感染性疾病實驗室診斷

關(guān)于感染性疾病實驗室診斷第1頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

第一節(jié)概述感染性疾?。翰≡w宿主疾病病原體（細菌、真菌、病毒、寄生蟲）第2頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三一、當今感染病的特點1感染性病原體的種類不斷發(fā)生變遷2宿主的免疫防御能力下降3內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加第3頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三二、感染類型（一）按病原體分類

1.傳統(tǒng)病原體感染細菌：病毒：真菌：寄生蟲2.新發(fā)病原體：

SARS冠狀病毒新甲型H1N1流感病毒高致病性禽流感病毒第4頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三(二）按疾病特征分類1.病原體被清除2.隱性感染(covertinfection)，亦稱亞臨床感染一般占人群的90％或以上3.顯性感染(overtinfection)又稱為臨床感染發(fā)病快慢和病程長短：急性感染和慢性感染感染部位及性質(zhì)：局部感染和全身感染全身感染：①菌血癥②敗血癥③毒血癥④膿毒血癥第5頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三(三）按病原體來源外源性感染內(nèi)源性感染第6頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三三、感染性疾病的實驗診斷（一）一般實驗檢測

WBC常規(guī)檢查

C-反應(yīng)蛋白（CRP）血清降鈣素原（PCT）器官功能改變的檢測第7頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（二）病原學實驗診斷

臨床病原體檢查目的

明確感染病原體指導治療，預(yù)防，判斷預(yù)后第8頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三第二節(jié)感染性疾病的常用病原學檢測病原學檢測基本程序①正確、規(guī)范采集和運送標本②顯微鏡對標本或組織中的病原體的形態(tài)學檢查③病原體的分離培養(yǎng)和鑒定④用免疫學技術(shù)對病原體抗原或相應(yīng)抗體的檢測⑤用分子生物學方法對病原體特異性基因的檢測第9頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三一、臨床標本的采集與處理

（一）標本采集的一般原則

1.早期病程早期、急性期或癥狀典型時使用抗生素前

2.無菌采集應(yīng)無污染，嚴格進行無菌操作采集的標本均應(yīng)盛于無菌容器內(nèi)

3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

4.適量標本,不同病程采集不同部位標本

5.安全采集做好標記第10頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（二）標本的處理

原則：保持病原體活力，保持標本不被污染，也不污染環(huán)境1.盡快送檢對環(huán)境敏感的細菌應(yīng)保溫立即送檢,其他所有采集后最好在2小時內(nèi)送檢,不能及時送檢,應(yīng)注意保存2.必須注意安全防護,切勿污染環(huán)境3.厭氧性標本應(yīng)放在專門的運送瓶或試管內(nèi)運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送第11頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

二、檢驗方法查病原體：形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查分離培養(yǎng)和鑒定檢測病原體成分（抗原和核酸）檢測患者血清中特異性抗體代謝產(chǎn)物（生化試驗）毒素：外毒素、內(nèi)毒素第12頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（一）直接顯微鏡檢查（形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查）

1.染色標本檢查法

染色標本：了解病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細胞內(nèi)包涵體臨床意義：

1.鏡檢可以了解有無病原體及大致的量

2.根據(jù)細菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對病原體的初步識別和分類

3.通過形態(tài)學檢查可得到初步診斷，對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義如CSF找到抗酸桿菌，應(yīng)初步考慮結(jié)核分枝桿菌感染第13頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

革蘭陽性

革蘭陰性

抗酸染色第14頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

培養(yǎng)在McCoy細胞的沙眼衣原體吉姆薩染色的McCoy細胞，含大衣原體包涵體，使部分細胞核不清楚。（吉姆薩染色,放大1000倍）

狂犬病毒可于細胞漿中可形成嗜酸性包涵體第15頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）革蘭染色

墨汁負染

第16頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2.不染色標本

1)檢查生活狀態(tài)下細菌的動力及運動狀況2）螺旋體由于不易著色并有形態(tài)特征

對某些病原菌作出初步鑒定，如霍亂弧菌

常用方法壓片法(壓滴法)或懸滴法暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查第17頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三體癬皮屑可見關(guān)節(jié)孢子第18頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三HAVparticlesfoundinfecalextractsbyimmunoelectronmicroscopy

