、粘附分子等的表達。NF-κB在多種炎癥性疾病的炎癥部位高度活化，如類風濕性關節(jié)炎、炎癥性腹瀉、多發(fā)性硬化癥、哮喘等。用NF-κB特異性抗體進行組織切片染色顯示核定位的NF-κB活性的增加，同時伴有炎癥細胞聚集的增加和前炎癥細胞因子如IL-1、IL-6、IL-8和TNF的合成。NF-κB的活化在體內(nèi)受到精細的調(diào)控,包括正負反饋調(diào)控途徑：(1)正反饋調(diào)節(jié)途徑：細胞受到前炎癥因子如TNF-α、IL-1刺激，經(jīng)過一系列信號轉導激活NF-κB，增強TNF-α、IL-1的轉錄，后者水平增高可進一步活化NF-κB，從而增強炎癥反應。(2)負反饋調(diào)節(jié)途徑：NF-κB激活的同時，IκBα和p105基因轉錄增強，IκBα和p105基因的順式作用元件中均含有NF-κB的結合序列，抑制成分增多，一方面與細胞漿中NF-κB二聚體結合，將其限制在細胞漿中，下調(diào)NF-κB活化水平，細胞因子轉錄被終止而限制炎癥反應；另一方面IκBα可連續(xù)穿梭于核質(zhì)間，將大量入核的活化NF-κB再次帶回胞漿，避免NF-κB的過渡活化。這兩種調(diào)節(jié)同時存在，NF-κB的狀態(tài)取決于占優(yōu)勢的調(diào)節(jié)方式。研究證實，通過IKβ亞單位的磷酸化，正負反饋調(diào)節(jié)IκB激酶活性。在哺乳動物細胞中，受TNF、IL-1等前炎癥因子刺激后,IKKβT環(huán)中二個Ser殘基的磷酸化是IKK活化的基礎。而將IKKα中二個Ser殘基消除，并不影響IKK的活化。因此,IKKβ是前炎癥刺激的靶單位。IKK一旦活化，IKKβ在C末端富含的Ser自動磷酸化，這種磷酸化可降低IKK活性，可防止炎癥反應的過渡，從而起到負反饋調(diào)節(jié)作用。NF-κB調(diào)節(jié)的蛋白包括細胞因子、趨化因子、生長因子、粘附分子、免疫受體、轉錄因子、氧化應激相關酶以及急性期蛋白等。眾多的研究表明NF-κB參與炎癥和免疫反應、某些疾病的病理產(chǎn)生、急性期反應、細胞周期控制與分化以及對病毒感染的反應等。所以NF-κB是非常重要的轉錄因子，與藥物研究有密切的關系。B，MAPK信號傳導通路絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是介導細胞反應的重要信號系統(tǒng)，普遍存在于多種生物，包括酵母和哺乳動物細胞，包括JNK、p38、ERK1等亞族。MAPK在介導炎癥反應和細胞因子生成中起著重要的作用，其中p38和ERK1通路與炎癥反應有著密切的關系。研究發(fā)現(xiàn)，ERK通路在某些生長因子刺激引起的細胞反應中起重要的調(diào)控作用，還參與應激刺激、細菌產(chǎn)物、炎癥介質(zhì)等引起的細胞反應；p38蛋白激酶可被促炎因子、應激刺激以及LPS等激活，在炎癥反應中起主要作用，炎癥刺激如LPS、TNF、IL-1等均可介導單核細胞、內(nèi)皮細胞和中性粒細胞等先天性免疫細胞中p38MAPK激活，單核/巨噬細胞表達TNF、IL-1、IL-6、IL-8和環(huán)加氧酶-2均依賴p38MAPK。LPS介導的細胞炎癥反應是一個典型的病原體與機體相互作用的過程。LPS刺激細胞能夠激活ERK、JNK和p38，然后作用于各自的底物，影響多種轉錄因子的活性，從而調(diào)節(jié)包括TNF、IL-1、IL-6、IL-8等多種細胞因子在內(nèi)的基因的表達。而TNF-α、IL-1、花生四烯酸(AA)產(chǎn)物、內(nèi)皮素等多種炎癥介質(zhì)能激活不同MAPK，通過促進或抑制基因的轉錄來調(diào)控其它炎癥介質(zhì)的生成。研究發(fā)現(xiàn)LPS可激活Raw264.7細胞p38，使其移位入核；p38激活入核后參與了LPS誘導的TNF-α基因轉錄表達的調(diào)控。ERK、JNK和p38通路都能被TNF-α強烈激活，通過對轉錄因子的作用而影響TNF-α的產(chǎn)生和生物學效應。IL-1也是參與炎癥反應的重要介質(zhì)。它在炎癥中的主要作用包括刺激其它炎癥介質(zhì)，如TNF-α、IL-6、IL-8和PGs等的釋放、激活T和B淋巴細胞。增加粘附分子的表達、刺激急性期蛋白的生成和釋放等。有報道，IL-1β能通過激活p38而上調(diào)PGE2和下調(diào)NO的合成。AA代謝產(chǎn)物前列腺素(PGs)和白三烯類(LTs)在促進炎癥的過程中起重要作用。ERK1/2激活可誘導COX-2生成，限制氧化應激對心肌細胞的損傷。COX是PG合成的限速酶，經(jīng)典抗炎藥水楊酸類通過抑制其活性而減少PG的產(chǎn)生，抑制炎癥反應。P38通路和JNK通路激活后能上調(diào)IL-1β誘導的COX表達，使PGE2合成增加，利用p38抑制劑能完全抑制這種作用。研究發(fā)現(xiàn)，ERK信號途徑參與了LPS介導的人內(nèi)皮細胞iNOS表達和NO產(chǎn)生。用ERK的特異性抑制劑處理細胞后可以顯著抑制LPS誘導人內(nèi)皮細胞ERK的活性。與對照組相比，LPS刺激后的ECV304細胞iNOS蛋白和mRNA的表達明顯增加，培養(yǎng)基中NO水平也顯著升高，用ERK抑制劑預處理細胞后，可顯著抑制細胞iNOS表達和NO和產(chǎn)生。研究表明，在LPS誘導的人內(nèi)皮細胞內(nèi)，p38MAPK可在轉錄和翻譯水平上快速調(diào)節(jié)iNOS的表達。在小鼠內(nèi)毒素血癥模型中，發(fā)現(xiàn)在p38MAPK參與內(nèi)毒素性休克，iNOS在肺組織的表達最快、最顯著，提示在多器官功能障礙綜合癥的發(fā)生中肺是起始器官，p38MAPK和iNOS參與多器官功能障礙綜合癥過程中的起始反應。NF-κB在調(diào)節(jié)慢性炎癥疾病中粘附分子、酶和細胞因子的轉錄中起重要作用。p38MAPK能活化NF-κB。研究發(fā)現(xiàn)p38MAPK特異性抑制劑可以抑制NF-κB依賴的轉錄過程。在中性粒細胞中,高泳動類蛋白1(HMGB1)活化p38MAPK，從而增加NF-κB的核轉移和致炎因子的表達；然而，NF-κB亞單位的磷酸化、核轉移和NF-κB與DNA結合不受p38MAPK抑制劑的影響。這說明NF-κB和p38MAPK通過獨立的效應通路活化，可能在細胞核內(nèi)有共同的下游通路。研究發(fā)現(xiàn)單獨使用ERK抑制劑或p38MAPK抑制劑，僅能部分降低LPS刺激的肺泡巨噬細胞因子IL-6和TNFmRNA表達，而聯(lián)合使用則能降低細胞因子基因表達，使之接近正常水平。說明ERK和p38MAPK協(xié)同在LPS刺激的炎癥反應中發(fā)揮作用。

