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試驗五

GUS染色檢測基因瞬時表示王歡歡二零一二.九實驗五gus染色檢測基因瞬時表達第1頁匯報基因gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因）是當前轉基因植物中應用最為廣泛匯報基因。β-葡萄糖苷酸酶是一個水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯類物質為底物，其反應產物能夠用各種方法檢測出來。絕大多數(shù)植物沒有葡萄糖苷酸酶背景活性，所以gus作為匯報基因廣泛應用在植物基因工程中。標識基因為gus慣用商業(yè)載體：pBI121實驗五gus染色檢測基因瞬時表達第2頁組織化學法檢測

以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作為反應底物，將被檢材料用含有底物緩沖液浸泡。若組織細胞被轉入了gus基因，并表示出Gus，適宜條件下，該酶就可將X-Gluc水解生成藍色產物。這是由其初始產物經氧化二聚作用形成靛藍染料，它使具Gus活性部位或位點展現(xiàn)藍色，用肉眼或在顯微鏡下可看到，且在一定程度下依據染色深淺可反應出Gus活性。所以利用該方法可觀察到外源基因在特定器官、組織，甚至單個細胞內表示情況。gus基因轉擬南芥GUS檢測結果實驗五gus染色檢測基因瞬時表達第3頁Gus染色

將擬南芥幼苗或成年植株組織浸泡于染色緩沖液中，置于真空罐中0.5Mbar抽真空10min，使染液充分滲透到組織內部，然后置于37℃浸泡過夜。移去染液，用0.1mol/L磷酸緩沖液(pH7.0)沖洗2-3次。再用70%乙醇脫色，更換乙醇2-3次，統(tǒng)計并拍照。

侵染后煙草葉片和注射煙草葉片也用一樣方法處理實驗五gus染色檢測基因瞬時表達第4頁瞬時表示與穩(wěn)定表示W38侵染葉片NB侵染葉片NB侵染下胚軸NB注射葉片擬南芥1擬南芥2擬南芥3擬南芥4擬南芥5瞬時表示穩(wěn)定表示實驗五gus染色檢測基因瞬時表達第5頁試驗匯報實驗目實驗原理（簡略寫）實驗方法實驗結果及分析（最重要）思考題（最后一

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