HAV形態(tài)電鏡圖

糞便標本負染X2000003.直接電鏡檢測EM

免疫電鏡技術(shù)IEM第19頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（二）分離培養(yǎng)和鑒定

分離培養(yǎng)是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)臨床意義：1.明確感染病原體2.為臨床提供體外抗微生物藥物敏感試驗結(jié)果第20頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三藥物敏感試驗標本培養(yǎng)特征形態(tài)特征生化試驗血清學試驗毒力試驗普通瓊脂平板？血平板？選擇培養(yǎng)基？1.細菌的分離培養(yǎng)和鑒定第21頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三培養(yǎng)特征第22頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三細菌學診斷形態(tài)特征血清學鑒定第23頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三大腸埃希菌對照-吲哚試驗枸椽酸鹽利用試驗大腸埃希菌甲基紅試驗VP試驗大腸埃希菌大腸埃希菌對照-對照+對照+生化試驗第24頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三一）病毒分離培養(yǎng)

1．動物接種（二）病毒的分離與鑒定2．雞胚培養(yǎng)卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種尿囊接種及羊膜腔接種敏感動物合適部位第25頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三3．組織細胞培養(yǎng)：

目前培養(yǎng)病毒應(yīng)用最廣的方法

（1）原代和次代細胞培養(yǎng)

（2）二倍體細胞培養(yǎng)

（3）傳代細胞培養(yǎng)

第26頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

識別病毒在培養(yǎng)細胞中增殖

病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標

1）細胞病變:細胞病變效應(yīng)（CPE）、包涵體

2）紅細胞吸附（hemadsorption）

細胞病變效應(yīng)（CPE）：

病毒感染細胞后引起的細胞病變，可出現(xiàn)細胞圓縮、裂解或細胞腫大、數(shù)個細胞融合成多核巨細胞等。二）病毒鑒定第27頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三Cytopathiceffect(CPE)ofprimarysevereacuterespiratorysyndrome–associatedcoronavirusstrain48h

72h

36h

N

第28頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三第29頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三病毒學診斷

常用鑒定試驗：

中和實驗血凝抑制實驗第30頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三virus第31頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

紅細胞凝集抑制（HI）試驗原理：病毒病毒（特異性抗體）

++

紅細胞紅細胞凝集不凝集血凝現(xiàn)象血凝抑制現(xiàn)象第32頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三ConfocalimageshowingamacrophageinthelungofamouseinfectedwithSARS-coronavirus.DoubleimmunofluorescencelabelsthemacrophageinredwithantibodiesagainstMac-2andviralproteiningreenwithantibodiesagainstspike.第33頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

（三）真菌的分離培養(yǎng)

－常用培養(yǎng)基沙保（Sabourud）培養(yǎng)基真菌的菌落有兩種：酵母型菌落和絲狀菌落酵母型菌落絲狀菌落第34頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）第35頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（三）鑒定1.糖(醇)類發(fā)酵試驗37℃孵育，觀察糖發(fā)酵情況。2.同化碳源試驗含菌生理鹽水與已融化的固體同化碳源培養(yǎng)基(45℃)混合，然后在培養(yǎng)基上分別加糖，置25℃孵育觀察結(jié)果。若24h后無變化可重復加糖。如能同化周圍有生長圈，否則無生長。

3.同化氮源試驗同化碳源試驗相同，但需用無氮源的培養(yǎng)基，不要加糖類，而加入硝酸鉀。第36頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

檢測程序第37頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（三）病原體抗原與抗體的檢測病原體抗原成分的檢測：早期診斷現(xiàn)癥感染特異性IgM：早期診斷現(xiàn)癥感染特異性IgG：雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體現(xiàn)癥感染*排除交叉反應(yīng)的影響第38頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三夾心ELISA(檢測抗原）第39頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三間接ELISA(檢測抗體）第40頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（四）病原體核酸檢測