6，對基因轉錄環(huán)節(jié)的調(diào)控作用A，調(diào)控細胞因子mRNA的表達人參皂苷皮下注射，可逆轉IL-2、IL-2mRNA的受抑制狀態(tài)，使IL-2mRNA和IL-2蛋白含量顯著增加；人參三醇型皂苷對淋巴細胞分泌的IL-6有促進作用，是通過對IL-6mRNA轉譯的直接促進作用。B，影響核因子的結合活性明黨參多糖可顯著降低LPS刺激的NF-κB結合活性的升高，從而降低IL-1、TNF、IL-6等細胞因子表達，發(fā)揮抗炎抗應激作用。慢性炎癥致突變途徑示意圖雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮抗炎作用的機理研究楊偉鵬周鐘鳴中國中醫(yī)科學院中藥研究所前言野生雪蓮（國家三級保護植物）藥用價值高，資源有限，目前已瀕臨滅絕。雪蓮人工栽培周期較長，多年生，投入高，占用土地，受自然條件限制。雪蓮的細胞培養(yǎng)周期短（僅需12天），有效成份得率高（總黃酮含量是野生雪蓮的8~9倍）成本低。研究雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮抗炎作用機理，為開發(fā)我國有自主知識產(chǎn)權的新藥提供實驗方面的支持。研究內(nèi)容：1.野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮的藥效學研究2.野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體內(nèi)外炎癥介質(zhì)和細胞因子的影響3.雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對巨噬細胞凋亡的影響4.雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮抗炎作用的分子機制研究第一部分野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮的藥效學研究

