淺論豬鏈球菌病的鑒定及中草藥體外抑菌試驗(yàn)

1、淺論豬鏈球菌病的鑒定及中草藥體外抑菌試驗(yàn)摘要豬鏈球菌病是豬的一種常見傳染玻采集了疑似豬鏈球菌感染致死豬的脾和肝樣本,對(duì)豬鏈球菌病進(jìn)展了病原別離、微生物學(xué)檢查及中草藥體外抑菌試驗(yàn)。結(jié)果說明,黃連醇提物的抗菌活性最強(qiáng);仙鶴草、地錦草醇提物抗菌活性較強(qiáng);金銀花醇提物抗菌活性較弱。關(guān)鍵詞豬鏈球菌;別離鑒定;中草藥;體外抑菌論文聯(lián)盟網(wǎng)豬鏈球菌病是一種常見傳染病,目前該病呈明顯上升趨勢1。豬鏈球菌病發(fā)病急、病程短、死亡率高,臨床上以哺乳仔豬和剛斷奶仔豬發(fā)病率、死亡率高,大豬發(fā)病率較少。大量使用抗生素進(jìn)展治療,往往會(huì)導(dǎo)致多重超強(qiáng)耐藥菌株出現(xiàn)和抗生素殘留。由于耐藥性的產(chǎn)生,使許多抗生素在臨床上失效,造成治療失

2、敗,導(dǎo)致疾病的爆發(fā)流行及死亡和醫(yī)療費(fèi)用的增加。鑒于此,從傳統(tǒng)中草藥中挑選出有效的抗鏈球菌藥物符合食品平安和公共衛(wèi)生平安的需要。1材料與方法1.1試驗(yàn)材料病料為疑似豬鏈球菌感染致死的脾和肝樣本。供試試劑:染色液、常規(guī)試劑,由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室自制;板藍(lán)根、金銀花、黃連、懷菊花、地錦草、馬齒莧、仙鶴草,均購于山東省醫(yī)藥藥材公司。試驗(yàn)動(dòng)物為安康小鼠,均為22g左右,由青島藥品檢驗(yàn)檢疫局提供。1.2試驗(yàn)方法1.2.1細(xì)菌學(xué)檢查。在無菌條件下取病死豬的肝和脾,用滅菌的接種環(huán)插入組織中,取少量組織或液體涂片,枯燥、火焰固定后進(jìn)展革蘭氏染色后鏡檢2。1.2.2生化及生長試驗(yàn)。將別離出的純培養(yǎng)菌株接

3、種在血清瓊脂培養(yǎng)基上,37培養(yǎng)24h后,取鮮血瓊脂平板上發(fā)生溶血的典型菌落進(jìn)展各種常規(guī)生化試驗(yàn)和鑒別生化試驗(yàn):分別接種于葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、木糖、山梨醇、菊糖等培養(yǎng)基上觀察是否產(chǎn)酸;將別離菌株分別接種在上述培養(yǎng)基中進(jìn)展生長試驗(yàn)。1.2.3動(dòng)物致病性試驗(yàn)。安康小鼠10只,隨機(jī)分為2組,每組5只,其中試驗(yàn)組用別離的24h肉湯純培養(yǎng)菌株腹腔注射5只小鼠,0.5l/只;另外一組注射無菌生理鹽水作對(duì)照,0.5l/只。觀察其死亡和發(fā)病情況,并對(duì)死亡小鼠進(jìn)展細(xì)菌別離。1.2.4中草藥體外抑菌試驗(yàn)。醇提物的制備:將藥材分別粉碎,稱取各中藥粉末10g,以75%乙醇回流提取2次,每次1.5h;合并提取液,

4、揮干溶劑后即為中藥醇提物。將醇提物用甲醇溶解,蒸餾水稀釋至含生藥1g/l,流通蒸汽滅菌30in,置冰箱4保存。待測菌制備:將菌種接種于lb培養(yǎng)基上,37培養(yǎng)24h復(fù)壯;再接種于lb培養(yǎng)基,37培養(yǎng)18h(10個(gè)/l),待用。采用試管2倍稀釋法,按文獻(xiàn)方法略加改進(jìn)測定最小抑菌濃度(i)。2結(jié)果與分析2.1細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)病料進(jìn)展涂片、染色鏡檢,可見革蘭氏陽性球菌呈成對(duì)或短鏈狀排列。血平板上有疑似菌落,較小,凸起,灰白色,較枯燥,光滑,邊緣整齊,周圍有透明溶血環(huán)。挑取鮮血瓊脂平板上的典型菌落,進(jìn)展革蘭氏染色、鏡檢?？梢姼锾m氏陽性球菌有的單在,有的呈雙球型,有的呈短鏈狀排列。2.2生化及生長試驗(yàn)別離細(xì)菌

5、在37下能生長,在10和45下均不能生長。別離菌生化試驗(yàn)結(jié)果見表1。2.3動(dòng)物試驗(yàn)在接種后3684h試驗(yàn)組和對(duì)照組呈現(xiàn)不同的病癥變化,其中試驗(yàn)組2只分別于接種48、72h后死亡,另外3只表現(xiàn)為食欲減退、精神沉郁,頜下淋巴結(jié)腫脹;剖檢革蘭氏染色鏡檢,發(fā)現(xiàn)有大量單個(gè)、成對(duì)或呈46個(gè)的短鏈革蘭氏陽性球菌。對(duì)照組未見異?，F(xiàn)象。2.4中草藥體外抑菌試驗(yàn)中草藥提取物對(duì)豬鏈球菌的i見表2。由表2可知,黃連醇提物的抗菌活性最強(qiáng),仙鶴草、地錦草醇提物抗菌活性較強(qiáng),金銀花醇提物抗菌活性較弱,馬齒莧、板藍(lán)根、懷菊花效果均不明顯。(上接第339頁)3結(jié)論與討論綜合臨床診斷、別離菌株的形態(tài)染色特性、培養(yǎng)特性、生化特性及動(dòng)物試驗(yàn),確診本次病原為豬鏈球菌3-6。中草藥的成分復(fù)雜,其抗菌作用可能是單一成分,也可能是幾種成分共同作用的結(jié)果。試驗(yàn)僅對(duì)7種中草藥的醇提物進(jìn)展了體外鏈球菌抑菌試驗(yàn),其中黃連醇提物的抗菌活性最強(qiáng),這些提取物往往是多種成分混合物