1．核酸雜交技術(shù)通過已知序列的探針與病原體的核苷酸雜交，用以了解病原體的有無。

Southern印跡雜交（Southernblot）

Northern印跡雜交（Northernblot）斑點雜交（dotblot）原位雜交（insituhybridization,ISH）

2．PCR擴增病原體微生物特異的DNA或RNA片段

常用于檢測不能在體外培養(yǎng)或目前的培養(yǎng)技術(shù)不敏感、費用高昂或耗時長的病原體第41頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三核酸分子雜交(nucleicacidmoleculahybridization)genomeprobe32P35S3H125I生物素地高辛酶genomegenomegenomeprobeprobeprobe檢測方法：放射自顯影底物顯色化學發(fā)光第42頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2．PCR

第43頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三3.生物芯片技術(shù)

第44頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

核酸檢測結(jié)果評價檢測病原體微生物最靈敏的方法早期診斷現(xiàn)癥感染假陽性與假陰性第45頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

（五）細菌毒素的檢測

1.內(nèi)毒素的測定

常用方法：鱟試驗（limulustests）

內(nèi)毒素與鱟試劑接觸時，可激活凝固酶原，使可溶

性的凝固蛋白原變成凝膠狀態(tài)的凝固蛋白

內(nèi)毒素(鱟試劑)

凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白(凝膠)第46頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2.外毒素的測定（1）體內(nèi)毒力試驗

細菌外毒素對機體的毒性作用，可被相應(yīng)抗毒素中和，若先給動物注射抗毒素，然后再注射外毒素，則動物不產(chǎn)生中毒癥狀。第47頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

（2）體外毒力試驗

以細菌外毒素的特異性免疫血清為抗體與被檢細菌外毒素(抗原)進行抗原抗體反應(yīng)，來檢測外毒素，從而鑒定細菌是否產(chǎn)生該種毒素。白喉棒狀桿菌的Elek平板毒力測定（３)免疫學方法：如ELISA法

葡萄球菌腸毒素、腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌LT及ST等的測定

（4）分子技術(shù)第48頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三Elek平板試驗ElekTest沉淀線(陽性)含白喉抗毒素濾紙片白喉桿菌菌苔標準產(chǎn)毒株第49頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三(六）體外抗菌藥物敏感試驗常用方法紙片擴散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗法（Etest）殺菌試驗體外聯(lián)合藥物敏感試驗

第50頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

第三節(jié)常見感染性疾病的實驗診斷第51頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

一、血流感染（一）引起血流感染常見微生物與常見疾病常見微生物革蘭陽性球菌：葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌革蘭陰性桿菌：大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、沙門菌真菌：病毒：HBV、HCV血流感染常見疾病細菌：菌血癥、敗血癥、膿毒血癥真菌：真菌血癥病毒：病毒血癥第52頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三(二)血流感染的病原學檢查1.血液標本采集與運送采血時間：寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5~1hr24小時內(nèi)采集2~3次采血量：成人5~10ml，嬰兒和兒童為1~2ml運送：血液置于含抗凝集聚茴香腦磺酸鈉無菌瓶中送檢第53頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三血液標本的采集方法第54頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2、細菌學檢驗（1）檢驗程序bloodaerobiccultureanaerobiccultureBacteriagrowthBacteriagrowthProcedureforbacterialdetectioninbloodDirectmicroscopicexaminationCulture(BA)colonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestDirectmicroscopicexaminationCulture(BA)anaerobicculturereportFirstreportEndotoxindetection第55頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（2）臨床意義陽性—確診血流感染陰性：培養(yǎng)7天，未見細菌生長注意區(qū)分致病菌和污染菌第56頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2、真菌學檢驗（1）檢驗程序bloodaerobiccultureBacteriagrowthProcedureforfungaldetectioninbloodDirectmicroscopicexaminationCulture(SabouraudagarorCHROMagar)colonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestPNA-FISHPCRreportFirstreportSerologicaldetection第57頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（2）臨床意義初報：增菌培養(yǎng)——真菌孢子終報：分離培養(yǎng)鑒定——菌株協(xié)助診斷：β-D-1,3葡聚糖（BDG）半乳甘露聚糖（GM）第58頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三二、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（一）引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見微生物與常見疾病常見微生物腦膜炎奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌新生隱球菌、假絲酵母菌乙型腦炎病毒，單純皰疹病毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見疾病腦膜炎、腦炎、腦膿腫第59頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（二）中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送腦脊液臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于無菌容器中腦脊液應(yīng)立即保溫送檢或床邊接種，不能暫時保存于冰箱中第60頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2.細菌學、真菌學檢驗（1）檢驗程序CSFBacteriacultureProcedureforbacterialandfungaldetectioninCSFGramstainSabouraudagarcolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportMakesmears(centrifuge)Acid-faststainInkstainfungalcultureBA,CA,MAC,L-J第61頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（2）臨床意義正常腦脊液：無菌直接涂片檢查：初報