表1野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對小鼠熱刺激甩尾的影響（x±s），n＝10組別劑量

(mg/kg)鎮(zhèn)痛率（％）

0.5h

1h

2h

4h對照組

-16.5±25.5-1.54±21.5-2.02±14.5-4.59±16.1安痛定10ml/kg71.4±74.9**59.1±44.3**70.2±23.4**11.7±33.4培養(yǎng)總黃酮

4038.9±20.8**46.5±20.8**64.9±30.1**40.3±43.4*

2036.4±24.6**48.6±32.9**70.1±51.9**20.5±24.1*

1044.6±89.340.4±54.8*34.5±52.512.4±43.3野生總黃酮

4040.0±42.2**59.7±26.3**41.9±44.8*28.0±39.7*

2032.3±28.7**37.3±33.5**19.3±26.4*15.6±23.5*

1028.0±33.2**24.7±28.5*52.8±56.3*14.0±32.3注：與對照組比較：*P<0.05,**P<0.01圖1野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對小鼠耳廓腫脹的影響與模型組相比**P<0.01圖2野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對大鼠角叉菜膠足腫脹的影響與模型組相比**P<0.01圖3野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對小鼠脾臟B淋巴細胞增殖的影響與溶劑對照組相比，*P<0.05，**P<0.01圖4野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對小鼠脾臟T淋巴細胞增殖的影響與溶劑對照組相比**

P<0.01野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮都具有鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫抑制的作用，二者在鎮(zhèn)痛、抗炎和免疫抑制作用上沒有顯著性差別。第二部分野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體內(nèi)外炎癥介質(zhì)和細胞因子的影響

表2野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對致炎大鼠血清IL-1含量的影響(x±s)注：與模型組相比，**P<0.01*P<0.05，以下同。組別動物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）IL-1含量(ng/ml)空白組10-0.36±0.20模型組10-0.43±0.11野生總黃酮940

0.14±0.06**820

0.17±0.13**培養(yǎng)總黃酮940

0.20±0.12**820

0.26±0.05**9100.31±0.18氫化可的松1025

0.29±0.14*表3野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對致炎大鼠血清NO含量的影響(x±s)組別動物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）NO含量（μmol/L）空白組10-2.26±0.61模型組10-6.61±2.26野生總黃酮9404.52±0.76*10205.54±1.6410105.13±1.08培養(yǎng)總黃酮10404.46±0.74*10204.11±1.73*10104.30±1.31*氫化可的松10253.24±1.00**表4野生雪蓮總黃酮、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對炎大鼠血清PGE2含量的影響(x±s)，n=10組別給藥劑量（mg/kg）PGE2含量（ng/ml）空白組-266.00±20.81模型組-294.90±27.2野生總黃酮40238.60±27.09**20272.30±22.59培養(yǎng)總黃酮40271.70±34.6520263.30±35.77*10260.40±20.13**氫化可的松25263.50±18.40**