G染色、抗酸染色、墨汁負染色分離培養(yǎng)鑒定：（+）確診第62頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三協(xié)助診斷3、病毒學檢查：

抗原抗體核酸第63頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三三、呼吸系統(tǒng)感染（一）引起呼吸系統(tǒng)感染常見微生物與常見疾病

上呼吸道感染：病毒性感染（主）:鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒、流感和副流感病毒、呼吸道合胞病毒、埃可病毒、柯薩奇病毒細菌性感染（20％）：白喉棒狀桿菌、百日咳鮑特菌乙型溶血性鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌肺部感染：肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、假絲酵母菌、肺炎衣原體、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒第64頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（二）呼吸系統(tǒng)感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送呼吸道標本類型：鼻咽拭子、痰和經(jīng)氣管采集的標本上呼吸道存在正常菌群，在采集標本與結(jié)果分析時應(yīng)予考慮第65頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2.細菌學、真菌學檢驗（1）檢驗程序Sputum,bronchallavage,transtrachealaspirateSpecimenprocessingProcedureforbacterialandfungaldetectioninsputum,bronchallavage,transtrachealaspiratecolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportEyeobservationBA,CA,MAC,L-J,Sabouraudagarstainofsmearandmicroscopicexamination第66頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（2）臨床意義肉眼觀察痰性狀：鐵銹色痰-肺炎鏈球菌直接涂片鏡檢：抗酸桿菌-結(jié)核分離培養(yǎng)鑒定：確診第67頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三3、病毒學檢驗：分離培養(yǎng)免疫學檢測分子技術(shù)第68頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三

四、胃腸道感染

（一）引起胃腸道感染常見微生物與常見疾病

胃腸炎、腸炎、結(jié)腸炎：

霍亂、傷寒、菌痢

侵襲性：沙門菌、志賀菌、彎曲菌、致病大腸埃希菌、

耶爾森菌、副溶血弧菌

毒素性：霍亂弧菌、致病大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、

產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難芽胞梭菌

病毒：輪狀病毒

真菌：白色假絲酵母菌、曲霉菌第69頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三二）胃腸道感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送糞便標本自然排便，挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢；液體糞便則取絮狀物，一般取1～3ml排便困難者，采用直腸拭子采集傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢3次第70頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2、細菌學檢驗（1）檢驗程序Stool,rectalswab,foodandwateranaerobicculturemicroaerobiccultureEnrichmentbroths,SFbroth,GNbrothProcedureforbacterialdetectioninstool,rectalswab,foodandwaterWetmountsDirectmicroscopicexaminationcolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportIsolationcultureSelectivemedium(MAC,SS,TCBS)第71頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三（2）臨床意義直接涂片：一般不做除外：疑為霍亂弧菌、彎曲菌感染以及腸結(jié)核、偽膜性腸炎胃粘膜活檢標本：幽門螺桿菌分離培養(yǎng)鑒定：直接涂片革蘭染色菌群調(diào)查：抗生素相關(guān)腹瀉細菌毒素檢測病毒學檢查：第72頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三五、泌尿系統(tǒng)感染（一）引起泌尿系統(tǒng)感染常見微生物與常見疾病上尿路感染（輸尿管炎、腎盂腎炎）下尿路感染（膀胱炎、尿道炎）大腸埃希菌、變形桿菌、腸球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、假絲酵母菌第73頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三二）泌尿系統(tǒng)感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送應(yīng)注意無菌操作取清潔中段尿，排尿困難者可導尿厭氧培養(yǎng)采用膀胱穿刺法、無菌厭氧小瓶運送第74頁，共81頁，2022年，5月20日，19點19分，星期三2、細菌、真菌學檢驗（1）檢驗程序Clean-catchmidstreamurinestainofsmearandmicroscopicexaminationIsolationbacterialcultureEIAFIAIsolationfungalcultureProcedurefo