野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮均能明顯抑制致炎鼠血清中的炎癥介質(zhì)NO、PGE2和炎性細胞因子IL-1的分泌而起到抗炎作用。野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮在抑制炎癥介質(zhì)和細胞因子的作用上無顯著性差異。野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對RAW264.7細胞IC50的測定。MTT法測定野生、培養(yǎng)雪蓮總黃酮的IC50，結果如圖：得到野生雪蓮總黃酮的IC50＝0.4377mg/ml.、雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮的IC50＝0.8999mg/ml。圖5MTT法測定IC50

表5野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體外培養(yǎng)巨噬細胞分泌NO含量的影響(x±s)，n=3組別給藥劑量（g/ml）NO含量（μmol/L）抑制率（％）正常-5.940.33

LPS511.460.98△△

野生總黃酮43.84.410.33**61．521.95.490.30**52．110.96.840.55**40．35.57.290.69**36．42.78.830.51*22．91.48.630.51*24．7培養(yǎng)總黃酮904.730.59*58．7457.230.59**36．922.57.990.48*30．311.29.110.77*20．55.611.581.73

-2.811.650.59

-注：模型組與對照組相比△△P<0.01,給藥組與模型組相比，**

P<0.01*P<0.05，以下同。表6野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體外培養(yǎng)巨噬細胞分泌PGE2含量的影響(x±s)，n=3組別給藥劑量（g/ml）PGE2含量（pg/ml）抑制率（％）正常-1328.05386.46

LPS5

2535.17167.08△△

DMSO5l1459.47381.27

野生總黃酮43.81590.8298.9**37．321.92095.8178.21*17．310.9

1662.3242.24**34．45.5

1836.8344.63**27．52.71795.2279.5229．21.42079.45308.4618．0培養(yǎng)總黃酮452001.0130.52*21．122.5

1700.23291.20*32．911.21789.3473.5429．45.62176.3323.5514．22.82186.8325.3613．8表7野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體外培養(yǎng)巨噬細胞分泌IL-1含量的影響(x±s)，n=3

組別給藥劑量（g/ml）IL-1含量（ng/ml）抑制率（％）正常-0.180.06

LPS5

0.440.08△△

野生總黃酮43.8

0.230.04*47．721.9

0.220.07*50．010.90.310.1029．55.5

0.100.01*77．32.7

0.180.08*59．11.40.320.0727．3培養(yǎng)總黃酮90

0.240.04*45．545

0.200.08*54．522.5

0.230.05*47．711.2

0.260.04*40．95.6

0.240.08*45．52.80.270.1038．6表8雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體外培養(yǎng)巨噬細胞分泌TNF含量的影響(x±s)，n＝6組別給藥劑量（g/ml）OD值抑制率（％）不含ACD

2.130.29

空白組

1.840.21

DMSO

1.770.16

LPS51.310.22△△

培養(yǎng)總黃酮451.500.12**41.322.51.370.2413.04.51.240.28-圖6雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對體外培養(yǎng)巨噬細胞分泌IL-6含量的影響注：模型組與溶劑對照組相比△△P<0.01,給藥組與模型組相比，**

P<0.01△△

野生雪蓮總黃酮和雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對LPS誘導的巨噬細胞產(chǎn)生的炎性介質(zhì)NO、PGE2以及炎性細胞因子IL-1具有顯著的抑制作用，二者無顯著性差異。雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對LPS誘導的巨噬細胞產(chǎn)生的TNF、IL-6也有顯著的抑制作用。第三部分雪蓮細胞培養(yǎng)物總黃酮對巨噬細胞凋亡的影響ABDEF實驗結果表明，1μg/ml、0.1μg/mlLPS雖可促進巨噬細胞發(fā)生凋亡，但并沒有顯示出顯著性差異，而吲哚美辛和雪蓮總黃酮均可在LPS存在的基礎上進一步顯著促進巨噬細胞發(fā)生凋亡和壞死。圖7Raw264.7細胞流式細胞術檢測結果（LPS1